周建宏　　張艷麗　　張利斌

[摘要] 目的 探討TAZ蛋白在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)及意義。 方法 收集2010年6月～2013年1月在云南省第一人民醫(yī)院胸心外科手術(shù)切除且經(jīng)病理確診的62例非小細(xì)胞肺癌組織為試驗(yàn)組，以癌旁組織（距腫瘤緣>5 cm）和21例肺良性腫瘤組織為對(duì)照組，采用蛋白質(zhì)印跡法（westem blot，WB）檢測(cè)TAZ蛋白表達(dá)情況并分析。 結(jié)果 蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)到TAZ蛋白在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)量高于癌旁及肺良性腫瘤組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000，0.008，P<0.05）。非小細(xì)胞肺癌患者TAZ蛋白表達(dá)在腫瘤大小及分化程度分組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.036，0.011，P<0.05）。 結(jié)論 TAZ可能與非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生、發(fā)展相關(guān);TAZ可能成為預(yù)測(cè)肺癌預(yù)后的指標(biāo)及治療靶點(diǎn)。

[關(guān)鍵詞] 轉(zhuǎn)錄共激活因子;蛋白質(zhì);非小細(xì)胞肺癌;蛋白質(zhì)印跡法

[中圖分類(lèi)號(hào)] R734? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-9701（2022）17-0091-03

Expression and significance of TAZ protein in non-small cell lung cancer

ZHOU Jianhong1? ZHANG Yanli2? ?ZHANG Libin3

1.Department of Cardiothoracic Surgery， The People′s Hospital of Chuxiong Yi Autonomous Prefecture， Chuxiong 675000， China;2.Department of Anesthesiology， The People′s Hospital of Chuxiong Yi Autonomous Prefecture， Chuxiong 675000， China;3.Department of Thoracic Surgery， The First People′s Hospital of Yunnan Province， Kunming 650032， China

[Abstract] Objective To investigate the expression and significance of tafazzin （TAZ） protein in non-small cell lung cancer tissues. Methods A total of 62 cases of pathologically confirmed non-small cell lung cancer tissues were collected from June? 2010 to January， 2013 in the Department of cardiothoracic surgery of the first people′s Hospital of Yunnan Premoved in the thoracic and cardiac surgery were used as the experimental group， and the adjacent tissues （more than 5 cm away from the tumor edge） and 21 cases of benign lung tumor tissues were used as the control group. The expression of TAZ protein was detected and analyzed by western blotting （WB）. Results WB showed that the expression levels of TAZ protein in non-small cell lung cancer tissues were higher than those in adjacent tissues and benign lung tumor tissues（P=0.000/0.008， P<0.05），with statistically significant differences. There were statistically significant differences in the expression of TAZ protein for patients with non-small cell lung cancer among groups with varied tumor size or differentiation degree（P=0.036/0.011， P<0.05）. Conclusion TAZ may be related to the occurrence and development of non-small cell lung cancer; TAZ may be an index for predicting the prognosis of lung cancer and therapeutic target.

[Key words] Transcriptional coactivator; Protein; Non-small cell lung cancer; Western blotting

肺癌已成為全世界發(fā)病率和病死率最高的腫瘤，非小細(xì)胞肺癌占約85%[1，2]，盡管手術(shù)、放化療、基因靶向治療、免疫治療有了很大的進(jìn)步，但非小細(xì)胞肺癌仍是最具侵襲性的惡性腫瘤之一，5年生存率仍很低，因此發(fā)現(xiàn)新的肺癌分子標(biāo)志物及治療靶點(diǎn)成為目前研究的一個(gè)熱點(diǎn)。TAZ是有PDZ結(jié)合域的轉(zhuǎn)錄輔激活物，作為Hippo信號(hào)通路下游的核心組件，在多種實(shí)體瘤中高表達(dá)，以致癌因子在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起重要作用[3]。TAZ在肺癌、乳腺癌等多種癌癥中表達(dá)上調(diào)或過(guò)度激活，較高的TAZ水平或活性與較差的預(yù)后和較短的生存期相關(guān)[4-6]。本研究以62例經(jīng)病理確診的NSCLC組織為試驗(yàn)組，對(duì)照組采用距腫瘤邊緣>5 cm的癌旁組織及21例肺良性腫瘤（病變）組織，采用蛋白質(zhì)印跡法（westem blot，WB）檢測(cè)TAZ蛋白表達(dá)并探討其臨床意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2010年6月～2013年1月在云南省第一人民醫(yī)院胸心外科接受手術(shù)切除的62例NSCLC患者臨床及病理資料，對(duì)照組采用距腫瘤邊緣>5 cm的癌旁組織及21例肺良性腫瘤（病變）組織。納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有組織均經(jīng)病理證實(shí)為NSCLC;②所有組織標(biāo)本均在離體2 min內(nèi)在液氮及-70 ℃冷藏;③術(shù)前未行放、化療、靶向藥物等抗腫瘤治療者;④臨床資料完整者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴其他惡性腫瘤者;②伴心、肝、腎等重要臟器嚴(yán)重?fù)p害者[7]。其中，男43例，女19例;平均年齡（58±10）歲;TNM分期采用第8版UICC（國(guó)際癌癥控制聯(lián)盟）肺癌階段分類(lèi)[8]。本研究所用標(biāo)本均得到患者的知情同意。

1.2 主要試劑

哺乳動(dòng)物組織蛋白抽提掖（武漢博士德），預(yù)染Marker（fermentas），兔抗人β-actin抗體（abmart）、兔抗人TAZ抗體（cellsignaling technology），HRP標(biāo)記驢抗兔IgG抗體、化學(xué)發(fā)光底物試劑盒（GE healthcare）。

1.3 方法

組織蛋白抽提掖提取組織總蛋白加入蛋白酶抑制劑，使終濃度至1 mmol/L，求得標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)并計(jì)算組織總蛋白濃度。蛋白變性后取總蛋白20 μg上樣，SDS-PAGE電泳90 min（5% 壓縮膠90伏電泳30 min，12%分離膠120 伏電泳 60 min），250毫安恒流濕轉(zhuǎn)1 h，NC膜用麗春紅染膜液染色，5%BSA液封閉90 min，0.1%TBST液漂洗5次每次4 min，5%BSA液（含0.1%TBST）稀釋兔抗人TAZ抗體（1∶1000）或兔抗人β-actin抗體（1：5000），4 ℃過(guò)夜后再次漂洗，5%BSA液（含0.1%TBST）稀釋HRP標(biāo)記驢抗兔IgG抗體（1：8000），膜室溫溫育40 min后漂洗，化學(xué)發(fā)光底物試劑盒發(fā)光，暗盒曝光5～10 min后顯影及定影。利用Gel-Pro analyzer灰度分析軟件對(duì)泳道條帶膠片進(jìn)行灰度分析（各樣本IOD值=各組織TAZ IOD值/相應(yīng)組織β-actin IOD值）。

1.4 觀察指標(biāo)

觀察TAZ蛋白在NSCLC、癌旁組織及肺良性腫瘤（病變）組織中的表達(dá)情況，并分析TAZ蛋白表達(dá)與NSCLC患者臨床病理因素（性別、年齡、吸煙史、病理類(lèi)型、腫瘤大小、分化程度、p-TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移）的關(guān)系。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料用[M（Q1，Q3）]表示，成組兩樣本比較采用Wilcoxon Mann-Whitney秩和檢驗(yàn)，成組多樣本采用Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Western blot檢測(cè)TAZ蛋白表達(dá)水平

Western blot檢測(cè)到NSCLC患者癌組織中TAZ蛋白表達(dá)高于癌旁組織、肺良性腫瘤組織。見(jiàn)圖1。

2.2 Western blot檢測(cè)TAZ蛋白表達(dá)水平灰度分析

NSCLC患者癌組織、癌旁組織中TAZ蛋白IOD值為0.81（0.47，1.19）和0.41（0.21，0.71），癌組織TAZ蛋白表達(dá)量高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000）;癌組織、肺良性腫瘤組織TAZ蛋白IOD值為0.81（0.47，1.19）和0.54（0.23，0.79），癌組織TAZ蛋白表達(dá)升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.008）。見(jiàn)表1。

2.3 NSCLC患者TAZ蛋白表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系

臨床病理因素分析顯示，NSCLC患者TAZ蛋白表達(dá)在腫瘤大小、分化程度分組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.036，0.011）;在性別、年齡、吸煙史、病理類(lèi)型、p-TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分組中比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表2。

3 討論

癌癥晚期癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移、擴(kuò)散成為患者死亡的主要原因，轉(zhuǎn)移患者已從靶向治療獲益生存期延長(zhǎng)，但腫瘤轉(zhuǎn)移、擴(kuò)散過(guò)程復(fù)雜，與腫瘤細(xì)胞微環(huán)境等相關(guān)，并受多種細(xì)胞信號(hào)通路調(diào)控[9]?；蛲蛔?、突變細(xì)胞惡性增殖、惡性細(xì)胞遷移和侵襲成為惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展的過(guò)程，其復(fù)雜過(guò)程在不同因素、不同通路、不同階段中演化。盡管如此，有些腫瘤的發(fā)生、發(fā)展還是被特定的癌基因驅(qū)動(dòng)[10]。TAZ是有PDZ結(jié)合域的轉(zhuǎn)錄輔激活物，與細(xì)胞增殖、凋亡調(diào)控和器官發(fā)育相關(guān)，通過(guò)第89位絲氨酸殘基磷酸化與細(xì)胞質(zhì)中的14-3-3蛋白結(jié)合，去磷酸化后作為轉(zhuǎn)錄輔激活物易位細(xì)胞核中[11]，正常生理狀態(tài)下，TAZ蛋白在肺臟中表達(dá)量較高[3]，并在正常組織發(fā)育和穩(wěn)定細(xì)胞形態(tài)中發(fā)揮獨(dú)特的重要作用[12]。TAZ本質(zhì)上是參與器官發(fā)育及大小控制、組織修復(fù)和再生的生理調(diào)節(jié)。其作為轉(zhuǎn)錄共刺激因子調(diào)節(jié)多種組織器官的穩(wěn)態(tài)。TAZ通過(guò)增加干細(xì)胞活性維持正常的組織穩(wěn)態(tài)，考慮到TAZ在癌細(xì)胞和正常組織中的復(fù)合體功能，雖然完全抑制TAZ在癌癥治療中可能有效，但存在破壞正常組織穩(wěn)態(tài)的風(fēng)險(xiǎn)。因此，TAZ抑制劑用于癌癥治療的發(fā)展值得高度重視。開(kāi)發(fā)靶向TAZ及其特異性結(jié)合位點(diǎn)的選擇性抑制劑或激活劑就可能不會(huì)干擾正常的組織穩(wěn)態(tài)，并可能獲得理想的治療效果[13]。TAZ在腫瘤進(jìn)展中具有一定的特征，TAZ在人類(lèi)多種癌癥中均高表達(dá)，參與癌癥患者的腫瘤轉(zhuǎn)移并導(dǎo)致不良預(yù)后，提示TAZ是一種致癌調(diào)節(jié)劑。因此靶向治療過(guò)表達(dá)的TAZ可能是一種有前景的癌癥治療策略，然而TAZ持續(xù)失活可能導(dǎo)致組織穩(wěn)態(tài)控制失敗。當(dāng)Hippo信號(hào)通路失活時(shí)，TAZ被去磷酸化并定位于細(xì)胞核內(nèi)。TAZ與許多調(diào)控細(xì)胞增殖、分化、遷移、凋亡、衰老等生理轉(zhuǎn)錄因子相關(guān)，從而導(dǎo)致靶基因的轉(zhuǎn)錄激活[14-15]。由于TAZ有助于自我更新和潛能干細(xì)胞與許多癌癥的發(fā)生有關(guān)特征，TAZ被認(rèn)為能更有效地控制癌癥，以TAZ為靶點(diǎn)的抗癌藥物的開(kāi)發(fā)有望治療某些類(lèi)型的癌癥，包括皮膚、乳房和肺癌[16]。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)TAZ蛋白在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)發(fā)現(xiàn)TAZ在癌組織中的表達(dá)量高于癌旁及肺良性腫瘤（病變）組織，表達(dá)量差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。TAZ蛋白表達(dá)差異在腫瘤大小及分化程度分組中有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明TAZ與腫瘤進(jìn)展及預(yù)后密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道相符合，但遺憾的是在腫瘤分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分組中未發(fā)現(xiàn)差異，分析可能與惡性腫瘤發(fā)生過(guò)程是多因素、多通路、多階段的復(fù)雜過(guò)程及樣本量相對(duì)不足等相關(guān)。所以，本研究初步結(jié)論TAZ可能與非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生、發(fā)展相關(guān);TAZ可能成為預(yù)測(cè)非小細(xì)胞肺癌預(yù)后的指標(biāo)、并為肺癌治療提供靶點(diǎn)。

[參考文獻(xiàn)]

[1]? ?Bray F，F(xiàn)erlay J，Soerjomataram I，et al.Global cancer statistics，2018：Globocanestimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries[J].CA Cancer J Clin，2018，68（6）：394-424.

[2]? ?Herbst RS，Morgensztern D，Boshoff C.The biology and management of non-small cell lung cancer[J].Nature，2018，553（7689）：446-454.

[3]? ?Kanai F，Marignani PA，Sarbassova D，et al.TAZ：A novel transcriptional co-activator regulated by interactions with 14-3-3 and PDZ domain proteins[J].EMBO J，2000，19：6778-6791.

[4]? ?Lo-Sardo F，Strano S，Blandino G.YAP and TAZ in lung cancer：Oncogenic role and clinical targeting[J].Cancers，2018，10（5）：137.

[5]? ?Noguchi S，Saito A，Horie M，et al.An integrative analysis of the tumorigenic role of TAZ in human non-small cell lung cancer[J].Clin Cancer Res，2014，20（17）：4660-4672.

[6]&nbsp; ?Cordenonsi M，Zanconato F，Azzolin L，et al.The hippo transducer TAZ confers cancer stem cell-related traits on breast cancer cells[J].Cell，2011，147（4）：759-772.

[7]? ?夏申宏，李子廣，邵璐，等.老年非小細(xì)胞肺癌組織Cx37、GPR120蛋白表達(dá)及其臨床意義[J].中國(guó)老年學(xué)雜志，2021，41（19）：4199-4202.

[8]? ?Paul-E-Van Schil，Ramon Rami-Porta，Hisao Asamura.The 8th TNM edition for lung cancer： A? critical analysis[J].Ann Transl Med，2018，6（5）：87.

[9]? ?Valastyan S，Weinberg RA.Tumor metastasis：Molecular insights and evolving paradigms[J].Cell，2011，147（2）：275-292.

[10]? Weinstein IB.Cancer.Addiction to oncogenes-the Achilles heal of cancer[J].Science （New York， N.Y.），2002，297（5578）：63-64.