王振麗，李書(shū)華，閆澤華

（河南質(zhì)量工程職業(yè)學(xué)院，河南平頂山 467000）

猴頭菌是一種重要的藥食兩用真菌，多糖是猴頭菌中的重要活性物質(zhì)[1]，具有保護(hù)胃黏膜[2]、抗腫瘤[3]、抗衰老、降血脂和提高免疫力等多種功能[4]。用猴頭多糖制成的藥品、保健品和食品深受人們喜愛(ài)，猴頭多糖成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)之一，成為近年來(lái)醫(yī)學(xué)和食品等領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)之一，開(kāi)發(fā)前景十分廣闊[5-6]。近年來(lái)，對(duì)猴菇子實(shí)體多糖提取條件的研究較多，但對(duì)深層發(fā)酵猴頭菌絲多糖的提取工藝，尤其是超聲波提取法研究的較少。以液體發(fā)酵生產(chǎn)的猴頭菌菌絲為原料，利用超聲波技術(shù)提取猴頭菌絲體多糖，對(duì)提取條件進(jìn)行了優(yōu)化，以提高猴頭菌絲體多糖的提取率。

1 儀器與材料

菌種：猴頭菌（Hericium erinaceus），河南質(zhì)量工程職業(yè)學(xué)院提供。

儀器：立式壓力蒸汽滅菌器、雙人凈化工作臺(tái)、振蕩器、高速臺(tái)式離心機(jī)、超聲波清洗器、低溫冷凍干燥機(jī)等。

2 試驗(yàn)方法

2.1 菌絲體多糖的提取

以轉(zhuǎn)速6 000 r/min 離心發(fā)酵的液體10 min，然后收集菌絲體，用蒸餾水清洗、干燥、粉碎，即得猴頭菌絲干粉。稱取一定量的猴頭菌絲干粉，加入40 倍體積的蒸餾水，在一定的超聲波下提取一段時(shí)間，提取液離心后過(guò)濾，濃縮上清液，向濃縮物中添加3 倍體積的95%乙醇，然后過(guò)夜沉淀、離心，沉淀再干燥即為猴頭菌絲多糖。

2.2 多糖提取率的測(cè)定

3 結(jié)果與分析

3.1 不同提取方法對(duì)HEP 的影響

稱取一定量的猴頭菌絲干粉，分別放入編號(hào)為1，2，3，4 的瓶中。其中，1 號(hào)瓶加入一定量的蒸餾水；2 號(hào)瓶加入一定體積的蒸餾水后按一定的超聲條件進(jìn)行提??；3 號(hào)瓶加入一定體積的蒸餾水在一定的微波條件下提取。然后離心，上清液再過(guò)濾、濃縮，濃縮液再加入一定量的95%乙醇，過(guò)夜沉淀；經(jīng)離心、沉淀再干燥即為猴頭菌絲多糖；測(cè)其多糖含量，比較猴頭多糖的得率。

不同提取方法對(duì)HEP 的影響見(jiàn)表1。

表1 不同提取方法對(duì)HEP 的影響/%

由表1 可知，微波提取多糖比單純以蒸餾水為浸提劑時(shí)多糖提取率提高了18.4%；以超聲波提取時(shí)多糖提取率最高，比微波輔助法提高了12.8%。因此，以下試驗(yàn)以蒸餾水為浸提劑，輔以超聲提取。

3.2 多糖提取率與超聲時(shí)間的關(guān)系

稱取6 份質(zhì)量相同的猴頭菌絲粉，加入20 倍的水，超聲功率80 W，在60 ℃的溫度下提取多糖10，20，30，40，50，60 min，測(cè)定猴頭多糖提取率。

多糖提取率與超聲時(shí)間的關(guān)系見(jiàn)圖1。

圖1 多糖提取率與超聲時(shí)間的關(guān)系

由圖1 可知，隨著超聲時(shí)間的增加，多糖提取率先增加后逐漸減小。當(dāng)超聲時(shí)間為30 min 時(shí)，猴頭多糖提取率達(dá)到最高。因此，最佳超聲時(shí)間為30 min。

3.3 多糖提取率與超聲溫度的關(guān)系

稱取同質(zhì)量的猴頭菌絲粉6 份，加入20 倍的水，超聲功率80 W，在40，50，60，70，80，90 ℃的溫度下處理30 min，測(cè)定猴頭多糖提取率。

多糖提取率與超聲溫度的關(guān)系見(jiàn)圖2。

圖2 多糖提取率與超聲溫度的關(guān)系

由圖2 可知，隨著超聲溫度的升高，多糖提取率也隨之提高，當(dāng)超聲溫度達(dá)到60 ℃時(shí)，增幅較大；當(dāng)超聲溫度超過(guò)60 ℃時(shí)，多糖提取率隨著超聲溫度的增加變化不大，從能耗角度考慮，選用超聲溫度60 ℃為宜。

3.4 多糖提取率與加水倍數(shù)的關(guān)系

稱取同質(zhì)量的猴頭菌絲粉6 份，加入10，20，30，40，50，60 倍的水，在60 ℃，80 W 超聲條件下，進(jìn)行30 min 的處理，然后測(cè)定多糖提取率。多糖提取率與加水倍數(shù)的關(guān)系見(jiàn)圖3。

圖3 多糖提取率與加水倍數(shù)的關(guān)系

由圖3 可知，隨著加水倍數(shù)的增加，多糖提取率逐漸增加。當(dāng)料液比為1∶40 時(shí)，猴頭多糖提取率最高。因此，提取過(guò)程中的料液比選擇1∶40。

3.5 提取條件的優(yōu)化

根據(jù)單因素測(cè)試的結(jié)果，選擇超聲溫度（A）、加水倍數(shù)（B）、超聲時(shí)間（C） 進(jìn)行L9（34）正交試驗(yàn)。

正交試驗(yàn)因素與水平設(shè)計(jì)見(jiàn)表2，正交試驗(yàn)結(jié)果及極差分析見(jiàn)表3。

表2 正交試驗(yàn)因素與水平設(shè)計(jì)

表3 正交試驗(yàn)結(jié)果及極差分析

由表3 的極差分析可看出，3 個(gè)因素對(duì)猴頭多糖的影響大小依次為超聲時(shí)間＞加水倍數(shù)＞超聲溫度，較優(yōu)的浸提條件為A1B2C2。因此，確定最佳提取條件為以蒸餾水為浸提溶劑，料液比1∶40，60 ℃下超聲處理30 min。

4 結(jié)論

通過(guò)研究，確定猴頭菌絲體多糖最佳提取條件為以蒸餾水為浸提溶劑，料液比1∶40，60 ℃下超聲提取30 min。