張濤譯

摘? 要：作為有益于人類和動(dòng)物健康的生物活性分子，許多研究探討了綠藻所含水溶性硫酸多糖（石莼聚糖）的生物活性。利用從法國(guó)布列塔尼（Brittany）收獲的石莼綠藻（ulva armoricana）制備了純化的綠藻，并利用豬腸道上皮細(xì)胞的體外模型（in vitro system of porcine intestinal epithelial cells，IPEC-1）測(cè)試了其刺激腸道免疫反應(yīng)的能力。RT-qPCR和ELISA分析顯示，純化的綠藻可以明顯增加趨化因子配體20 （CCL20）、IL8和TNF-α等細(xì)胞因子的mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)。利用人胚腎（human embryonic kidney，HEK）293報(bào)告細(xì)胞系的模式識(shí)別受體發(fā)現(xiàn)，石莼聚糖主要刺激Toll樣受體（Toll-like receptors，TLR），如TLR4。該試驗(yàn)還研究了石莼聚糖餾分對(duì)參與激活細(xì)胞因子基因表達(dá)的不同信號(hào)通路的影響。對(duì)用石莼聚糖處理過的HEK293-TLR4細(xì)胞進(jìn)行的免疫印跡表明，Akt和核因子-κB的p65亞單位的磷酸化作用增強(qiáng)。用特異性抑制劑抑制Akt的磷酸化，可以消除石莼聚糖介導(dǎo)的增加IL-8分泌的作用。總體結(jié)果表明，石莼聚糖本身是一種免疫刺激化合物，此外，在疫苗接種策略中，它可以有效復(fù)合Toll樣受體配體并將其傳遞給相關(guān)免疫細(xì)胞。

關(guān)鍵詞：藻類;石莼聚糖;腸道上皮細(xì)胞;免疫刺激;細(xì)胞因子

源自海洋藻類植物的化合物具有各種生物活性，它們可應(yīng)用于食品、化妝品和制藥業(yè)以及微生物學(xué)和生物技術(shù)。海洋藻類植物產(chǎn)生的生物活性代謝物主要是肽、多不飽和脂肪酸、色素、多酚和多糖。高度合成的硫酸多糖普遍存在于綠藻、褐藻和紅藻三種主要海洋藻類植物的細(xì)胞壁基質(zhì)中，占干重的4%～76%。從綠藻、褐藻和紅藻中提取的硫酸多糖分別被稱為石莼聚糖、墨角藻聚糖和角叉菜多糖（carrageenans）。來(lái)自綠藻的石莼聚糖，如硬石莼（ulva rigida）和滸苔（Enteromorpha sp.）主要由硫酸鼠李糖殘基和尿酸組成，形成一個(gè)被稱為雙己糖醛酸的重復(fù)二糖單位β-D-葡萄糖醛酸-（1，4）-α-L-鼠李糖3-硫酸鹽。體外和體內(nèi)研究表明，石莼聚糖——類似于脫氧半乳聚糖和角叉菜多糖，具有廣泛的生物活性，如抗凝血、抗病毒、抗菌、抗腫瘤、抗增殖和免疫調(diào)節(jié)。詳細(xì)篩選表明，低分子量的石莼聚糖與免疫細(xì)胞的相互作用會(huì)使細(xì)胞和分子產(chǎn)生一系列活動(dòng)，激活免疫系統(tǒng)控或制炎癥反應(yīng)過程。最近的研究表明，石莼聚糖能夠增強(qiáng)吞噬作用和其他巨噬細(xì)胞的功能，如活性氧（reactive oxygen species，ROS）和一氧化氮（NO）的產(chǎn)生，以及促炎癥細(xì)胞因子的分泌，如腫瘤壞死因子（tumour necrosis factor，TNF-α）、白細(xì)胞介素-1（interleukins，IL-1）、IL-6、IL-8、IL-12和干擾素（interferon，IFN）。此外，相關(guān)研究人員利用被脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）激活的巨噬細(xì)胞系探討了石莼聚糖的抗炎作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)LPS引發(fā)的促炎細(xì)胞因子（包括IL-1β、IL-6和TNF-α）的分泌和NO的產(chǎn)生明顯減少。這些數(shù)據(jù)表明，低分子量的石莼聚糖具有免疫調(diào)節(jié)活性，但石莼聚糖調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的潛在分子機(jī)制尚未得到明確的闡明。然而，像那些來(lái)自植物、真菌或酵母的多糖一樣，來(lái)自海洋藻類植物的角叉菜多糖和褐藻多糖能夠通過與靶細(xì)胞上表達(dá)的Toll樣受體（如Toll-like receptors-4，TLR4）結(jié)合，誘導(dǎo)信號(hào)通路，激活轉(zhuǎn)錄因子NF-κB，直接調(diào)節(jié)先天免疫反應(yīng)。

例如，紅藻的λ-角叉菜多糖以TLR4依賴的方式刺激小鼠T細(xì)胞培養(yǎng)，產(chǎn)生一個(gè)T輔助1（T helper 1，Th1）模式的細(xì)胞因子反應(yīng)。然而，用缺乏TLR4的小鼠制備的脾細(xì)胞仍然保留了能對(duì)λ-角叉菜多糖產(chǎn)生γ-干擾素的部分能力，這表明模式識(shí)別受體（pattern recognition receptors，PRR）而非TLR4參與了此生理活動(dòng)。角叉菜多糖也被用作佐劑，并可以通過TLR4途徑在接種人乳頭瘤病毒E7肽的小鼠中產(chǎn)生高抗原特異性的免疫反應(yīng)。褐藻的墨角藻聚糖可以通過膜受體TLR4、CD14和A族清道夫受體（scavenger receptor class-A，SR-A）以及絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases，MAPK）信號(hào)途徑誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞活化。墨角藻聚糖還可以通過一個(gè)有轉(zhuǎn)錄因子NF-κB參與的途徑對(duì)骨髓衍生樹突狀細(xì)胞產(chǎn)生免疫刺激和成熟的作用。然而，參與的受體尚未被確定。

有關(guān)從法國(guó)海岸收獲的海洋藻類植物中提取的藻類多糖對(duì)動(dòng)物免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)潛力的研究很少。最近，我們首次評(píng)估了用從2012年在法國(guó)布列塔尼北部海岸收獲的綠色大型海藻石莼綠藻制備的海藻硫酸多糖（marine sulfated polysaccharides，MSPs）提取物的抗菌和免疫刺激活性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，這種海藻硫酸多糖MSP提取物能夠抑制致病菌的生長(zhǎng)，并通過利用豬腸道上皮細(xì)胞系的體外模型（in vitro system of porcine intestinal epithelial cells，IPEC-1）能夠刺激免疫反應(yīng)介質(zhì)如IL1α、IL1β、IL-6、IL-8、TNF-α、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（transforming growth factor β，TGF β）和趨化因子配體20（CC chemokine ligand 20，CCL20）的mRNA表達(dá)。

在本研究中，利用2013年在同一地區(qū)收獲的海藻制備了一批新的海藻硫酸多糖MSPs，并用于純化低分子量的石莼聚糖餾分。該試驗(yàn)首先試圖評(píng)估這種石莼聚糖餾分與海藻硫酸多糖MSPs提取物相比的免疫刺激活性，其次試圖闡明這種生物活性的潛在分子機(jī)制。因此，我們使用IPEC-1體外模型研究了這種石莼聚糖發(fā)餾物是否能夠刺激細(xì)胞因子的表達(dá)，并評(píng)估了它與表達(dá)特征識(shí)別受體（pattern recognition receptor，PRRs）的人胚腎細(xì)胞293（human embryo kidney cell 293，HEK293）細(xì)胞系的相互作用，以確定目標(biāo)受體。我們還對(duì)TLR刺激后參與細(xì)胞因子表達(dá)的信號(hào)通路進(jìn)行了鑒定。了解石莼聚糖介導(dǎo)的免疫刺激活性的機(jī)制對(duì)于設(shè)計(jì)生物活性多糖作為未來(lái)預(yù)防/治療策略的健康改善分子以增強(qiáng)宿主的免疫反應(yīng)非常重要。

1? 結(jié)果

1.1 石莼聚糖餾分的組成

提取物和純化后的石莼聚糖餾分的化學(xué)成分利用元素和近似值分析、單體糖分析和分子量來(lái)確定。表2顯示，純化步驟除去了所有的鹽分和礦物質(zhì)，灰分含量從32.9%降至2.9%。近似值分析顯示，純化步驟將有機(jī)物含量提高到92.5%，主要由碳水化合物和蛋白質(zhì)組成。分析海藻硫酸多糖MSPs提取物中糖的組成毫無(wú)意義，且該結(jié)果無(wú)法使用，檢測(cè)到的糖類含量低，標(biāo)準(zhǔn)誤差高，這與該方法在鹽類含量高時(shí)的低可復(fù)制性有關(guān)。經(jīng)過旨在去除樣本中鹽分的超濾步驟，推斷出有機(jī)物的含量為89.6%，其中72.4%是碳水化合物，主要是中性糖和尿酸。經(jīng)計(jì)算發(fā)現(xiàn)，石莼聚糖餾分的產(chǎn)量為20.5%。

糖類殘留物的組成以低標(biāo)準(zhǔn)偏差的方法進(jìn)行了測(cè)定，占干重的70.9%，略低于用近似值分析所測(cè)得的結(jié)果。推斷出的石莼聚糖餾分的最終組成為39.55%的鼠李糖、32.2%的尿酸、24.4%的葡萄糖醛酸、2.75%的木糖和8.3%的硫酸鹽。加權(quán)平均（Mw）和數(shù)量平均（Mn）的分子量分別為3.2×103 Da和2.9×103 Da，多分散性指數(shù)為1.1。

1.2 石莼綠藻能夠在IPEC-1細(xì)胞中刺激IL-8、TNF-α和CCL20的mRNA表達(dá)

在研究?jī)煞N提取物的刺激作用之前，通過用濃度不斷增加的海藻硫酸多糖MSPs提取物（圖1A）和石莼聚糖（圖1B）培育IPEC-1細(xì)胞以檢測(cè)細(xì)胞毒性，并使用臺(tái)朌藍(lán)排除試驗(yàn)（trypan blue exclusion test）測(cè)定細(xì)胞的活力。當(dāng)質(zhì)量濃度為0.5 mg/mL時(shí)，沒有發(fā)現(xiàn)有明顯的細(xì)胞毒性，細(xì)胞的增殖也未受到影響。因此，將已分化的IPEC-1細(xì)胞置于500 μg/mL、50 μg/mL和5 μg/mL的質(zhì)量濃度下4 h后，首先在mRNA水平上研究了石莼聚糖餾分刺激細(xì)胞因子表達(dá)的能力，并與海藻硫酸多糖MSPs提取物進(jìn)行比較。mRNA的相對(duì)量化——以倍數(shù)變化表示——表明，500 μg/mL的海藻硫酸多糖MSPs提取物能夠顯著提高CCL20（×74.9）、IL-8（×85.4）和TNF-α（×29.9）的相對(duì)表達(dá)量（P<0.01）。純化步驟并不會(huì)影響石莼聚糖的生物活性，而且仍能保持其在IPEC-1細(xì)胞中激活細(xì)胞因子表達(dá)的作用。事實(shí)上，mRNA表達(dá)分析顯示，純化的石莼聚糖餾分可以提高CCL20（×61.5）、IL-8（×79.7）和TNF-α（×36.4）的表達(dá)，提高的幅度與海藻硫酸多糖MSPs提取物的相似（圖2A和2B）。

1.3 石莼綠藻誘導(dǎo)已分化的IPEC-1細(xì)胞分泌IL-8和TNF-α蛋白

在研究證明已分化的IPEC-1細(xì)胞能夠在mRNA水平上對(duì)純化的石莼聚糖餾分作出反應(yīng)后，我們?cè)噲D利用ELISA方法來(lái)證實(shí)和擴(kuò)展這一結(jié)果。將IPEC-1細(xì)胞在轉(zhuǎn)孔過濾器上培養(yǎng)，并通過加入質(zhì)量濃度為500 μg/mL的石莼聚糖刺激過夜，分別分析頂層和基底層的上清液。如圖3所示，石莼聚糖餾分能夠刺激IL-8和TNF-α蛋白分泌到收集的上清液中，但因所收集上清液的來(lái)源層不同，會(huì)有不同的水平。與未處理的對(duì)照組相比，在頂層（5 446 pg/mL±? ? 308 pg/mL）和基底層（1 980 pg/mL±? ? 190 pg/mL）都能檢測(cè)到IL-8的數(shù)量明顯增加（P<0.01）（圖3）。石莼聚糖處理也可以刺激IPEC-1細(xì)胞在這兩個(gè)來(lái)源層中釋放TNF-α，但其水平遠(yuǎn)低于IL-8的（125.5 pg/mL±? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 18.5 pg/mL與5 446 pg/mL±308 pg/mL相比，7.8 pg/mL±1.2 pg/mL與1 980 pg/mL± 190 pg/mL）。下面的實(shí)驗(yàn)只評(píng)估石莼聚糖餾分。

1.4 石莼聚糖誘導(dǎo)IL-8蛋白在HEK293-TLR4細(xì)胞中的表達(dá)

為了確定參與的受體，在穩(wěn)定表達(dá)受體TLR4、TLR5、TLR9、核苷酸結(jié)合寡聚結(jié)構(gòu)域1（nucleotide-binding oligomerization domain，NOD1）和NOD2的人胚腎（human embryonic kidney，HEK）細(xì)胞293細(xì)胞系中以500 μg/mL的質(zhì)量濃度測(cè)試石莼聚糖餾分。通過用ELISA方法監(jiān)測(cè)IL-8在上清液中的釋放水平，評(píng)估了石莼聚糖/受體的相互作用。結(jié)果顯示，與HEK293無(wú)效細(xì)胞相比，純化的石莼聚糖餾分能夠激活TLR4，在HEK293/TLR4-MD-2-CD14細(xì)胞系中誘導(dǎo)上調(diào)IL-8的產(chǎn)生。該餾分不會(huì)明顯激活其余的任何受體。

1.5 石莼聚糖與TLR4的相互作用能夠介導(dǎo)磷脂酰肌醇-3激酶（phosphatidylin-ositol-3-kinase，PI3K）/絲氨酸蘇氨酸蛋白激酶（Serine/Threonine-Protein Kinase，Akt）和NF-κB信號(hào)通路的激活

我們接下來(lái)研究了純化的石莼聚糖餾分對(duì)激活參與細(xì)胞因子基因表達(dá)的不同蛋白激酶的影響。因此，用石莼聚糖（500 μg/mL）對(duì)HEK293-TLR4細(xì)胞進(jìn)行不同時(shí)長(zhǎng)（5 min、? 10 min、30 min和60 min）的孵育，并使用磷酸化特異性抗體來(lái)評(píng)估MAPKs（ERK1/2和p38）、絲氨酸蘇氨酸蛋白激酶、腺苷酸活化蛋白激酶（adenosine monophosphate-activated protein kinase，AMPK）和NF-κB的磷酸化狀態(tài)。免疫印跡結(jié)果和磷酸化pAkt（phospho-AKT，pAkt）/Akt的動(dòng)力學(xué)曲線分析顯示，在HEK293細(xì)胞中，石莼聚糖餾分與TLR4的相互作用明顯增加了Akt的磷酸化，與未處理的細(xì)胞相比，經(jīng)過5 min孵育后可以檢測(cè)到，與LPS處理的細(xì)胞相似。MAPKs（Erk1/2和p38）和AMP-激活激酶的磷酸化狀態(tài)分析發(fā)現(xiàn)這些信號(hào)通路的激活在不同處理之間沒有任何差異（數(shù)據(jù)未顯示）。Akt通過誘導(dǎo)κB抑制劑（IκB）的磷酸化和隨后的降解調(diào)節(jié)核因子-κB（nuclear factor，NF-κB）的轉(zhuǎn)錄活性。因此，我們分析了p65在HEK293-TLR4細(xì)胞中的磷酸化狀態(tài)，發(fā)現(xiàn)石莼聚糖餾分明顯增加了磷酸化p65的水平。

1.6 使用抑制劑LY294002抑制PI3K/Akt信號(hào)通路

我們首先檢查了藥理學(xué)抑制劑LY294002（譯者注：一種PI3K抑制劑）對(duì)HEK293-TLR4細(xì)胞的增殖是否有細(xì)胞毒性作用。用LY294002或二甲亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）處理細(xì)胞，經(jīng)過16 h的孵育，與單獨(dú)的DMEM相比沒有影響細(xì)胞的活力。隨后，用抑制劑LY294002來(lái)驗(yàn)證PI3K/Akt信號(hào)通路的參與。該抑制劑在終濃度為 50 μM的情況下使用16 h，能夠阻斷這一信號(hào)通路，并誘導(dǎo)IL-8的分泌減少65%以上。在用LPS處理的細(xì)胞中也得到了類似的結(jié)果，而LY294002并不影響未處理細(xì)胞中IL-8的分泌。

2? 討論

近年來(lái)，綠藻已成為天然生物活性化合物的豐富和重要來(lái)源，可用作新一代動(dòng)物生長(zhǎng)促進(jìn)劑和抗生素的天然替代品，增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能，減少農(nóng)場(chǎng)動(dòng)物的感染，從而改善動(dòng)物的健康水平。然而，有關(guān)綠藻所含的生物活性成分及其作用機(jī)制和在動(dòng)物體內(nèi)的生物效應(yīng)還需要進(jìn)一步的研究，以最終將這些發(fā)現(xiàn)應(yīng)用于畜牧生產(chǎn)。在這種情況下，我們最近利用綠色大型海藻石莼綠藻制備了一種海藻硫酸多糖（marine sulfated polysaccharides）提取物，并利用豬腸道上皮細(xì)胞系IPEC-1的體外模型進(jìn)行了研究，顯示其能夠刺激一系列的細(xì)胞因子和趨化因子的mRNA表達(dá)。化學(xué)成分分析表明，該提取物的主要成分是石莼聚糖，并且這一成分被認(rèn)為是免疫刺激活性的主要候選成分，不過需要對(duì)樣本做進(jìn)一步的純化以最終確認(rèn)。在本研究中，我們利用2013年夏天在同一地區(qū)收獲的海藻制備了一批新的海藻硫酸多糖，通過純化后獲得了石莼聚糖餾分，以評(píng)估其與海藻硫酸多糖提取物相比的免疫調(diào)節(jié)潛力。對(duì)這批新的海藻硫酸多糖進(jìn)行成分分析后發(fā)現(xiàn)，其與之前制備和測(cè)試的海藻硫酸多糖提取物含有相似的成分。純化過程使我們獲得了有機(jī)物含量高的石莼聚糖餾分（高達(dá)89.6%），其中72.4%是碳水化合物，主要為中性糖和尿酸。推斷出的石莼聚糖餾分的最終成分是39.6%的鼠李糖、32.2%的尿酸、24.4%的葡萄糖醛酸、2.8%的木糖、8.3%的硫酸鹽和8.9%的蛋白質(zhì)，這些成分代表了綠藻石莼聚糖中典型的主要成分。此外，元素分析也顯示其含有蛋白質(zhì)，這與之前描述的硫酸多糖與綠藻細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)中的蛋白質(zhì)密切相關(guān)的事實(shí)一致。

用這批新的海藻硫酸多糖以及純化的石莼聚糖餾分處理已分化的IPEC-1細(xì)胞，可誘導(dǎo)CCL20、TNF-α和IL-8 mRNA表達(dá)的上調(diào)。此外，利用ELISA方法分析發(fā)現(xiàn)，純化的石莼聚糖餾分能夠刺激細(xì)胞因子在基底層和頂層上清液中的分泌。這些結(jié)果與之前獲得的相似，表明該提取過程適合于制備含有可重現(xiàn)的分析成分和免疫刺激活性的海藻硫酸多糖MSPs提取物。此外，純化步驟對(duì)提高該免疫刺激活性特別有用，這可能歸功于石莼聚糖餾分。海藻硫酸多糖提取物以及石莼聚糖餾分能夠刺激豬產(chǎn)生腸道細(xì)胞因子，不能歸因于內(nèi)毒素污染，因?yàn)橛肊-Toxate試劑盒分析發(fā)現(xiàn)，該提取物的分餾多糖不含內(nèi)毒素化合物（數(shù)據(jù)未顯示）。這項(xiàng)研究對(duì)確定最佳的提取處理工藝具有實(shí)際意義，以生產(chǎn)出具有有效免疫刺激活性的天然生物活性分子，用于畜禽日糧，改善動(dòng)物的免疫反應(yīng)，從而提高它們對(duì)傳染病的抵抗力。

評(píng)估藻類多糖免疫學(xué)特性的許多研究主要使用巨噬細(xì)胞系，如小鼠RAW264.7，很少用豬腸道上皮細(xì)胞進(jìn)行測(cè)試。與褐藻聚糖硫酸酯（funcoidan）和角叉菜多糖類一樣，石莼聚糖直接在巨噬細(xì)胞系上進(jìn)行測(cè)試，或在用LPS挑戰(zhàn)之后，分別測(cè)試其免疫刺激反應(yīng)或抗炎反應(yīng)。雖然巨噬細(xì)胞是動(dòng)物先天免疫的重要效應(yīng)細(xì)胞，但腸道上皮細(xì)胞也令人感興趣，因?yàn)樗鼈儽磉_(dá)了模式識(shí)別受體（pattern-recognition receptors，PRRs），使它們能夠作為微生物環(huán)境和外來(lái)抗原的動(dòng)態(tài)傳感器。因此，我們?cè)谘芯恐惺褂玫囊逊只腎PEC-1細(xì)胞是一個(gè)相關(guān)且合適的體外模型，將允許測(cè)試和評(píng)估日糧中生物活性化合物，如海藻硫酸多糖刺激腸道免疫反應(yīng)的效果。很明顯，腸道上皮細(xì)胞是腸道平衡的關(guān)鍵媒介，通過產(chǎn)生大量參與鄰近免疫細(xì)胞激活、運(yùn)輸和功能的細(xì)胞因子，加強(qiáng)屏障功能，并參與協(xié)調(diào)合理的黏膜免疫反應(yīng)。由于它們能夠識(shí)別特定的碳水化合物分子，并引起免疫反應(yīng)，我們假設(shè)PRRs，更具體地說(shuō)是TLRs和NODs，被石莼聚糖餾分激活，通過信號(hào)級(jí)聯(lián)系統(tǒng)，刺激產(chǎn)生細(xì)胞因子。因此，我們使用HEK2P3細(xì)胞模型來(lái)檢測(cè)大量的TLR和NOD受體，結(jié)果顯示石莼聚糖餾分能夠激活HEK2P3細(xì)胞的免疫信號(hào)，表達(dá)TLR4。這意味著石莼聚糖可以通過TLR4直接作用于靶細(xì)胞，包括腸道細(xì)胞或免疫細(xì)胞，并會(huì)不同程度地影響免疫學(xué)指標(biāo)的表達(dá)。我們還分析了信號(hào)通路的激活，表明石莼聚糖與TLR4的相互作用可以介導(dǎo)PI3K/Akt信號(hào)通路的激活，該通路可調(diào)節(jié)NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性。使用特異性藥理學(xué)抑制劑LY294002證實(shí)了PI3K/Akt途徑的參與。在以前的報(bào)道中，正常的人結(jié)腸上皮細(xì)胞系NCM460暴露于從紅藻中凈化的硫酸多聚半乳糖角叉菜多糖（carrageenan，CGN），顯示能夠刺激產(chǎn)生IL-8。與我們的研究類似，這種CGN能夠識(shí)別TLR4受體，并誘導(dǎo)B細(xì)胞淋巴瘤-NFκB的激活，從而介導(dǎo)細(xì)胞因子的產(chǎn)生。

據(jù)報(bào)道，PI3K/Akt通路的激活與不同細(xì)胞中的TLR2、TLR3、TLR4和TLR5有關(guān)，并在TLR信號(hào)通路上發(fā)揮促炎癥和抗炎癥的作用。因此，這種石莼聚糖餾分可能發(fā)揮雙重作用，表現(xiàn)出免疫調(diào)節(jié)活性，可能在刺激免疫反應(yīng)或控制炎癥方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值，正如來(lái)自其他海藻的多糖提取物所報(bào)道的那樣。

3? 總結(jié)

總的來(lái)說(shuō)，這些體外試驗(yàn)結(jié)果為海藻硫酸多糖用來(lái)刺激可溶性細(xì)胞因子和趨化因子產(chǎn)生的分子機(jī)制提供了新的見解，并表明這種信號(hào)傳導(dǎo)可以在與TLR4相互作用后實(shí)現(xiàn)，誘導(dǎo)PI3K/Akt和NF-κB途徑的激活。盡管這些體外研究結(jié)果有助于解釋石莼聚糖用來(lái)刺激細(xì)胞因子表達(dá)的分子機(jī)制，但我們不能排除通過一種可能在腸道表面更復(fù)雜的機(jī)制參與下的其他受體和替代信號(hào)通路。天然的TLR配體（TLR ligands，TLRLs）及其類似物正越來(lái)越多地被應(yīng)用于免疫治療策略。由于TLRLs是先天免疫反應(yīng)的強(qiáng)有力的誘導(dǎo)劑，它們已被用作佐劑來(lái)刺激適應(yīng)性免疫反應(yīng)。制藥工業(yè)將自然衍生聚合物（naturally derived polymers）作為藥物釋放應(yīng)用中的多功能材料，這已成為人們?nèi)找骊P(guān)注的主題，推動(dòng)了相關(guān)行業(yè)不斷開發(fā)此類化合物。海藻硫酸多糖最近已被制作成納米粒子和微粒子，這主要是由于它們的離子性質(zhì)。因此，TLR的配體可以被封裝入可生物降解的石莼聚糖納米顆粒中，以便在疫苗接種策略中能夠被傳遞給相關(guān)的免疫靶細(xì)胞。然而，還需要使用體內(nèi)模型和體外模型進(jìn)行進(jìn)一步的研究，以確定在生理?xiàng)l件下和感染或炎癥過程中海藻硫酸多糖對(duì)免疫反應(yīng)的刺激作用。

原題名：Ulvan from Ulva armoricana （Chlorophyta） activates the PI3K/Akt signalling pathway via TLR4 to induce intestinal cytokine production（英文）

原作者：Mustapha Berria、Michel Oliviera和 Sébastien Holberta等