余麗花，和彩云

摘要：為了了解香格里拉地區(qū)豬瘟病毒抗體水平，本文對香格里拉地區(qū)5個規(guī)?；i場的不同日齡階段的豬進行抗體水平檢測，并進行情況分析。結果顯示，5個規(guī)?；i場的豬瘟抗體陽性率分別為72.72%、81.45%、66.86%、79.81%和82.29%，有4個規(guī)?；膱龈哂趪乙?guī)定的水平（>70%）;且5家規(guī)模化豬場的豬瘟抗體檢測離散度均小于40%，說明這5家豬場的整體豬瘟疫苗免疫抗體水平整齊，疫苗的免疫效果良好;哺乳仔豬、保育豬、育肥豬、后備豬、經(jīng)產(chǎn)母豬、種公豬的豬瘟抗體陽性率分別為28.85%、89.90%、85.45%、87.78%、78.46%和97.22%;各個階段的豬只的離散度分別為45.76%、30.77%、29.23%、22.47%、30.24%和22.31%，可以看出哺乳仔豬的豬瘟抗體離散度>40%，說明該階段豬瘟抗體水平一般，哺乳仔豬的豬瘟抗體主要是從母源抗體獲得，所以其抗體水平間接反映了母豬群的抗體水平;保育豬、育肥豬、后備豬、經(jīng)產(chǎn)母豬、種公豬豬瘟抗體水平離散度均較集中，豬瘟疫苗免疫效果良好。

關鍵詞：香格里拉地區(qū);豬瘟;抗體;情況分析

豬瘟是一種可以感染家豬和野豬的傳染病，對社會經(jīng)濟具有重大影響[1]。豬瘟病毒屬于黃病毒科、瘟病毒屬，是我國一類動物傳染病，各個階段和各個品種的豬均易感，感染豬的潛伏期有長有短，最急性型的感染豬在48h后就會出現(xiàn)典型癥狀，急性型的潛伏期一般為2～4d，慢性感染豬在臨床上5d以上才出現(xiàn)臨床癥狀，更有甚者感染后20d才出現(xiàn)癥狀，該病隱蔽性較強，所以在日常生產(chǎn)中養(yǎng)戶和一些衛(wèi)生防疫部門很難及時發(fā)現(xiàn)，對豬瘟疫情造成忽視，給我國養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失[2，3]。疫苗免疫目前是預防豬瘟病毒感染的重要措施[4]。評價疫苗免疫效果，最重要的手段就是抗體檢測，對當?shù)氐呢i場進行豬瘟血清學檢測，可以了解當?shù)刎i群豬瘟的免疫水平[5]。所以本文采用血清學方法對香格里拉地區(qū)的5個規(guī)?；i場進行豬瘟抗體檢測，以期為該地區(qū)的豬瘟疫苗免疫情況提供參考。

1 材料與方法

1.1 樣品

待檢血液樣品采集于香格里拉地區(qū)的5個規(guī)模化豬場，總共624份;按階段分為哺乳仔豬104份、保育豬99份、育肥豬110份、后備豬135份、經(jīng)產(chǎn)母豬104份、種公豬72份。

1.2 試劑和儀器設備

豬瘟病毒抗體檢測試劑盒購于北京愛德士元亨生物科技有限公司;酶標儀Infinite F50（美國帝肯），自動洗板機（美國帝肯HydroFlex）。

1.3 試驗方法

1）樣品采集方法。血液樣品按照5mL/頭進行采集，采集部位選擇待檢豬的前腔靜脈，通過采血管采集的血液在室溫下靜置30min后，吸出血清，放于1.5mL無菌的EP管中，同時在管上做號分組標記，最后用冷凍離心機3，000r/min進行離心10min，使血清中的紅細胞充分分離，分離到的血清放于-20℃保存待用。

2）抗體檢測。購買的抗體檢測試劑盒，根據(jù)其說明書進行操作。首先按要求對抗原包被板進行回溫處理，回溫處理之后的包被板不做任何處理，在稀釋板條上1：1稀釋好的樣品血清、陽性對照和陰性對照各取100μL加入包被板中，用微型振蕩器混勻后置于恒溫恒濕培養(yǎng)箱中孵育2h，孵育完后棄去板上的液體，然后用洗板機洗滌3次，后加入抗豬瘟病毒的辣根過氧化物標記物，在恒溫箱中進行30min標記孵育，孵育完后再次洗滌3次，然后加入TMB底物避光顯色10min，最后加入終止液，利用酶標儀在波長450nm測定各反應孔中的OD值。

3）結果判定。結果判定根據(jù)公式：樣品阻斷率（%）=100%*[陰性對照A（450）-樣品A（450）]/陰性對照A（450）。試驗成立的條件為陰性對照的OD450值>0.500，陽性對照的阻斷率≥50%。待檢樣品的阻斷率小于30%，該樣品豬瘟抗體為陰性，體內(nèi)無豬瘟抗體;若待檢樣品阻斷率≥40%，該樣品豬瘟抗體為陽性，表示有豬瘟抗體;若待檢樣品的阻斷率在30%～40%，則為可疑，對其需要重新進行檢測。

變異系數(shù)（CV）=（標準差/平均數(shù)）*100%。CV≤40%表示抗體水平整齊，豬瘟疫苗免疫效果良好;40%60%則表示抗體水平不集中，間接反映了疫苗免疫效果不好。

2 結果

2.1 不同規(guī)?；i場的整體抗體水平

由表1可以看出，5個規(guī)?；i場的豬瘟抗體陽性率分別為72.72%、81.45%、66.86%、79.81%和82.29%，有4個規(guī)模化的場高于國家規(guī)定的水平（>70%）;且5家規(guī)?；i場的豬瘟抗體檢測離散度均小于40%，說明這5家豬場的整體豬瘟疫苗免疫抗體水平整齊，疫苗的免疫效果良好;但是這5個場的整體陽性率為76.86%，陽性率不是很高。

2.2 不同階段豬群的豬瘟抗體水平

由表2可以看出哺乳仔豬、保育豬、育肥豬、后備豬、經(jīng)產(chǎn)母豬、種公豬的豬瘟抗體陽性率分別為28.85%、89.90%、85.45%、87.78%、78.46%和97.22%;各個階段的豬只的離散度分別為45.76%、30.77%、29.23%、22.47%、30.24%和22.31%，可以看出哺乳仔豬的豬瘟抗體離散度>40%，說明該階段豬瘟抗體水平一般，哺乳仔豬的豬瘟抗體主要是從母源抗體獲得，所以其抗體水平間接反映了母豬群的抗體水平;保育豬、育肥豬、后備豬、經(jīng)產(chǎn)母豬、種公豬豬瘟抗體水平離散度均較集中，豬瘟疫苗免疫效果良好。

3 討論

豬瘟病毒血清抗體的檢測對于臨床上診斷和免疫效果的評估、適宜免疫時機的選擇都有很重要的指導意義。目前豬瘟病毒的抗體檢測方法主要有正向間接血凝試驗、間接ELISA、阻斷ELISA、瓊脂擴散試驗、膠體金免疫層析試紙條等[6-8]。本文采用阻斷ELISA方法對香格里拉地區(qū)規(guī)?；i場豬瘟病毒抗體檢測情況分析，發(fā)現(xiàn)5家規(guī)?；呢i場有一家豬瘟抗體陽性率低于國家的標準（<70%），造成該場豬瘟抗體水平較低的原因可以從多方面考慮，如豬場管理員免疫方法不當、飼養(yǎng)環(huán)境條件差等，所以豬場應結合自身的實際生產(chǎn)情況進行豬瘟疫苗免疫程序的調(diào)整[9]。有研究報道抗體水平低于40%，不僅代表豬場的整體疫苗的免疫效果較好，同時還表示該豬場散發(fā)豬瘟的危險度小[10];從香格里拉這5個規(guī)?；i場的整體抗體離散度均低于40%，說明這5個規(guī)?；i場的整體豬瘟疫苗免疫效果良好。

從不同階段的豬瘟抗體檢測情況來看，哺乳仔豬的抗體陽性率為28.85%，說明了哺乳仔豬的整體抗體水平偏低，對于哺乳仔豬的抗體是從母豬的母源抗體中獲得，抗體水平偏低可能是不同仔豬受母源抗體影響程度不同所致，同時受母源抗體水平均勻度和整齊度及受母體和個體影響[11];經(jīng)產(chǎn)母豬的豬瘟抗體陽性率為78.46%，說明香格里拉地區(qū)的這5個規(guī)?；i場的整體母豬群的豬瘟疫苗免疫情況還是比較不理想，需要調(diào)整為更合適自身本場的免疫程序[12]。保育豬、育肥豬、后備豬、種公豬的豬瘟抗體陽性率分別為89.90%、85.45%、87.78%和97.22%，表明這些階段的豬瘟疫苗免疫效果較好。

綜上所述，目前規(guī)?；i場對于豬瘟的防控主要還是要靠疫苗免疫，對疫苗整體的免疫水平進行監(jiān)測是規(guī)?；i場完善自身免疫程序的一種重要手段;規(guī)?；i場可以根據(jù)本場豬瘟抗體水平的波動來合理的安排和調(diào)整疫苗，從而提高疫苗的免疫效果，避免造成疫苗及人力的浪費，所以是一種可以廣泛應用于養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)的監(jiān)測方法[13]。

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