唐軍偉 彭洪 鄭和平 黃梅 龔磊 馬一丹 張燕

(南充市中心醫(yī)院 1.中西醫(yī)結(jié)合科；2.肛腸外科；3.胃腸外科，四川 南充 637000)

結(jié)直腸癌是胃腸道中常見(jiàn)的惡性腫瘤，其早期癥狀并不明顯[1-2]。在全球范圍內(nèi)結(jié)直腸癌發(fā)病率僅次于肺癌和胃癌位居第三。結(jié)直腸癌從癌前病變(腺瘤)發(fā)展到惡性病灶有一個(gè)較長(zhǎng)的過(guò)程，但是其具體發(fā)病機(jī)制尚不清楚，因此闡明結(jié)直腸癌的具體發(fā)病機(jī)制是一個(gè)亟待解決的問(wèn)題[3-5]。肌球蛋白主要存在于平滑肌中，是肌原纖維粗肌絲的主要組成成分，其分子形態(tài)如豆芽狀，由多條重鏈和多條輕鏈構(gòu)成[6]。肌球蛋白磷酸酶靶亞基1(Myosin phosphatase-targeting subunit 1，MYPT1)屬于哺乳動(dòng)物MYPT家族，其功能是調(diào)控亞細(xì)胞定位和底物特異性[7-8]。MYPT家族成員有多個(gè)共同的保守結(jié)構(gòu)域，包括與催化亞基PP1c結(jié)合的RVXF基序和多個(gè)錨蛋白重復(fù)序列，參與人體多種生理活動(dòng)，并與腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[9-11]。最近的研究發(fā)現(xiàn)MYPT1可能作為miR-30d的直接作用靶點(diǎn)促進(jìn)前列腺癌的血管生成和腫瘤生長(zhǎng)。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)也表明MYPT1可下調(diào)VEGF和CD31的表達(dá)，并可抑制小鼠微血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和腫瘤血管的形成[12]。但是MYPT1在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及其與結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系鮮有報(bào)道。本研究檢測(cè)MYPT1在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)并分析其與結(jié)直腸癌惡性生物學(xué)行為的關(guān)系，探討MYPT1是否通過(guò)RhoA/ROCK信號(hào)通路調(diào)控細(xì)胞增殖和遷移，以期為結(jié)直腸癌的診斷和治療提供新的腫瘤標(biāo)志物及藥物治療靶點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 主要材料與試劑 人結(jié)直腸癌細(xì)胞株HCT116、SW480、LOVO與正常人結(jié)腸上皮細(xì)胞株HCoEpiC購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù)(上海，中國(guó))。細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒8(CCK8)購(gòu)自Beyotime公司(上海，中國(guó))。酶標(biāo)儀購(gòu)自Bio-Rad公司(Hercules,CA,USA)。10%胎牛血清、TRIzol試劑購(gòu)自Invitrogen公司(Carlsbad, CA,USA)。RIPA緩沖液購(gòu)自Thermo Fisher 公司(Waltham, MA, USA)。Cat lgG二抗購(gòu)自Sungene Biotech公司(上海，中國(guó))。RHOA和ROCK1一抗購(gòu)自Abcam公司(Cambridge, MA, USA)。Transwell小室購(gòu)自Corning公司( Costar, CA, USA)。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染 細(xì)胞在含有10%胎牛血清，100 U/mL青霉素和100 μg/mL鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，培養(yǎng)箱中含有5%的CO2，培養(yǎng)溫度為37℃。按照說(shuō)明書(shū)，用慢病毒表達(dá)載體在細(xì)胞中轉(zhuǎn)染LV-MYPT1(MYPT1過(guò)表達(dá)組)、LV-MYPT1 NC(MYPT1陰性對(duì)照組)、LV-RhoA(RhoA過(guò)表達(dá)組)和LV-RhoANC(RhoA陰性對(duì)照組)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)方案不同進(jìn)行不同分組。檢測(cè)MYPT1對(duì)細(xì)胞增殖和遷移的影響時(shí)分為空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組(LV-MYPT1 NC)及MYPT1過(guò)表達(dá)組(LV-MYPT1)；檢測(cè)MYPT1對(duì)RhoA和ROCK1蛋白表達(dá)的影響時(shí)分為空白對(duì)照組和MYPT1過(guò)表達(dá)組；檢測(cè)RhoA對(duì)細(xì)胞增殖和遷移的影響時(shí)分為空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組(LV-RhoA NC)及RhoA過(guò)表達(dá)組(LV-RhoA)組；檢測(cè)MYPT1通過(guò)負(fù)調(diào)控RhoA抑制ROCK1基因表達(dá)和結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖和遷移時(shí)分為陰性對(duì)照組(LV-MYPT1 NC)、MYPT1過(guò)表達(dá)組(LV-MYPT1)、MYPT1過(guò)表達(dá)+RhoA空載組(LV-MYPT1+LV-RhoANC)和MYPT1過(guò)表達(dá)+RhoA過(guò)表達(dá)組(LV-MYPT1+LV-RhoA)。

1.2.2 CCK8檢測(cè) 采用CCK8法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性。將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞收集，消化后計(jì)數(shù)，制成密度為5×104cells/mL的細(xì)胞懸液，在96孔板上每孔加入100 μL細(xì)胞懸液。培養(yǎng)24、48、72 h后，每孔添加10 μL CCK8溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4 h后用酶標(biāo)儀測(cè)量450 nm波長(zhǎng)處OD值。

1.2.3 qRT-PCR檢測(cè) 根據(jù)說(shuō)明書(shū)使用TRIzol試劑從結(jié)直腸癌細(xì)胞中提取總RNA,再用MiScript SYBR Green PCR試劑盒進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，使用ABI7500快速實(shí)時(shí)PCR系統(tǒng)檢測(cè)mRNA的相對(duì)表達(dá)水平，采用2-ΔΔCt法計(jì)算相對(duì)表達(dá)量。引物序列如下：MYPT1：5′-GAGCCTCCGGTGGTGAAG-3′(forward)，5′-GGCAGTGAGTCCGTCCAC-3′(reverse)；ROCK1：5′-AACATGCTGCTGGATAAATCTGG-3′(forward)，R: 5′-TGTATCACATCGTACCATGCC T-3′(reverse)。

1.2.4 Western blot檢測(cè) 采用含有蛋白酶和磷酸酶抑制劑的放射免疫沉淀分析(RIPA)緩沖液進(jìn)行蛋白質(zhì)提取,根據(jù)說(shuō)明書(shū)采用BCA法測(cè)量蛋白質(zhì)濃度。用10% SDS-PAGE電泳分離蛋白，然后轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，室溫下用脫脂牛奶或BSA溶液(5%)封閉PVDF膜1 h,然后將膜與一抗在4℃下孵育過(guò)夜。第二天用TBST溶液(10 min/次)沖洗PVDF膜3次，然后在室溫下用二抗孵育1 h。使用增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光底物試劑盒和ImageJ軟件(NIH, Bethesda, Maryland, USA)檢測(cè)蛋白表達(dá)。用Quantity One V4.6.2軟件(Bio-Rad，USA)分析蛋白灰度值。

1.2.5 Transwell 使用Transwell小室進(jìn)行細(xì)胞遷移能力分析。Transwell小室含有明膠涂層聚碳酸酯膜過(guò)濾器(孔徑為8 μm)，將細(xì)胞以每孔40000個(gè)細(xì)胞的密度接種，24 h后用D-PBS沖洗，按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行細(xì)胞遷移能力的評(píng)估，考馬斯藍(lán)染色后在顯微鏡下觀察細(xì)胞并計(jì)數(shù)。

1.3 生物學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)的使用 使用蛋白質(zhì)互作數(shù)據(jù)庫(kù)(https://string-db.org/)分析可與MYPT1相互作用的蛋白質(zhì)，并使用GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù)(http://gepia.cancer-pku.cn/)數(shù)據(jù)庫(kù)分析基因在結(jié)直腸腫瘤組織中的表達(dá)及不同基因表達(dá)的相關(guān)性。

2 結(jié)果

2.1 MYPT1在結(jié)直腸癌患者中低表達(dá) 首先通過(guò)GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù)分析結(jié)直腸癌組織和癌旁正常組織中MYPT1的表達(dá)水平，結(jié)果顯示在結(jié)腸癌和直腸癌組織中MYPT1均呈低表達(dá)(P<0.05)，見(jiàn)圖1。

圖1 MYPT1在結(jié)直腸癌中的表達(dá)

2.2 MYPT1在結(jié)直腸癌細(xì)胞中低表達(dá) 通過(guò)qRT-PCR法檢測(cè)結(jié)直腸癌細(xì)胞株HCT116、SW480、LOVO與正常人結(jié)腸上皮細(xì)胞株HCoEpiC中MYPT1表達(dá)水平。結(jié)果顯示，與HCoEpiC細(xì)胞株(0.96±0.04)相比，MYPT1在結(jié)直腸癌細(xì)胞株HCT116(0.38±0.04，t=21.437，P<0.01)、SW480(0.42±0.05，t=19.31，P<0.01)、LOVO(0.58±0.05，t=13.14,P<0.01)中的表達(dá)水平均明顯降低，見(jiàn)圖2。選擇SW480進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

圖2 MYPT1在結(jié)直腸癌細(xì)胞株中的表達(dá)

2.3 過(guò)表達(dá)MYPT1抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖 為分析MYPT1對(duì)細(xì)胞增殖的影響，本研究構(gòu)建了MYPT1過(guò)表達(dá)載體LV-MYPT1及空白載體LV-MYPT1 NC，CCK8檢測(cè)結(jié)果顯示，24 h時(shí)，各組間細(xì)胞增殖活性無(wú)明顯差異(P>0.05)；48、72 h時(shí)，與空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組相比，MYPT1過(guò)表達(dá)組細(xì)胞增殖能力明顯降低(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 MYPT1對(duì)細(xì)胞增殖的影響

2.4 過(guò)表達(dá)MYPT1抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞遷移 Transwell結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組(53.67±3.51,t=10.898,P=0.01)及陰性對(duì)照組(55.33±2.52,t=10.898,P<0.01)相比，MYPT1過(guò)表達(dá)組(26.00±2.65)細(xì)胞遷移能力明顯降低，見(jiàn)圖3。

圖3 MYPT1對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞遷移能力影響

2.5 通過(guò)生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)分析MYPT1相互作用蛋白 為探尋MYPT1發(fā)揮作用的機(jī)制，我們通過(guò)蛋白質(zhì)互作數(shù)據(jù)庫(kù)https://string-db.org分析可與MYPT1相互作用的蛋白，發(fā)現(xiàn)RhoA可與MYPT1基因編碼的蛋白磷酸酶1調(diào)節(jié)亞單位12A (Protein Phosphatase 1 Regulatory Subunit 12A，PPP1R12A)相互作用，見(jiàn)圖4。

圖4 篩選可與PPP1R12A相互作用的蛋白

2.6 MYPT1負(fù)調(diào)控RhoA和ROCK1蛋白表達(dá) 為分析MYPT1對(duì)RhoA及其下游信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白R(shí)OCK1表達(dá)的影響，通過(guò)Western blot檢測(cè)過(guò)表達(dá)MYPT1后RhoA和ROCK1蛋白表達(dá)水平，結(jié)果顯示與空白對(duì)照組相比，MYPT1過(guò)表達(dá)組中RhoA(t=29.942,P<0.01)和ROCK1(t=50.278，P<0.01)蛋白表達(dá)水平均明顯降低，見(jiàn)圖5。

圖5 MYPT1對(duì)RhoA和ROCK1蛋白表達(dá)的影響

2.7 RhoA和ROCK1表達(dá)呈正相關(guān) 通過(guò)GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù)分析結(jié)直腸癌中RhoA和ROCK1表達(dá)的相關(guān)性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)RhoA和ROCK1表達(dá)呈正相關(guān)，見(jiàn)圖6。

圖6 RhoA和ROCK1表達(dá)的相關(guān)性

2.8 過(guò)表達(dá)RhoA促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖 進(jìn)一步分析RhoA對(duì)結(jié)直腸癌SW480細(xì)胞增殖能力的影響，結(jié)果顯示，24 h時(shí)，各組細(xì)胞增殖活性無(wú)明顯差異(P>0.05)；48、74 h時(shí)，與空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組相比，RhoA過(guò)表達(dá)組中SW480細(xì)胞增殖能力明顯增強(qiáng)(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 過(guò)表達(dá)RhoA對(duì)細(xì)胞增殖的影響

2.9 過(guò)表達(dá)RhoA促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞遷移 本研究分析了RhoA對(duì)結(jié)直腸癌SW480細(xì)胞遷移能力的影響，結(jié)果顯示與空白對(duì)照組(32.67±3.06，t=-6.682,P=0.003)及陰性對(duì)照組(34.33±4.04，t=-5.128,P=0.007)相比，RhoA過(guò)表達(dá)組(49.33±3.06)中SW480細(xì)胞遷移能力明顯增強(qiáng)，見(jiàn)圖7。

圖7 RhoA對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞遷移能力的影響

2.10 MYPT1通過(guò)負(fù)調(diào)控RhoA抑制ROCK1基因表達(dá) 本研究接下來(lái)分析了MYPT1是否通過(guò)抑制RhoA的表達(dá)從而負(fù)調(diào)控ROCK1的表達(dá)。使用qRT-PCR法檢測(cè)ROCK1的表達(dá)，結(jié)果顯示與陰性對(duì)照組(0.95±0.06)相比，MYPT1過(guò)表達(dá)組(0.56±0.05,t=11.99,P<0.01)及MYPT1過(guò)表達(dá)+RhoA空載組(0.59±0.05,t=10.583,P<0.01)中ROCK1表達(dá)水平明顯降低；與MYPT1過(guò)表達(dá)組(t=-6.624,P<0.01)及MYPT1過(guò)表達(dá)+RhoA空載組(t=-5.786,P<0.01)相比，MYPT1過(guò)表達(dá)+RhoA過(guò)表達(dá)組(0.74±0.03)中ROCK1表達(dá)水平則有所增高，證實(shí)MYPT1通過(guò)負(fù)調(diào)控RhoA抑制ROCK1基因表達(dá),見(jiàn)圖8。

圖8 MYPT1通過(guò)負(fù)調(diào)控RhoA抑制ROCK1基因表達(dá)

2.11 MYPT1通過(guò)負(fù)調(diào)控RhoA抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖 為驗(yàn)證MYPT1通過(guò)負(fù)調(diào)控RhoA抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖，使用CCK8法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力，結(jié)果顯示，24 h時(shí)，各組細(xì)胞增殖能力無(wú)明顯差異(P>0.05)，48、72 h時(shí)，與陰性對(duì)照組相比，MYPT1過(guò)表達(dá)組及MYPT1過(guò)表達(dá)+RhoA空載組中細(xì)胞增殖能力明顯降低，但是與MYPT1過(guò)表達(dá)組及MYPT1過(guò)表達(dá)+RhoA空載組相比，MYPT1過(guò)表達(dá)+RhoA過(guò)表達(dá)組中細(xì)胞增殖能力則有所增高(均P<0.05)，證實(shí)RhoA可逆轉(zhuǎn)MYPT1對(duì)細(xì)胞增殖活性的抑制作用，見(jiàn)表3。

表3 MYPT1通過(guò)負(fù)調(diào)控RhoA抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖

2.12 MYPT1通過(guò)負(fù)調(diào)控RhoA抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞遷移 通過(guò)拯救實(shí)驗(yàn)本研究驗(yàn)證MYPT1是否通過(guò)負(fù)調(diào)控RhoA抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞遷移，通過(guò)Transwell法檢測(cè)細(xì)胞遷移能力，結(jié)果顯示與陰性對(duì)照組(93.33±3.06)相比，MYPT1過(guò)表達(dá)組(59±3.00,t=13.889,P<0.001)及MYPT1過(guò)表達(dá)+RhoA空載組(61.67±2.52,t=13.857,P<0.001)中細(xì)胞遷移能力明顯降低；與MYPT1過(guò)表達(dá)組(t=-6.054,P=0.004)及MYPT1過(guò)表達(dá)+RhoA空載組(t=-5.353,P=0.006)相比，MYPT1過(guò)表達(dá)+RhoA過(guò)表達(dá)組(72.67±2.52)中細(xì)胞遷移能力則有所增高，證實(shí)MYPT1對(duì)細(xì)胞遷移能力的抑制作用至少部分是通過(guò)負(fù)調(diào)控RhoA實(shí)現(xiàn)的，見(jiàn)圖9。

圖9 MYPT1通過(guò)負(fù)調(diào)控RhoA抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞遷移

3 討論

腫瘤細(xì)胞的增殖失控、侵襲和遷移是惡性腫瘤最基本的生物學(xué)特征。腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲可由多種化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)，這些化學(xué)誘導(dǎo)劑和相關(guān)的一些細(xì)胞因子可與腫瘤細(xì)胞表面的受體結(jié)合，激活細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路并調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架的重組，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移[13-14]。研究發(fā)現(xiàn)肌球蛋白作為細(xì)胞骨架的重要組成部分，可通過(guò)對(duì)其輕鏈磷酸化和去磷酸化的調(diào)節(jié)影響肌球蛋白的活性，在腫瘤的增殖和遷移中發(fā)揮著重要作用[15]。還有研究表明由于細(xì)胞分裂依賴細(xì)胞骨架的活性，并且細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)行為依賴于細(xì)胞骨架的動(dòng)態(tài)變化，因此肌球蛋白輕鏈的磷酸化可通過(guò)調(diào)控肌球蛋白和肌動(dòng)蛋白的相互作用影響細(xì)胞骨架的活性，進(jìn)一步增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移能力[16]。MYPT1是蛋白磷酸酶1(Protein phosphatase 1，PP1)的調(diào)控亞單位，MYPT1和PP1的復(fù)合物可以通過(guò)去磷酸化肌球蛋白輕鏈調(diào)控腫瘤細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移。既往研究發(fā)現(xiàn)MYPT1在多種惡性腫瘤中低表達(dá)，過(guò)表達(dá)MYPT1可抑制胃癌的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移，并且在卵巢癌細(xì)胞和動(dòng)物模型中敲除MYPT1可促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)及導(dǎo)致對(duì)鉑類藥物耐藥性的增加[17-18]。通過(guò)GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù)本研究發(fā)現(xiàn)MYPT1在結(jié)腸癌和直腸癌組織中的表達(dá)水平明顯降低，與正常人結(jié)腸上皮細(xì)胞株HCoEpiC相比，MYPT1在結(jié)直腸癌細(xì)胞株HCT116、SW480、LOVO中的表達(dá)水平也明顯降低，并且過(guò)表達(dá)MYPT1可抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞株的增殖和遷移。結(jié)果表明MYPT1在結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展中扮演著抑癌基因的角色，與既往研究結(jié)果相符，證實(shí)MYPT1可作為結(jié)直腸癌新的腫瘤標(biāo)志物及潛在的藥物作用靶點(diǎn)。

本研究探討了MYPT1發(fā)揮抑癌作用的分子機(jī)制。通過(guò)蛋白質(zhì)互作數(shù)據(jù)庫(kù)分析了可與MYPT1編碼的PPP1R12A蛋白相互作用的蛋白，發(fā)現(xiàn)RhoA可與PPP1R12A相互作用。RhoA是Rho小G蛋白家族的一員，參與調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架重排[19-21]。越來(lái)越多的數(shù)據(jù)表明RhoA信號(hào)通路通過(guò)肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架重排參與腫瘤細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移和侵襲。RhoA可誘導(dǎo)應(yīng)力纖維的形成并可將細(xì)胞外信號(hào)傳遞給肌動(dòng)蛋白和微管細(xì)胞骨架。ROCK1是ROCK家族之一,也是RhoA蛋白的下游激酶，其可增加肌球蛋白磷酸化，促進(jìn)細(xì)胞產(chǎn)生收縮力，而這種張力是細(xì)胞增殖所必需的。ROCK1還可以通過(guò)磷酸化肌球蛋白輕鏈增強(qiáng)肌動(dòng)球蛋白的收縮能力[22]。研究表明RhoA/ROCK信號(hào)通路是癌癥進(jìn)展的關(guān)鍵信號(hào)通路[23],Wang等[24]的研究發(fā)現(xiàn)激活RhoA/ROCK信號(hào)通路可以增加卵巢癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力,Xia等[25]的研究證實(shí)RhoA/ROCK信號(hào)通路參與血管生成擬態(tài)的形成，抑制RhoA/ROCK信號(hào)通路可通過(guò)減少腫瘤血供抑制非小細(xì)胞肺癌的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。因此靶向RhoA/ROCK信號(hào)通路可能是抑制腫瘤細(xì)胞增殖和遷移的有效策略。本研究發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)MYPT1可抑制RhoA和ROCK1蛋白的表達(dá)，RhoA和ROCK1表達(dá)呈正相關(guān)，并且過(guò)表達(dá)RhoA可促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖和遷移，提示MYPT1可能通過(guò)RhoA信號(hào)通路發(fā)揮抑癌作用。進(jìn)一步通過(guò)功能回復(fù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)與陰性對(duì)照組相比，MYPT1過(guò)表達(dá)組及MYPT1過(guò)表達(dá)+RhoA空載組中ROCK1表達(dá)水平明顯降低，細(xì)胞增殖和遷移能力明顯降低，但是與MYPT1過(guò)表達(dá)組及MYPT1過(guò)表達(dá)+RhoA空載組相比，MYPT1過(guò)表達(dá)+RhoA過(guò)表達(dá)組中ROCK1表達(dá)水平、細(xì)胞增殖和遷移能力有所增高，表明RhoA可逆轉(zhuǎn)MYPT1對(duì)ROCK1基因表達(dá)的下調(diào)作用和對(duì)細(xì)胞增殖和遷移能力的抑制作用，證實(shí)MYPT1通過(guò)RhoA/ROCK信號(hào)通路抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖和遷移。

4 結(jié)論

MYPT1通過(guò)調(diào)控RhoA/ROCK信號(hào)通路抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖和遷移，為阻斷結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展提供了潛在的治療靶點(diǎn)。但是MYPT1的上游調(diào)控基因及其在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中的作用還需要進(jìn)一步的研究。