狄嘉嘉，楊畫

(1.東?？h中醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇 東海 222300；2. 佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院，廣東 佛山 528225)

0 引言

自2019年12月出現(xiàn)由新型冠狀病毒（2019-novel coronavirus，2019-nCOV）感染引起的新型冠狀病毒肺炎（COVID-19）之后,2019-nCOV 更是不斷發(fā)生變異，最新的變種病毒德爾塔(Delta)和奧密克戎(Omicron)已在全球肆虐[1-2]。COVID-19的具有一定的潛伏期，癥狀也并不明顯，多以發(fā)熱、乏力、干咳為主要表現(xiàn)，但有少量病患伴有鼻塞、腹瀉、流鼻涕等癥狀[3]。國(guó)家衛(wèi)健委在短期內(nèi)連續(xù)8次對(duì)診療方案進(jìn)行了修訂,這足以說明該病的診治難度之大[4]。早日接種疫苗，產(chǎn)生足量中和抗體已成為有效防控COVID-2019 疫情，減少危重癥病患和死亡率的關(guān)鍵?；诖耍瑖?guó)家對(duì)全民實(shí)施免費(fèi)的新冠疫苗接種，先后進(jìn)行了1 針劑初次接種、2針劑全程接種及現(xiàn)在的3 針劑加強(qiáng)接種。隨著全面疫苗接種的開展，來院就醫(yī)患者的2019-nCOV抗體的膠體金檢測(cè)法的陽(yáng)性率在不斷增加，但各個(gè)醫(yī)院所用的膠體金試劑盒的廠商并不完全相同，檢測(cè)結(jié)果的靈敏度具有一定差異，故給臨床醫(yī)生和患者帶來一定困擾。本研究通過評(píng)價(jià)本地區(qū)內(nèi)居民接種不同針劑次數(shù)的國(guó)產(chǎn)新型冠狀病毒（2019-nCOV）滅活疫苗后，不同廠家的膠體金法檢測(cè)試劑盒檢測(cè)2019-nCOV 免疫球蛋白M 抗體和免疫球蛋白G 抗體的性能指標(biāo)之間所存在差異，對(duì)其在低流行區(qū)的應(yīng)用與診斷效果進(jìn)行探討，從而為臨床醫(yī)生合理解讀檢驗(yàn)結(jié)果提供理論參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院在2020年6月至2021年12月收集的8000例血液標(biāo)本，其中男性4009例，女性3991例，年齡區(qū)間18-75 周歲成人，均值（32.21±4.08）歲。這些病例中，有2000例標(biāo)本為未接種篩查人群血液標(biāo)本（0 針劑組），2000例標(biāo)本為接種1 針劑初次接種人群的血液標(biāo)本（1 針劑組），2000例標(biāo)本為2 針劑全程接種人群的血液標(biāo)本（2 針劑組），剩下2000例標(biāo)本則為3 針劑加強(qiáng)接種人群的血液標(biāo)本（3 針劑組），本次研究得到了醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)，患者對(duì)研究的目的、方法和意義等均知情同意并簽字。

1.2 方法

本研究分別采用兩種國(guó)產(chǎn)2019-nCOV 抗體膠體金法檢測(cè)試劑盒：珠海麗珠公司（以下簡(jiǎn)稱麗珠）生產(chǎn)的2019-nCOV 抗體配套試劑盒和英諾特（唐山）公司（以下簡(jiǎn)稱英諾特）生產(chǎn)的2019-nCOV 抗體配套試劑盒，采集EDTA-K2抗凝全血（紫色管）或分離膠促凝血血清樣本（黃色管），測(cè)定指標(biāo)包含新冠IgM 和IgG 兩種抗體，兩種試劑盒均可進(jìn)行隨機(jī)陰陽(yáng)性篩查?？紤]到本地區(qū)在本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行期間是低流行區(qū)域，當(dāng)2019-nCOV 抗體中出現(xiàn)陽(yáng)性或弱陽(yáng)性結(jié)果時(shí)，應(yīng)用另一種2019-nCOV 試劑盒進(jìn)行復(fù)測(cè)，若兩種試劑盒同時(shí)顯示陽(yáng)性，則報(bào)給臨床2019-nCOV 抗體陽(yáng)性結(jié)果。本實(shí)驗(yàn)使用的（規(guī)格0-20uL）加樣槍和儀器由北京力辰科技有限公司提供；使用的MK450 離心機(jī)為邁克爾公司提供。所有樣本均是在清晨患者空腹情況下采集于黃色分離膠促凝管中，充分顛倒、混勻8 次，經(jīng)3500r/min 離心8min 獲得的血清。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

本次研究所有患者的臨床資料均采用Graphpad Prism.v6.0 統(tǒng)計(jì)軟件處理，計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)，P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。評(píng)價(jià)指標(biāo)：敏感度(%)=100×[真陽(yáng)性/(真陽(yáng)性+假陰性)]；特異度(%)=100×[ 真陰性/( 真陰性+ 假陽(yáng)性)]；錯(cuò)檢率=100%- 特異度；漏檢率=100%- 敏感度；正確率(%)=100×[( 真陽(yáng)性+ 真陰性)/ 檢驗(yàn)總樣本量]。

2 結(jié)果

2.1 2019-nCOV 抗體膠體金法檢測(cè)狀況

篩 選2020年6月 至2021年12月 收 集 的2019-nCOV 抗體有效檢測(cè)樣本8000例，使用麗珠試劑和英諾特試劑檢測(cè)各挑選8000例。其中男性4009例，女性3991例，年齡區(qū)間18-75 周歲成人，均值（32.21±4.08）歲。（見表1，2）麗珠試劑盒檢出陽(yáng)性2170例，男性1019例占比46.96%，女性1019例占比53.04%；英諾特試劑盒檢出陽(yáng)性2393例，男性1107例占比46.26%，女性1286例占比53.74%；統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，女性血清樣本較男性血清樣本的2019-nCOV 抗體的檢出率更高，這可能與抗體滴度或女性機(jī)體某些特意蛋白引發(fā)的交叉反應(yīng)有關(guān)。具體屬于哪一情況所致，尚需進(jìn)一步研究。此外，由表1 可以看出，在接種1 針劑時(shí)，英諾特試劑組陽(yáng)性標(biāo)本占比明顯高于麗珠試劑組，而在其他針劑組中標(biāo)本陽(yáng)性占比差別并不顯著。

表1 兩種2019-nCOV 抗體檢測(cè)試劑盒臨床標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果

統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，兩種檢測(cè)試劑盒的錯(cuò)檢率、漏檢率和正確率這3 項(xiàng)評(píng)價(jià)指標(biāo)相當(dāng)，而英特諾檢測(cè)試劑盒的敏感度和特異度稍高于麗珠檢測(cè)試劑盒，總體看來，兩種試劑盒具有較高的比對(duì)一致性。（見表2）

表2 兩種2019-nCOV 抗體檢測(cè)試劑盒對(duì)新冠診斷的效果評(píng)價(jià)(%)

3 討論

自新冠疫情爆發(fā)至今，全球已累計(jì)確診新冠肺炎病例4.3 億人，累計(jì)死亡病例約590 萬例。全球單日新增確診病例更是高達(dá)159 萬例，新增死亡病例近萬例。然而，最新的突變株Omicron 毒株已在全球190 多個(gè)國(guó)家流行，部分國(guó)家的感染率以突破70%，美國(guó)目前Omicron 的感染率已經(jīng)接近83%，突破免疫能力強(qiáng)大的Omicron 正在迅速引領(lǐng)全球新一波疫情[5]。盡管最新的研究顯示[6]，Omicron的毒力較此前的Delta 毒株毒力顯著減弱。2022年2月1 日，Nature 連續(xù)刊發(fā)了3 篇Omicron 的研究論文，均表明Omicron 病毒對(duì)肺以及部分臟器的損害明顯減輕。劍橋大學(xué)著名COVID-19 和HIV專家Gupta 研究證明[7]，與Delta 相比，Omicron 具有更高的親和力，并且抗原性發(fā)生了顯著變化，從而產(chǎn)生了顯著的免疫逃逸。但是第三劑mRNA 疫苗接種可以抵抗Omicron 的免疫逃逸；而且抗病毒藥物如Remdesivir 和Molnupiravir 依然對(duì)病毒明顯抑制效果。中國(guó)香港大學(xué)的研究人員得出了與Gupta 實(shí)驗(yàn)室研究類似的結(jié)論，他們研究發(fā)現(xiàn)[8]，相比其他新冠突變株，Omicron 在支氣管中的復(fù)制速度更快，但在肺實(shí)質(zhì)中的復(fù)制效率較低。日本北海道大學(xué)Sato 實(shí)驗(yàn)室則報(bào)道稱[9]，Omicron 細(xì)胞融合能力低于Delta 和原始野生型，另外Omicron S 蛋白的切割效率較低。他們?cè)趥}(cāng)鼠模型中，與Delta和原始野生型毒株相比，Omicron 顯示出肺炎減輕，致病力降低。但諸多研究數(shù)據(jù)表明[10]，部分罹患新冠病毒的病患在康復(fù)后的很長(zhǎng)一段時(shí)間里會(huì)持續(xù)存在著不同程度的后遺癥，有47%的康復(fù)者存在胸悶癥狀，14%的康復(fù)者出現(xiàn)反射性咳嗽癥狀，有2%的嚴(yán)重并發(fā)癥患者更是存在肺纖維化的現(xiàn)象。由此可見，盡管該病毒的變異株毒力在減弱，但傳播力和破壞力并未改變。因此，嚴(yán)密的防疫措施和積極注射疫苗，仍是我們國(guó)家較長(zhǎng)一段時(shí)間的主要防疫手段。

目前，中國(guó)疫苗接種總?cè)藬?shù)已達(dá)12.67 億，其中完成全程接種（2 針劑）12.31 億人；加強(qiáng)免疫接種（3 針劑）人數(shù)5.02 億，占總?cè)丝诒壤?5.6%，與英國(guó)已完成加強(qiáng)針比例55.3%相比，還有一定距離。特別是在60 歲以上人群，中國(guó)接種率較低，12 個(gè)省份接種率≤80%，目前60 歲以上人群不足30%進(jìn)行了加強(qiáng)免疫[11]。國(guó)家相關(guān)部門對(duì)疾控接種系統(tǒng)進(jìn)行了培訓(xùn)，將在目標(biāo)人群中開始異源接種，即序貫接種。國(guó)家對(duì)未來新冠病毒疫苗加強(qiáng)免疫接種提出了新的相關(guān)要求，新冠病毒疫苗接種工作繼續(xù)推進(jìn)基礎(chǔ)免疫和加強(qiáng)免疫。加強(qiáng)免疫方案有兩種：一是同源加強(qiáng)免疫接種，一是異源加強(qiáng)免疫接種(也稱“序貫加強(qiáng)免疫”)。所謂同源加強(qiáng)免疫，指加強(qiáng)免疫采用與基礎(chǔ)免疫同一技術(shù)路線的疫苗進(jìn)行接種，目前階段國(guó)內(nèi)實(shí)施滅活+滅活疫苗加強(qiáng)或腺病毒載體+腺病毒載體疫苗。所謂序貫加強(qiáng)免疫接種，是指接種與之前疫苗技術(shù)不同的疫苗，目前階段國(guó)內(nèi)可實(shí)施滅活+重組蛋白疫苗或滅活+腺病毒載體疫苗?，F(xiàn)有數(shù)據(jù)顯示，同源加強(qiáng)免疫接種和滅活疫苗-重組蛋白疫苗和滅活疫苗-腺病毒載體疫苗等序貫加強(qiáng)接種組合，均可以大幅提高受種者中和抗體水平，也具有較好的安全性。中國(guó)有必要推進(jìn)不同技術(shù)路線疫苗的序貫免疫，通過異源序貫免疫策略，優(yōu)化現(xiàn)有疫苗的組合和效力。由張文宏教授率領(lǐng)研究團(tuán)隊(duì)在《新生微生物與感染》刊發(fā)的一篇關(guān)于序貫接種對(duì)Omicron 效果的研究。該團(tuán)隊(duì)利用已接種兩針滅活疫苗的基礎(chǔ)，進(jìn)行同源加強(qiáng)和異源加強(qiáng)(序貫接種)的第三針，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在滅活疫苗同源第3 針加強(qiáng)接種14天之后，其血清中對(duì)疫苗原始野生株、Delta 株以及Omicron 株的中和抗體滴度分別提升到285.6、250.8 和48.73。倘若采用重組亞單位蛋白疫苗異源第3 針進(jìn)行加強(qiáng)接種2 周之后，血清中對(duì)原始野生株、Delta 株以及Omicron 株的中和抗體滴度分別提升到1436、1501 和95.86。這組數(shù)據(jù)提示，同源加強(qiáng)還是異源加強(qiáng)，都對(duì)變異株都有效，而且異源加強(qiáng)的效果更好。早在2021年8月8 日，國(guó)家藥監(jiān)局相關(guān)研究人員就發(fā)表過此類研究結(jié)果[12]，得出用異源疫苗加強(qiáng)免疫能有效提高滅活新冠疫苗的保護(hù)性免疫反應(yīng)，由此可見，異源接種可以進(jìn)一步提高對(duì)人體的保護(hù)。

眾所周知，病毒核酸檢測(cè)是診斷新冠肺炎的主要依據(jù)，但受多種因素的影響（包括機(jī)體病毒載量，實(shí)驗(yàn)室條件，檢測(cè)試劑質(zhì)量，標(biāo)本類型與質(zhì)量，以及檢測(cè)者因素等），存在假陰性結(jié)果可能，且核酸檢測(cè)耗時(shí)一般較長(zhǎng)[13]。一般情況下[14]，在感染或接種疫苗早期IgM 抗體會(huì)出現(xiàn)，在感染和接種疫苗的中晚期IgG 抗體才會(huì)出現(xiàn)，且滴度會(huì)持續(xù)增高，并在血液中長(zhǎng)期存在。因此，新冠病毒IgG 和IgM 抗體檢測(cè)有助于對(duì)患者的感染狀況及疫苗保護(hù)力做出快速判斷，同時(shí)也有助于核酸檢測(cè)結(jié)果陰性但具有臨床表現(xiàn)和影像學(xué)檢查表現(xiàn)的疑似患者的診斷有很大幫助。本研究正是基于此，對(duì)當(dāng)前我國(guó)居民的新冠疫苗接種后，不同針劑接種次數(shù)的人群抗體滴度做出研究和數(shù)據(jù)分析。最終證實(shí)2019-nCOV 抗體檢測(cè)快速、簡(jiǎn)單易操作、特異度高，應(yīng)作為新冠的快速篩查重要指標(biāo)；國(guó)產(chǎn)珠海麗珠和唐山英諾特的檢測(cè)試劑盒的特異度和正確率均較好，出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果時(shí)應(yīng)用另一種試劑盒進(jìn)行復(fù)測(cè)，可減少通報(bào)臨床的假陽(yáng)性率；另外，新冠抗體陽(yáng)性報(bào)告的應(yīng)用與分析應(yīng)結(jié)合本區(qū)域內(nèi)的流行狀況及臨床癥狀做出綜合判斷。