呂晶晶，鄒明雷，付培彪

河南理工大學第一附屬醫(yī)院/焦作市第二人民醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，河南 焦作4540000

肺癌是中國乃至全球惡性腫瘤死亡的主要原因，其中最常見的組織學類型為非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）[1-2]。表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）突變能夠經(jīng)由多種通路增強腫瘤細胞的侵襲、轉(zhuǎn)移并抑制其凋亡，在NSCLC 患者中，EGFR突變患者達到了50%[3-4]。早期肺癌多無典型臨床癥狀，多數(shù)患者就診時腫瘤已發(fā)展至晚期，手術(shù)完整切除的難度較大，化療療效欠佳且不良反應明顯，靶向治療逐漸成為臨床治療的首選，其中以吉非替尼為代表的酪氨酸激酶抑制劑（tyrosine kinase inhibitor，TKI）對EGFR突變的NSCLC 療效確切，且不良反應相對較小[5-6]。盡管隨著醫(yī)學技術(shù)的迅速發(fā)展，NSCLC 的診斷及治療技術(shù)日益升高，但晚期NSCLC 患者的預后仍不理想，因此，研究參與肺癌細胞增殖、浸潤的主要基因及蛋白，探索其與患者預后的關(guān)系有重要的臨床價值。丙酮酸脫氫酶E1α 亞 單 位（pyruvate dehydrogenase complex E1α subunit，PDHA1）可促使有氧糖酵解轉(zhuǎn)變?yōu)檠趸姿峄?，抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展[7]。轉(zhuǎn)錄激活反應RNA結(jié)合蛋白1（transcriptional activation RNA binding protein 1，TARBP1）可結(jié)合部分RNA干擾因子，調(diào)節(jié)磷酸化及抑癌基因的表達[8]。近年來，有研究報道PDHA1、TARBP1 與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，但與EGFR突變NSCLC患者預后關(guān)系的研究卻較少[9-10]。本研究探討PDHA1、TARBP1 在EGFR突變NSCLC中的表達及對患者預后的影響，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016 年5 月至2018 年5 月在焦作市第二人民醫(yī)院接受靶向治療的EGFR突變晚期NSCLC患者。納入標準：①符合《NCCN 非小細胞肺癌臨床實踐指南》[11]中關(guān)于肺癌的診斷標準，經(jīng)纖維支氣管鏡獲取腫瘤組織，經(jīng)病理學檢查確診為NSCLC；②TNM 分期為Ⅲ～Ⅳ期；③基因檢測證實存在EGFR突變，接受靶向藥物治療；④入院前未接受過手術(shù)、放化療等任何抗腫瘤治療；⑤病歷資料完整。排除標準：①既往存在其他部位腫瘤；②合并嚴重感染、血液系統(tǒng)疾病及自身免疫性疾?。虎酆喜乐氐母文I功能障礙、心血管系統(tǒng)等嚴重疾病；④未規(guī)律復診或隨訪失訪。根據(jù)納入和排除標準，本研究共納入95 例EGFR突變晚期NSCLC 患者，其中男52 例，女43 例；年齡51～76歲，平均（63.43±9.18）歲；病理類型：腺癌61 例，鱗狀細胞癌34 例；TMN 分期：Ⅲ期41 例，Ⅳ期54 例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移76 例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移19 例；基因檢測EGFR突變位點：E19del突變51例，L858R突變44例。

1.2 治療方法

所有患者均給予靶向藥物治療，吉非替尼250 mg口服，每天1 次，患者出現(xiàn)耐藥表現(xiàn)時，再次行基因檢測更換靶向藥物繼續(xù)治療；若患者出現(xiàn)腦轉(zhuǎn)移，予以輔助放療。

1.3 免疫組化法檢測PDHA1、TARBP1 蛋白表達情況

所有患者均經(jīng)纖維支氣管鏡取腫瘤組織，石蠟包埋，切片后脫蠟、水化，滴入檸檬酸緩沖液，微波加熱，磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）洗滌，置于3%過氧化氫溶液中10 min 以阻斷非特異性染色，PBS 再次洗滌，山羊血清封閉。分別滴加PDHA1、TARBP1 一抗，室溫孵育1 h，滴加二抗，室溫孵育30 min。二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色，蘇木素復染，脫水、透明后封片觀察。將相同濃度且與相應抗體同源的非特異性球蛋白作為陰性對照，將已知的陽性表達的切片作為陽性對照。

由2 名病理科主任醫(yī)師進行結(jié)果判定。PDHA1 主要定位于細胞質(zhì)，細胞質(zhì)出現(xiàn)黃色顆粒判定為陽性細胞，依據(jù)染色強度和陽性細胞所占比例進行評分：無著色計0 分，淡黃色染色計1 分，中等黃色染色計2 分，棕黃色染色計3 分；無陽性細胞計0 分，陽性細胞所占比例≤10%計1 分，陽性細胞所占比例為11%～50%計2 分，陽性細胞所占比例為51%～80%計3 分，陽性細胞所占比例＞80%計4 分；將染色強度評分和陽性細胞所占比例評分相乘，0～4 分判定為PDHA1 表達陰性，5～12 分為PDHA1 表達陽性。TARBP1 主要定位于細胞質(zhì)，細胞質(zhì)呈棕黃色判定為陽性，否則判定為陰性。

1.4 隨訪

患者出院后進行為期3 年的隨訪，2 年內(nèi)每3個月到院復查1 次，2 年后每6 個月到院復查1 次，以患者死亡或隨訪結(jié)束為隨訪終點，記錄患者的總生存率。復查內(nèi)容包括患者主訴、體征、血清腫瘤標志物檢測、胸腹部CT 檢查、頭部CT 或MRI 檢查，必要時行全身骨顯像檢查等。

1.5 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 17.0 軟件對所有數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計處理，計數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；采用Kaplan-Meier 法繪制生存曲線，組間比較采用Log-rank 檢驗；NSCLC 患者預后的影響因素采用Cox 風險比例回歸模型分析；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 PDHA1、TARBP1 表達情況的比較

95例NSCLC患者腫瘤組織中，PDHA1陽性表達率為45.26%（43/95），PDHA1 陰性表達率為54.74%（52/95）；TARBP1 陽性表達率為74.74%（71/95），TARBP1 陰性表達率為25.26%（24/95）。

2.2 不同臨床特征NSCLC 患者腫瘤組織中PDHA1、TARBP1 表達情況的比較

不同性別、年齡、TMN 分期、病理類型、EGFR突變位點NSCLC 患者腫瘤組織中PDHA1、TARBP1 蛋白的陽性表達率比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。分化程度為中低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移NSCLC 患者腫瘤組織中PDHA1 陽性表達率分別低于高分化和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異均有統(tǒng)計學意義（χ2=6.805、7.743，P＜0.05）；分化程度為中低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移NSCLC 患者腫瘤組織中TARBP1 陽性表達率分別高于高分化和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異均有統(tǒng)計學意義（χ2=4.915、23.429，P＜0.05）。（表1）

表1 不同臨床特征NSCLC 患者腫瘤組織中PDHA1、TARBP1 表達情況的比較（n=95）

2.3 不同PDHA1、TARBP1 表達情況NSCLC 患者預后情況的比較

至隨訪結(jié)束，95 例NSCLC 患者病死67 例，生存28 例。PDHA1 陽性表達患者總生存率為44.2%，明顯高于PDHA1 陰性表達患者的17.3%，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=7.875，P=0.005）。TARBP1陽性表達患者的總生存率為18.3%，明顯低于TARBP1 陰性表達患者的62.5%，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=13.744，P=0.000）。（圖1、圖2）

圖1 PDHA1陽性表達（n=43）和PDHA1陰性表達（n=52）NSCLC患者的總生存曲線

圖2 TARBP1陽性表達（n=71）和TARBP1陰性表達（n=24）NSCLC患者的總生存曲線

2.4 NSCLC 患者預后影響因素的單因素和多因素分析

單因素分析結(jié)果顯示，年齡、TNM 分期均可能與NSCLC 患者的預后無關(guān)（P＞0.05），分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、吉非替尼耐藥情況、PDHA1 表達情況、TARBP1 表達情況均可能與患者的預后有關(guān)（P＜0.05）。多因素Cox 回歸分析結(jié)果顯示，分化程度為中低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、PDHA1 表達陰性、TARBP1 表達陽性均是NSCLC 患者預后的獨立危險因素（P＜0.05）。（表2）

表2 NSCLC 患者預后影響因素的單因素和多因素分析

3 討論

隨著環(huán)境惡化及人們生活習慣的改變，肺癌的發(fā)病率日益增長[12-13]。多數(shù)患者就診時肺癌已進展至晚期，NSCLC 是其中最常見的類型，且多數(shù)患者合并EGFR突變[14]。臨床主要采用TKI 治療EGFR突變的晚期NSCLC 患者，其療效顯著，且不良反應相對較輕[15]。盡管如此，多數(shù)晚期NSCLC患者的預后仍不盡如人意。惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展與細胞增殖、浸潤相關(guān)的主要基因及蛋白的表達密切相關(guān)，由此可見，研究與EGFR突變晚期NSCLC 相關(guān)的生物學指標對評估患者的預后有重要價值。寧瑞玲等[16]研究顯示，血清糖類抗原125、癌胚抗原水平可為接受靶向治療的EGFR突變晚期NSCLC 患者的預后提供可靠參考依據(jù)。

本研究結(jié)果顯示，95 例NSCLC 患者腫瘤組織中，PDHA1 陽性表達率為45.26%，陰性表達率為54.74%；TARBP1 陽性表達率為74.74%，陰性表達率為25.26%。表明EGFR突變的NSCLC 患者以PDHA1 陰性表達和TARBP1 陽性表達為主。同時，本研究結(jié)果顯示，性別、年齡、病理類型、TNM分期、EGFR突變位點均可能與NSCLC 患者腫瘤組織中PDHA1、TARBP1 的表達無關(guān)，而分化程度為中低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的NSCLC 患者腫瘤組織中PDHA1 陽性表達率較低、TARBP1 陽性表達率較高。提示腫瘤組織中PDHA1 陰性表達、TARBP1 陽性表達患者的惡性程度更高，且此類患者的預后較差。本研究選取患者均為晚期，數(shù)據(jù)具有一定偏倚，PDHA1、TARBP1 表達與可反映腫瘤惡性程度的另一指標TNM分期未見明顯相關(guān)性。

本研究結(jié)果顯示，PDHA1 陽性表達患者總生存率為44.2%，明顯高于PDHA1 陰性表達患者的17.3%；TARBP1 陽性表達患者的總生存率為18.3% ，明顯低于TARBP1 陰性表達患者的62.5%。表明PDHA1 陰性表達、TARBP1 陽性表達患者的預后較差。機體正常細胞獲取能量的途徑是線粒體氧化磷酸化及糖酵解，而腫瘤細胞的明顯特征之一就是以有氧糖酵解為主，PDHA1可促使有氧糖酵解轉(zhuǎn)變?yōu)檠趸姿峄瑢δ[瘤新生血管生成有一定的抑制作用，當PDHA1 表達及活性下調(diào)時，腫瘤細胞將快速分裂，更具有侵襲性[17]。此外，有學者發(fā)現(xiàn)，PDHA1基因可能參與了腫瘤細胞線粒體呼吸鏈e 相關(guān)反應，進而誘發(fā)細胞死亡[18]。TARBP1 可通過JNK/促分裂原活化的蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）通路調(diào)控其相關(guān)蛋白磷酸化，同時可結(jié)合干擾素誘導的雙鏈RNA（double-stranded RNA，dsRNA）活化蛋白激酶來調(diào)節(jié)其激活基因與腫瘤抑制基因的表達[19]。近年來，有研究在人類惡性腫瘤中檢測出了TARBP1突變[20]。同時，本研究結(jié)果顯示，分化程度為中低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、PDHA1 表達陰性、TARBP1 表達陽性均是NSCLC 患者預后的獨立危險因素（P＜0.05）。表明腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、PDHA1 表達和TARBP1 表達均與患者的預后密切相關(guān)，腫瘤分化程度低、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、PDHA1 表達陰性、TARBP1 表達陽性患者的生存時間可能相對較短。

綜上所述，接受靶向治療的EGFR突變晚期NSCLC 患者腫瘤組織中PDHA1 陰性表達率較低、TARBP1 陽性表達率較高，且PDHA1 陰性表達、TARBP1 陽性表達患者的預后較差，分化程度為中低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、PDHA1 表達陰性、TARBP1表達陽性均是NSCLC 患者預后的獨立危險因素。