劉賀，張鵬，劉一鳴，王震

（滿洲里海關(guān)技術(shù)中心，內(nèi)蒙古自治區(qū)滿洲里 021400）

我國是世界油料生產(chǎn)和消費(fèi)大國，油料作物是僅次于糧食作物的第二大農(nóng)作物［1］。油料作物的種子中含有大量脂肪，是用來提取油脂供食用或作為工業(yè)﹑醫(yī)藥原料等的一類作物。我國主要的油料作物有大豆﹑油菜﹑花生和芝麻，作為國民生活的必需品，在居民經(jīng)濟(jì)快速增長﹑消費(fèi)水平提高等因素影響下，我國食用油產(chǎn)業(yè)發(fā)展尤為矚目。油料作物的市場需求量較大，根據(jù)國家統(tǒng)計局統(tǒng)計，在2020 年我國油料作物種植面積高達(dá)1 313 萬公頃。在大量種植油料作物的同時，也暴露出一些關(guān)于大量種植生產(chǎn)過程中病蟲害防治引起的農(nóng)藥殘留問題。農(nóng)藥的廣泛使用或者不合理的使用，農(nóng)藥殘留從食物攝入人體幾率較高［2–3］，若長期食用，農(nóng)藥積累，從量變到質(zhì)變，嚴(yán)重威脅人類食品安全及生命健康。因此建立一種方法測定油料作物中農(nóng)藥殘留可以有效地規(guī)避潛在的食用風(fēng)險。

氣相色譜–質(zhì)譜聯(lián)用（GC–MS）法是常用的檢測油脂類農(nóng)藥殘留的方法之一［4–8］。楊天慶等采用快速凈化小柱進(jìn)行樣品前處理，利用氣相色譜–質(zhì)譜法檢測植物油中腐酶利和氟硅唑農(nóng)藥殘留含量［9］。然而油料作物基質(zhì)中油脂含量過高，基質(zhì)復(fù)雜，提取和凈化過程繁瑣﹑時間較長﹑效率低［10–13］，會降低痕量農(nóng)藥的回收率［14–15］，尤其是對降解速度較快的農(nóng)藥來說，檢測結(jié)果的準(zhǔn)確度較低。因此筆者參照QuEChERS 試驗(yàn)前處理方法，對油料作物中農(nóng)藥殘留進(jìn)行簡單的初篩，達(dá)到快速檢驗(yàn)的目的。本實(shí)驗(yàn)以大豆﹑油菜籽為基質(zhì)，同時對比加水浸泡﹑超聲﹑提取劑的不同對油料作物中農(nóng)藥殘留提取效率的影響，對比不同基質(zhì)中農(nóng)藥殘留的回收率與相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，建立一種同時測定不同基質(zhì)的油料作物中的農(nóng)藥殘留方法，并用GC–MS 法來檢測驗(yàn)證該方法的準(zhǔn)確性及實(shí)用性。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

氣相色譜–質(zhì)譜儀：7790–5977B 型，美國安捷倫科技有限公司。

電子天平：BS 150A 型，上海有聲恒器有限公司。

漩渦混合器：XW–200E 型，上海青浦瀘西儀器廠。

離心機(jī)：HC–3518 型，安徽中科。

氮?dú)獍l(fā)生器：MGG–400NA 型，美國Parker 公司。

去離子水發(fā)生器：Milli–Q 型，美國Millipore 公司。

氟樂靈﹑氟硅唑﹑炔螨特標(biāo)準(zhǔn)品：1 000 mg/mL，天津阿爾塔科技有限公司。

正己烷﹑冰乙酸：分析純，上海展云化工有限公司。

乙腈：色譜純，美國TEDIA 公司。

丙酮：色譜純，上海化學(xué)試劑廠。

微孔有機(jī)濾膜：孔徑為0.22 μm，上海安譜實(shí)驗(yàn)股份科技有限公司。

氦氣：純度（體積分?jǐn)?shù)）不小于99.999%，哈爾濱鼎新工業(yè)氣體有限公司。

實(shí)驗(yàn)用水均為超純水。

大豆﹑油菜籽樣品：市售。

1.2 儀器工作條件

1.2.1 色譜條件

色譜柱：DB–5MS 毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm，美國安捷倫科技有限公司）；柱升溫程序，40 ℃保持1 min，以30 ℃/min 升溫至130 ℃，再以10 ℃/min 升溫至300 ℃，保持5 min；進(jìn)樣口溫度：290 ℃；載氣：氦氣，流量為1.2 mL/min；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣體積：1 μL。

1.2.2 質(zhì)譜條件

離子源：EI 源；離子源溫度：230 ℃；四級桿溫度：150 ℃；溶劑延遲時間：6 min；3 種農(nóng)藥的保留時間及在多反應(yīng)監(jiān)測模式下的定性定量離子和碰撞能見表1。

表1 3 種農(nóng)藥的保留時間及定性、定量離子和碰撞能

1.3 樣品處理

分別稱取樣品各5.00 g 于50 mL 離心管中，加入15 mL 去離子水，漩渦混勻，超聲10 min，加入乙腈15 mL 漩渦混勻，加入5 g 硫酸鎂和1.5 g 乙酸鈉，漩渦使其混合均勻，以4 200 r/min 離心5 min，移取6 mL 有機(jī)相至裝有凈化材料［硫酸鎂900 mg，PSA（N-丙基乙二胺） 150 mg，C1815 mg］的15 mL 離心管中，漩渦，離心。吸取2 mL 上清液，在40 ℃水浴中氮吹至近干，以乙酸乙酯溶液復(fù)溶，使用微孔有機(jī)系濾膜（0.22 μm）過濾，供GC–MS 儀檢測。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品處理?xiàng)l件的優(yōu)化

選擇大豆為空白基質(zhì)，加入15 mL 水后加入標(biāo)準(zhǔn)溶液氟樂靈﹑炔螨特﹑氟硅唑使其含量分別為0.04﹑0.04﹑0.06 mg/kg，與不加水的樣品進(jìn)行加標(biāo)回收率對比，結(jié)果如圖1 所示。由圖1 可知，加去離子水后農(nóng)藥的回收率較高。選擇大豆空白基質(zhì)，加標(biāo)準(zhǔn)溶液氟樂靈﹑炔螨特﹑氟硅唑使其含量分別為0.04﹑0.04﹑0.06 mg/kg，將樣品超聲處理，超聲時間分別為0﹑5﹑10﹑15 min，結(jié)果如圖2 所示。由圖2 可知，超聲10 min 時3種農(nóng)藥的回收率最好。根據(jù)氟樂靈﹑炔螨特和氟硅唑農(nóng)藥難溶于水易溶于有機(jī)試劑的特點(diǎn)，筆者對比提取溶劑分別為丙酮﹑乙腈﹑正己烷和乙酸乙酯4 種不同提取劑的提取效果，以大豆樣品為基質(zhì)，加標(biāo)后含量分別為0.04﹑0.04﹑0.06 mg/kg，按1.3 實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行樣品前處理，結(jié)果如圖3 所示。由圖3 可知，乙腈作為提取劑時回收率相對較好，因此選擇乙腈溶液為提取劑。

圖1 3 種農(nóng)藥加水浸泡前后的回收率

圖2 超聲時間不同時農(nóng)藥的回收率

圖3 提取劑不同時農(nóng)藥的回收率

2.2 儀器工作條件的優(yōu)化

2.2.1 色譜條件

筆者參考國標(biāo)GB 23200.9–2016［16］與GB 23200.113–2018［17］的相關(guān)實(shí)驗(yàn)條件，但不完全等同于其設(shè)定條件。由于待測農(nóng)藥沸點(diǎn)較高，檢測中采用極性略低但更耐高溫的DB–5MS 色譜柱 （30 m×0.25 mm，0.25 μm），避免柱溫高于250 ℃時不耐高溫的極性色譜柱出現(xiàn)固定相流失。

油料作物基質(zhì)較復(fù)雜，農(nóng)藥容易在進(jìn)樣口發(fā)生吸附，同時隨著進(jìn)樣次數(shù)的增加，色譜峰形會出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象，影響檢測準(zhǔn)確度，因此對進(jìn)樣口襯管進(jìn)行硅烷化處理，并提高進(jìn)樣口溫度至290 ℃，柱流量升高至1.2 mL/min 以降低以上影響。

2.2.2 質(zhì)譜條件

對于已知目標(biāo)物，通常采取選擇離子掃描（SIM）模式進(jìn)行檢測，在此模式下通常會選取1 個定量離子，2～3 個定性離子，通過比對標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在同條件下的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖進(jìn)行定性定量分析。對于3 種農(nóng)藥，分別選取了1 個定量離子和2 個定性離子。選取的原則：（1）選用具有代表性的質(zhì)荷比相對較大的離子。（2）選用響應(yīng)值較高的離子。（3）定量離子選擇不易被干擾，且響應(yīng)值最高的離子。（4）如果分子離子峰響應(yīng)值可以接受，則應(yīng)予以選擇。根據(jù)以上原則的3 種農(nóng)藥定性定量離子的選擇結(jié)果見表1。

2.3 線性范圍﹑檢出限和定量限

將氟樂靈﹑炔螨特﹑氟硅唑農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)儲備液（1 000 mg/mL）放置在低溫（0～4 ℃）環(huán)境中儲存（單標(biāo)）。取適量標(biāo)準(zhǔn)儲備液，用甲苯稀釋，配制混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液，其中氟樂靈﹑炔螨特質(zhì)量濃度均分別為0.05，0.1，0.2，0.4，0.8，1.6 μg/mL，氟硅唑質(zhì)量濃度分別為0.075，0.15，0.3，0.6，1.2，2.4 μg/mL。6 個濃度水平的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液按1.2 儀器工作條件測定并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以氟樂靈﹑炔螨特﹑氟硅唑色譜峰面積（y）為縱坐標(biāo)，氟樂靈﹑炔螨特氟硅唑質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)做基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線，對測定結(jié)果做線性分析。將標(biāo)準(zhǔn)溶液逐步稀釋，在1.2色譜條件下測定，以信噪比為3 時的質(zhì)量分?jǐn)?shù)計算方法的檢出限。線性方程﹑線性范圍﹑相關(guān)系數(shù)與檢出限見表2。

表2 方法的線性方程、相關(guān)系數(shù)及檢出限

取適量混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液，在1.2 儀器工作條件下測定，得到總離子流色譜圖如圖4 所示。由圖4可知，3 種農(nóng)藥可有效分離，色譜峰峰形對稱﹑尖銳，可用于定量分析。

圖4 3 種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液的SIM 圖

2.4 加標(biāo)回收與精密度試驗(yàn)

對大豆﹑油菜籽樣品進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)研究。進(jìn)行低﹑中﹑高三個不同濃度添加水平回收試驗(yàn)，氟樂靈﹑炔螨特加標(biāo)水平分別為0.04﹑0.08﹑0.16 mg/kg，氟硅唑加標(biāo)水平為0.06，0.12，0.24 mg/kg，每個水平做6 個平行樣品測定，在大豆﹑油菜籽樣品加入標(biāo)準(zhǔn)溶液后充分混勻，使其與樣品充分接觸，在1.2 儀器工作條件下檢測，結(jié)果見表3。

表3 加標(biāo)回收與精密度試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

由表3 可知，在大豆基質(zhì)中，3 種農(nóng)藥平均回收率在92%～108%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在3.1%～8.8%之間；在油菜籽基質(zhì)中，3 種農(nóng)藥平均回收率在91%～108%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在2.5%～7.8%之間，測定結(jié)果均符合農(nóng)藥殘留分析檢測要求［16–17］。

2.5 實(shí)際樣品分析

選取大豆為實(shí)際樣品，進(jìn)行加標(biāo)試驗(yàn)，對比空白樣品和加標(biāo)樣品的總離子流色譜圖，如圖5 所示。

圖5 空白樣品與加標(biāo)樣品離子流色譜圖對比

由圖5 可知，加標(biāo)樣品在17.25﹑27.77﹑30.96 min 處有區(qū)別于空白樣品的峰出現(xiàn)，因此可知，本方法可有效鑒別樣品中氟樂靈﹑炔螨特和氟硅唑三種農(nóng)藥。

3 結(jié)論

結(jié)合QuEChERS 凈化法建立了快速檢測油料作物中氟樂靈﹑炔螨特﹑氟硅唑三種農(nóng)藥殘留的氣相色譜–質(zhì)譜分析方法。優(yōu)化了前處理方法，進(jìn)一步凈化了提取物中的干擾雜質(zhì)，簡化了提取和凈化過程﹑縮短檢驗(yàn)時間。該方法測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于油料作物中氟樂靈﹑炔螨特﹑氟硅唑殘留的測定。