文│馬昊杰（甘肅省酒泉市肅州區(qū)下河清鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)農(nóng)村綜合服務(wù)中心）

甘肅省酒泉市肅州區(qū)畜牧業(yè)發(fā)展迅速，其中牛羊養(yǎng)殖已成為當?shù)匦竽翗I(yè)支柱性產(chǎn)業(yè)，近年來肅州區(qū)部分羊場疑似布魯氏桿菌病感染引發(fā)母羊流產(chǎn)的案例逐漸增多，相關(guān)部門曾采集血清樣品進行檢測，發(fā)現(xiàn)為布魯氏桿菌抗體陽性，說明是布魯氏桿菌病導(dǎo)致該地區(qū)母羊流產(chǎn)的原因之一。

布魯氏桿菌病是由馬耳他布魯氏桿菌（B.melitensis）感染所引起的，馬耳他布魯氏桿菌為重要的人畜共患性病原，可感染多種動物，包括牛、羊和豬等，引發(fā)嚴重的臨床癥狀，其中包括流產(chǎn)不孕、子宮內(nèi)膜炎和關(guān)節(jié)炎等，對人畜健康造成較大的威脅。當前，僅加拿大、日本和歐洲部分國家成功凈化該病。目前布魯氏桿菌病仍然在我國呈地方性流行，尤其是在一些牛羊等草食動物養(yǎng)殖業(yè)發(fā)達的省份或地區(qū)。有研究表明，雖然當前我國牛、羊個體布魯氏桿菌病陽性率分別為3.1%和3.3%，但群體陽性率高達29%和34%，由于羊布魯氏桿菌是人感染該病的主要來源，因此對布魯氏桿菌病的防控和凈化尤為重要。

當前，對于布魯氏桿菌病的診斷方法主要包括試管凝集試驗、虎紅平板凝集試驗和補體結(jié)合試驗等，該類檢測方法均存在操作簡便和診斷便捷等特點，十分適合臨床大規(guī)模樣品的檢測。本研究于2020——2021年從酒泉市肅州區(qū)部分羊場采集血清樣品1543份，用于布魯氏桿菌抗體檢測，旨在了解近年來羊布魯氏桿菌病在肅州區(qū)的流行情況，以期為該病的防控提供數(shù)據(jù)參考。

一、材料與方法

1.血清樣品采集。2020——2021年從肅州區(qū)部分鄉(xiāng)鎮(zhèn)的18個羊場共采集外表健康羊群血清樣品1543份，用于布魯氏桿菌病抗體檢測，其中2020年和2021年采集血清樣品數(shù)量分別為750份和793份。采血方式為頸靜脈采血（3～4毫升/頭），室溫靜置4～6小時取上清，其后經(jīng)低速（3000轉(zhuǎn)）離心5分鐘，取上清置于1.5毫升離心管，標記采樣時間、地點等信息，其后將樣品保存于4℃待檢。

2.檢測方法。首先采用虎紅平板凝集試驗對1543份血清樣品進行初步檢測，其后將陽性樣品再通過試管凝集試驗進行復(fù)核，以統(tǒng)計被檢測樣品布魯氏桿菌病的陽性率。

虎紅平板凝集試驗：將被檢測血清（30微升）和虎紅平板凝集抗原（30微升）充分混勻后滴加在滅菌的玻璃板上，同時設(shè)置陰性和陽性對照?；靹?分鐘內(nèi)若出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象則判定為布魯氏桿菌抗體陽性，若無凝集現(xiàn)象則為陰性。

試管凝集試驗：將虎紅平板凝集試驗初篩為陽性血清樣品，以1∶5、1∶25、1∶50和1∶100梯度稀釋后，加入等體積的抗原，并設(shè)置陰性和陽性對照。將試驗樣品、陰性和陽性對照及比濁管置于37℃恒溫箱內(nèi)24小時，參照國家標準GB/T18646/2002動物布魯氏桿菌診斷技術(shù)，根據(jù)各試管液體清亮程度判斷結(jié)果。

二、結(jié)果

1.肅州區(qū)不同地區(qū)羊布魯氏桿菌病感染情況調(diào)查結(jié)果。為初步了解肅州區(qū)羊布魯氏桿菌病感染情況，試驗從肅州區(qū)部分地區(qū)18個羊場共采集1543份血清樣品用于布魯氏桿菌抗體檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，共37份血清樣品為布魯氏桿菌抗體陽性，平均檢出率為2.4%；不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)來源樣品布魯氏桿菌病陽性率存在差異，其中鄉(xiāng)鎮(zhèn)4來源樣品的陽性率最高為3.44%，鄉(xiāng)鎮(zhèn)1-3陽性率分別為1.42%、2.84%和1.79%（表1）。

表1 肅州區(qū)不同地區(qū)羊布魯氏桿菌病感染情況調(diào)查結(jié)果

2.肅州區(qū)不同年份及品種羊布魯氏桿菌病感染情況調(diào)查結(jié)果。研究于2020年和2021年采集血清樣品數(shù)量分別為750份和793份，檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)2020年來源樣品布魯氏桿菌病檢出率高于2021年，分別為2.93%和1.89%（表2）；此外，研究采集的780份、320份和443份血清樣品分別來自小尾寒羊、湖羊和高山細毛羊，檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)小尾寒羊布魯氏桿菌檢出率最高為3.85%，湖羊和高山細毛羊檢出率分別為1.56%和0.45%。

表2 肅州區(qū)不同時期羊布魯氏桿菌病感染情況調(diào)查結(jié)果

3.不同飼養(yǎng)模式羊群布魯氏桿菌病感染情況調(diào)查結(jié)果。如表3所示，試驗采集樣品來源羊場分為自繁自養(yǎng)和半自繁自養(yǎng)（部分羊群外購），采集樣品數(shù)量分別為864份和679份，其中分別有10份和27份樣品檢測為布魯氏桿菌抗體陽性，其平均陽性率為1.16%和3.98%。此外，部分半自繁自養(yǎng)羊場外購羊群時不檢測布魯氏桿菌抗體，該類羊場來源樣品的布魯氏桿菌抗體陽性率高達5.29（19/359），而外購前檢測布魯氏桿菌抗體羊場來源樣品的陽性率稍低，為2.5%（8/320）。

表3 不同飼養(yǎng)模式羊群布魯氏桿菌病感染情況調(diào)查結(jié)果

三、討論

布魯氏桿菌屬于人畜共患性病原，其感染人類后可導(dǎo)致嚴重的臨床癥狀，其中包括關(guān)節(jié)炎和繁殖障礙（流產(chǎn)、死胎等）；同時該病原亦可感染多種動物，如牛、羊等。因此，布魯氏桿菌的流行對畜牧業(yè)發(fā)展、相關(guān)養(yǎng)殖人員和消費者健康均可造成較大的威脅。雖然近年來政府相關(guān)部門花費大量人力和物力用于布魯氏桿菌病的防控或凈化，但目前羊布魯氏桿菌在我國不同地區(qū)仍然廣泛流行。據(jù)相關(guān)文獻報道，2014年甘肅省羊布魯氏桿菌病平均檢出率為4.13%，其中武威市和張掖市部分地區(qū)檢出率分別高達11.34%和24.5%；而王耀東等調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)甘肅省臨澤縣牛羊布魯氏桿菌病檢出率均低于1%。本次研究結(jié)果表明，2020——2021年酒泉市肅州區(qū)部分羊場布魯氏桿菌病平均檢出率為2.4%（37/1543），其結(jié)果高于董新燕于2016——2018年對肅州區(qū)羊布魯氏桿菌病流行情況的調(diào)查結(jié)果（0.22%，7/3203），這可能與檢測樣品數(shù)量、樣品來源等有關(guān)，但這也說明近年來肅州區(qū)羊布魯氏桿菌病流行趨勢較為嚴峻，相關(guān)養(yǎng)殖戶和部門應(yīng)提高警惕。

經(jīng)統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，被調(diào)查的4個鄉(xiāng)鎮(zhèn)均存在布魯氏桿菌病陽性羊群，說明該病在肅州區(qū)廣泛流行，這無疑對肅州區(qū)牛羊養(yǎng)殖業(yè)和相關(guān)從業(yè)人員健康可能造成較大的威脅。值得注意的是，2020年樣品較2021年樣品檢出率高，這可能是由于2020年及時對養(yǎng)殖戶反饋檢測數(shù)據(jù)，提高了其對該病的防控意識，使得該病在2021年流行率有所降低，但仍然未達到凈化的水平。

隨著肅州區(qū)羊養(yǎng)殖業(yè)快速發(fā)展，部分養(yǎng)殖場會外購羊群以提高存欄量或進行育肥，但其中個別養(yǎng)殖場在外購羊群時忽略相關(guān)疾病的檢測，導(dǎo)致病原進入羊場使得疾病迅速流行，給羊場造成巨大的經(jīng)濟損失。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)自繁自養(yǎng)養(yǎng)殖場布魯氏桿菌檢出率顯著低于外購羊群養(yǎng)殖場，而且外購羊群不進行疾病監(jiān)測的養(yǎng)殖場樣品布魯氏桿菌病檢出率高于進行疾病監(jiān)測的養(yǎng)殖場；此外，不同品種中以小尾寒羊布魯氏桿菌病陽性率最高，這可能是由于大部分養(yǎng)殖場外購羊品種為小尾寒羊，而湖羊和高山細毛羊陽性率相對較低，這也再次提示自繁自養(yǎng)可有效防控布魯氏桿菌病的流行，而且外購羊群前進行疾病監(jiān)測是十分重要的。