李立，許曉林，李紅全，蔡曉燕

廣東省臺(tái)山市人民醫(yī)院病理科，廣東臺(tái)山 529200

惡性腫瘤是臨床常見(jiàn)疾病，其形成多為不同致癌因素之間相互作用導(dǎo)致?；颊邫C(jī)體組織細(xì)胞無(wú)法正常生長(zhǎng)，失去調(diào)控的細(xì)胞促使機(jī)體在短時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)異常，并分化新生物。若是產(chǎn)生新生物，腫瘤由于機(jī)體致病因素而抑制生長(zhǎng)，反而無(wú)法用機(jī)體正常生理功能進(jìn)行調(diào)節(jié)，破壞機(jī)體組織與相關(guān)器官[1]。膀胱尿路上皮腫瘤是臨床惡性腫瘤的一種，生長(zhǎng)迅速、浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，患者會(huì)有出血、潰瘍、氣管壞死等癥狀。該疾病可能會(huì)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，致患者食欲不振或貧血，逐漸損傷患者身體內(nèi)部重要組織及器官。針對(duì)該疾病診斷及類型鑒別可用免疫組織化學(xué)染色法，其對(duì)疾病治療也有一定意義[2]。該研究對(duì)該院2018年10月—2020年11月收治的90例膀胱尿路上皮腫瘤患者實(shí)施免疫組化染色，分析其在診斷膀胱尿路上皮腫瘤及類型鑒別中的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取該院收治的90例膀胱尿路上皮腫瘤患者為研究對(duì)象，依據(jù)腫瘤類型將其分為A1 組、A2 組、A3 組，每組30例。A1 組為低度惡性潛能的乳頭狀尿路上皮腫瘤患者，A2 組為非浸潤(rùn)性尿路上皮癌患者，A3 組為浸潤(rùn)性尿路上皮癌患者。A1 組：男、女各20例、10例；年齡21～59歲，平均（34.62±5.45）歲。A2 組：男、女各19例、11例；年齡20～60歲，平均（34.02±5.69）歲。A3 組：男、女各18例、12例；年齡20～61歲，平均（34.97±5.06）歲。3 組一般資料對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。該研究獲得醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)及認(rèn)可。納入標(biāo)準(zhǔn)：簽訂同意書，愿意參與該研究者。排除標(biāo)準(zhǔn)：精神異常者。

1.2 方法

該次研究用到的試劑是鼠抗人單克隆抗體CK7、CK20、P53、P63、Ki67，還需用到EliVisionTM plus 試劑盒(上海生物科技有限公司)等。免疫組染色具體實(shí)施方法：先切片、脫蠟后PBS 液沖洗、修復(fù)及PBS液沖洗，添加含有3%氧化氫溶液、第一抗體，并用到BS 液進(jìn)行沖洗，還需添加聚合物增強(qiáng)劑，重復(fù)用PBS液沖洗，并滴加酶標(biāo)抗鼠聚合物、DAB顯色液沖洗及復(fù)染，用含量為0.1%的鹽酸分化，沖洗，并用PBS 液沖洗返籃，酒精脫水，用二甲苯透明封片，之后進(jìn)行顯微鏡觀察，并攝片。

1.3 觀察指標(biāo)

記錄診斷結(jié)果。陽(yáng)性判定主要是CK7、CK20 以細(xì)胞有黃色顆粒為基準(zhǔn)，而P53、P63 陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＞6%為陽(yáng)性，Ki67細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)褐色顆粒也是陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料以[n(%)]表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

3 組CK7、P63 表達(dá)水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；3 組CK20、P53、Ki67 表達(dá)水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 3組診斷結(jié)果比較[n(%)]

3 討論

膀胱癌一般是指人體膀胱黏膜上有惡性腫瘤，膀胱尿路上皮腫瘤是臨床常見(jiàn)的十大癌癥之一，該病會(huì)對(duì)患者造成生命威脅，因此醫(yī)生需對(duì)該病實(shí)施有效診斷與治療[3-4]。治療需明確患者出現(xiàn)膀胱尿路上皮腫瘤病因，危險(xiǎn)因素有吸煙、長(zhǎng)期接觸致癌物質(zhì)等，并結(jié)合臨床癥狀治療，如膀胱尿路上皮腫瘤患上后會(huì)出現(xiàn)尿路刺激、排尿困難等癥狀，通過(guò)病因及臨床癥狀等可為疾病治療提供參考。而治療除結(jié)合患者表現(xiàn)、病因，還需了解患者疾病真實(shí)情況，這需要通過(guò)診斷及檢測(cè)等實(shí)現(xiàn)。免疫組化染色技術(shù)是現(xiàn)如今臨床病理診斷不可或缺的組成部分，特別是惡性腫瘤的病理診斷。免疫組化染色技術(shù)是一個(gè)相對(duì)簡(jiǎn)單的技術(shù)，對(duì)于實(shí)驗(yàn)室硬件要求不高，具有技術(shù)人員上手快，成本相對(duì)較低，獲取結(jié)果速度快，判讀相對(duì)簡(jiǎn)單直觀等特點(diǎn)。因?yàn)椴±磲t(yī)生對(duì)免疫組化染色結(jié)果的依賴，免疫組化染色質(zhì)量愈發(fā)成為一個(gè)關(guān)注熱點(diǎn)。免疫組化染色是臨床該病診斷及類型鑒別的常見(jiàn)手段[3]。免疫組化染色手法是指在抗體上結(jié)合熒光或有顏色化學(xué)物質(zhì)，以免疫學(xué)中抗體及抗體間專一性結(jié)合反應(yīng)的原理為主，甄別患者細(xì)胞或組織中目標(biāo)抗原[4-5]。P53 對(duì)尿路上皮腫瘤診斷有一定作用，單作用小、Ki67 主要是判斷細(xì)胞增殖活性[6-7]。免疫組織化學(xué)染色法可被用來(lái)進(jìn)行抗原表達(dá)位置的檢測(cè)，也可檢測(cè)蛋白質(zhì)、多糖及核酸等抗原性物質(zhì)，該檢測(cè)方法的優(yōu)勢(shì)是靈敏度高、專一性、檢測(cè)簡(jiǎn)單、檢測(cè)成本低。恰當(dāng)組織處理是免疫組化染色的基礎(chǔ)，也是保障染色成功的基礎(chǔ)條件[8-9]。免疫組化染色需要重視組織細(xì)胞準(zhǔn)備過(guò)程，需要明確染色需求，并保障組織細(xì)胞形態(tài)完整性，保證組織及細(xì)胞內(nèi)抗原不會(huì)彌散等，避免組織出現(xiàn)自溶。若組織或細(xì)胞已經(jīng)壞死，就無(wú)法保障染色的成功[10-11]。組織標(biāo)本一般用到膀胱癌患者的活性組織檢查標(biāo)本，并在取材過(guò)程中明確具體的取材部位。其取材位置是在主要病變區(qū)域、病灶與正常組織的交界位置。在染色去彩鉛需要將表面壞死組織去除防止組織干涸，還需要采集遠(yuǎn)離病灶的正常組織作為對(duì)照目標(biāo)。取材操作要準(zhǔn)確、快速，取材后應(yīng)立立即開展下一步操作。免疫結(jié)果有兩種，一種是無(wú)色片(即無(wú)陽(yáng)性信號(hào))，另外一種“雜音”染色片(有陽(yáng)性信號(hào))。陰性主要是染色在結(jié)束后切片無(wú)陽(yáng)性信號(hào)[12-13]。也可能存在真陰性及假陰性。真陰性結(jié)果一般在染色過(guò)程中無(wú)異常，組織或細(xì)胞無(wú)色片(即無(wú)陽(yáng)性信號(hào))和“雜音”染色片(有陽(yáng)性信號(hào))。假陰性結(jié)果無(wú)法反映患者疾病真實(shí)情況[14-15]，也可能是染色過(guò)程中某一個(gè)過(guò)程或環(huán)節(jié)存在異常，如組織未進(jìn)行抗原修復(fù)，部分組織必須經(jīng)過(guò)抗原修復(fù)才能檢測(cè)抗原，也可能是抗體長(zhǎng)期不用和(或)已超過(guò)有效期導(dǎo)致[10]。針對(duì)假陰性結(jié)果，需要檢驗(yàn)人員在免疫組化期間設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照組。若是陽(yáng)性對(duì)照正常，可以表明染色過(guò)程及用到的試劑并無(wú)異常，并觀察檢查組織，進(jìn)行內(nèi)部對(duì)照。如果是CD117，檢驗(yàn)人員可以從肥大細(xì)胞的染色情況對(duì)免疫組化過(guò)程及本身組織實(shí)施必要判斷。判斷主要依據(jù)正常的肥大細(xì)胞可以表達(dá)CD117，并在細(xì)胞膜或胞質(zhì)表達(dá)。

該研究發(fā)現(xiàn)，3 組CK7、P63 表達(dá)水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；3 組CK20、P53、Ki67 表達(dá)水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）?？梢?jiàn)免疫組化染色對(duì)診斷膀胱尿路上皮腫瘤及類型鑒別有較大的應(yīng)用價(jià)值，通過(guò)提升免疫組化學(xué)染色的準(zhǔn)確性，需將細(xì)胞固定，促使細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)凝固，降低內(nèi)源性或外源性反應(yīng)，避免細(xì)胞自溶，保證組織及細(xì)胞抗原性存在，防止抗原彌散或丟失，因此選擇的標(biāo)本需盡量保持新鮮，并將其及時(shí)固定，并依據(jù)操作標(biāo)準(zhǔn)保證操作的完成，提高CK7 陽(yáng)性表達(dá)率。免疫組化染色在A3 組與A2 組也存在比較明顯的差別，尤其是CK20、P53、Ki67 陽(yáng)性表達(dá)率均有效提升，可見(jiàn)A3 組與其他兩組各項(xiàng)指標(biāo)對(duì)比，檢出陽(yáng)性率相對(duì)更高（P＜0.05）。該研究與徐偉莉[16]研究有相似之處，主要體現(xiàn)于CK7(P63 的陽(yáng)性表達(dá)率為100%)、P63(P63 的陽(yáng)性表達(dá)率為100%)在3組的陽(yáng)性表達(dá)率層面，可見(jiàn)該次研究有一定科學(xué)意義。

綜上所述，CK7、P53 能夠膀胱尿路上皮腫瘤診斷提供輔助。而Ki67 與CK20 聯(lián)合對(duì)膀胱尿路上皮腫瘤及類型鑒別有較大參考價(jià)值，并判斷出膀胱尿路上皮腫瘤良性及惡性。