段 青，蔡晶晶，杜文文，楊 楠，王祥寧，賈文杰，馬璐琳

（1云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院花卉研究所，昆明 650205；2國家觀賞園藝工程技術(shù)研究中心，昆明 650205；3云南省花卉育種重點(diǎn)實驗室，昆明 650205；4云南農(nóng)業(yè)大學(xué)園林園藝學(xué)院，昆明 650225）

0 引言

大麗花是隸屬于菊科大麗花屬的多年生球根花卉，原產(chǎn)于美洲，墨西哥是其多樣化中心，現(xiàn)世界各地廣為栽培。大麗花品種繁多、花姿優(yōu)美、花色艷麗、花期長，是世界著名的觀賞花卉[1-3]。大麗花最早由墨西哥人從山地引種至庭院種植，后傳至歐洲、美國、日本等地，大約在20世紀(jì)初大麗花被引入中國，主要用于庭院觀賞和盆栽[3]。近年來，大麗花切花逐漸在國內(nèi)流行，大量的國外品種被引入國內(nèi)，新品種選育也逐漸在國內(nèi)受到重視。雜交育種是選育大麗花新品種的主要途徑，其中，親本的花粉活力直接影響了雜交授粉的成功率[4]。因此，對大麗花花粉活力進(jìn)行準(zhǔn)確有效的檢測，是保證育種工作順利開展的重要條件，對雜交育種成功與否具有實際指導(dǎo)作用。確定大麗花花粉活力的有效測定方法、優(yōu)化方案以及了解不同品種的花粉活力情況是促進(jìn)大麗花人工授粉雜交結(jié)實、培育新品種的必要研究基礎(chǔ)。目前，國內(nèi)對大麗花的研究主要集中于引種評價[1-3,5-8]、繁育與栽培[9-12]、生理[13-15]等方面的研究，而對雜交育種中關(guān)鍵部分花粉活力萌發(fā)的研究極少，僅有張云仙[16]對大麗花散粉與結(jié)實特性進(jìn)行了初步研究。大麗花品種已超過3萬個，是園藝上龐大而重要的花卉，大量品種尚未被研究。本研究采用TTC染色法、I2-KI染色法、孢粉染色法和離體萌發(fā)法測定大麗花花粉活力，在此基礎(chǔ)上通過單因素和正交設(shè)計試驗分別對大麗花花粉的離體萌發(fā)培養(yǎng)條件及培養(yǎng)基組分進(jìn)行優(yōu)化，得到最優(yōu)方案后進(jìn)一步比較不同品種之間花粉活力大小的差異，旨在為大麗花的花粉活力鑒定、雜交育種的親本選擇提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗于2020年7—9月在云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院花卉研究所花卉遺傳育種重點(diǎn)實驗室完成。以22個大麗花栽培品種為試驗材料（圖1），其中，選取‘紫珠’、‘黃金縷’、‘紫霞’、‘白色飄雪’、‘愛丁堡’5個品種用于不同花粉活力測定方法比較試驗；選取‘紫珠’用于不同培養(yǎng)條件對大麗花花粉萌發(fā)的影響試驗；選取‘白色飄雪’用于不同培養(yǎng)基組分對大麗花花粉萌發(fā)的影響試驗；選取‘波徹兒’等22個品種用于不同大麗花品種花粉萌發(fā)率比較試驗。所有材料均種植于云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院花卉研究所團(tuán)結(jié)基地。

圖1 試驗材料的花部形態(tài)

1.2 方法

1.2.1 大麗花花粉的采集 選擇發(fā)育正常、無病蟲害且開放程度相近、但花藥尚未散粉的花朵，于8:00—10:00連同花枝一起采下，迅速插入盛有清水的三角瓶中帶回實驗室，待花朵散粉當(dāng)天使用毛筆蘸取花粉直接用于試驗。

1.2.2 花粉活力測定方法

（1）TTC染色法。用蒸餾水將2%TTC染色液（Solarbio，北京）稀釋成0.5%或1%TTC染色液，貯于棕色瓶中于4℃避光保存?zhèn)溆谩Ｓ妹P將花粉輕彈到滴有1～2滴TTC染液的載玻片上，蓋上蓋玻片放入培養(yǎng)皿內(nèi)，置于35℃恒溫箱內(nèi)，黑暗條件下染色30 min后進(jìn)行鏡檢觀察花粉染色情況。根據(jù)花粉的顏色判斷花粉活力的高低，紅色的花粉粒有活力，淡紅色或無色的花粉?；盍Φ突驘o活力[17-18]。

（2）I2-KI染色法。稱取0.25 g KI溶于10 mL蒸餾水中，待其充分溶解后，加入0.125 g I2，用蒸餾水定容至50 mL，完全溶解后貯于棕色瓶中，室溫避光保存?zhèn)溆?。用毛筆將花粉輕彈到滴有1～2滴I2-KI染液的載玻片上，蓋上蓋玻片放入培養(yǎng)皿內(nèi)，室溫染色10 min后進(jìn)行鏡檢觀察。根據(jù)染色后花粉粒的顏色來判斷花粉活力，活力強(qiáng)的花粉呈藍(lán)色，活力弱或內(nèi)含物少的花粉呈黃褐色，無活力的花粉不著色[19-20]。

（3）孢粉染色法。用孔雀綠10 mg、酚5 g、水合氯醛5 g、酸性品紅50 mg、桔紅G 5 mg、冰醋酸1～4 mL、95%乙醇10 mL、蒸餾水50 mL、丙三醇25 mL配制孢粉混合染液，置于棕色瓶內(nèi)4℃避光保存?zhèn)溆?。用毛筆將花粉輕彈到滴有1～2滴孢粉染液的載玻片上，蓋上蓋玻片放入培養(yǎng)皿內(nèi)，室溫染色30 min后進(jìn)行鏡檢觀察花粉染色情況。有活力的花粉細(xì)胞質(zhì)被染成紅色，無活力的花粉細(xì)胞壁被染成綠色[20-21]。

（4）離體萌發(fā)法。采用BK液體培養(yǎng)基，現(xiàn)配現(xiàn)用。取干凈載玻片置于墊有濾紙的培養(yǎng)皿內(nèi)，滴加適量培養(yǎng)基，用毛筆輕彈少量花粉到培養(yǎng)基中，用牙簽輕輕攪動使花粉均勻分散其中，蓋上培養(yǎng)皿蓋子，置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)1.0～3.0 h（期間注意觀察，若培養(yǎng)基干了要及時添加），取出蓋上蓋玻片，顯微鏡觀察并統(tǒng)計花粉萌發(fā)率，當(dāng)花粉管萌發(fā)長度超過1/2花粉直徑時即視為具有活力[21-22]。

1.2.3 不同培養(yǎng)條件的單因素試驗 以BK（0.01% H3BO3+0.03% CaCl2·2H2O+0.02% MgSO4·7H2O+0.01% KNO3+4%蔗糖+2% PEG4000）為基本培養(yǎng)基，設(shè)置不同pH、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間分別進(jìn)行單因素試驗（表1）。通過萌發(fā)率最高統(tǒng)計結(jié)果確定最佳pH和最佳培養(yǎng)溫度，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行不同時間的花粉萌發(fā)培養(yǎng)，通過花粉管長度確定最佳培養(yǎng)時間。由此確定的最佳pH、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間用于下一步正交試驗。

表1 單因素試驗

1.2.4 不同培養(yǎng)基組分的正交試驗 以BK為基本培養(yǎng)基，設(shè)置PEG4000、蔗糖、硼酸3個因素，每個因素設(shè)置4個水平進(jìn)行正交設(shè)計試驗（表2），每處理設(shè)置3次重復(fù)。按不同配方配制，所有培養(yǎng)基均為液體培養(yǎng)基，現(xiàn)配現(xiàn)用，無需滅菌。

表2 正交試驗因素及水平

1.2.5 鏡檢及結(jié)果統(tǒng)計 在顯微鏡Leica DM6000 B（目鏡10×，物鏡10倍）下放大100倍觀察花粉粒著色及萌發(fā)情況，并采集相應(yīng)的視野照片。每個品種（處理）設(shè)3次重復(fù)，每個重復(fù)制備5個玻片，每個玻片取5個視野，每個視野不少于30?；ǚ郏ú欢嘤?50粒）。單個重復(fù)內(nèi)觀察到的染色或萌發(fā)花粉粒及花粉?？倲?shù)采用數(shù)字累計相加后再進(jìn)行花粉活力或萌發(fā)率計算，最后取3次重復(fù)的平均值。

1.2.6 數(shù)據(jù)處理 采用WPS Office軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理，正交設(shè)計試驗采用正交設(shè)計助手ⅡⅤ3.1軟件計算K值和極差R值，SPSSAU進(jìn)行方差分析。使用R軟件繪制不同品種大麗花花粉萌發(fā)箱圖和聚類圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同花粉活力測定方法比較與分析

采用TTC染色法、I2-KI染色法、孢粉染色法和離體萌發(fā)法4種方法對大麗花品種‘紫珠’、‘黃金縷’、‘紫霞’、‘白色飄雪’、‘愛丁堡’5個品種的花粉活力進(jìn)行測定，結(jié)果（表3和圖2）顯示，經(jīng)0.5%或1%TTC溶液染色后，所有花粉顏色無明顯變化；經(jīng)I2-KI染色后，所有花粉均呈黃褐色，未見藍(lán)色、藍(lán)黑色花粉粒以及未著色花粉粒；經(jīng)孢粉染液染色后，所有花粉均呈紫紅色，未見綠色及未著色花粉粒；而離體萌發(fā)法效果良好，容易鑒別。TTC染色法、I2-KI染色法、孢粉染色法不適用于大麗花花粉活力的檢測，而離體萌發(fā)法雖耗時較長，但萌發(fā)效果良好，可準(zhǔn)確直觀地反映大麗花花粉活力狀況。

表3 不同方法檢測大麗花花粉活力的效果

圖2 不同方法檢測大麗花花粉活力鏡檢效果

2.2 不同培養(yǎng)條件對大麗花花粉萌發(fā)的影響

2.2.1 pH 在培養(yǎng)溫度25℃，培養(yǎng)時間2 h的條件下，設(shè)置pH 5.0、5.5、6.0、6.5、7.0共5個梯度進(jìn)行單因素試驗，‘紫珠’花粉萌發(fā)率統(tǒng)計結(jié)果見表4。圖3顯示隨pH的升高，花粉萌發(fā)率呈明顯上升趨勢，pH 6.0時花粉萌發(fā)率最高，達(dá)58.37%，然后隨著pH升高，花粉萌發(fā)率下降。進(jìn)一步方差分析結(jié)果表明，pH 6.0處理組與其他處理達(dá)到了極顯著性差異(P＜0.01)。

表4 pH對花粉萌發(fā)率的影響及方差分析

圖3 不同培養(yǎng)pH條件下的大麗花花粉萌發(fā)率

2.2.2 培養(yǎng)溫度 在pH 6.0、培養(yǎng)時間2 h的條件下，設(shè)置15、20、25、30、35℃ 5個溫度梯度進(jìn)行單因素試驗。圖4顯示溫度過高或過低都不利于大麗花花粉萌發(fā)，當(dāng)培養(yǎng)溫度為25℃時，花粉萌發(fā)率最高，為59.77%。進(jìn)一步方差分析結(jié)果（表5）表明，培養(yǎng)溫度對花粉萌發(fā)呈現(xiàn)出極顯著性差異(P＜0.01)。

圖4 不同培養(yǎng)溫度條件下的大麗花花粉萌發(fā)率

表5 培養(yǎng)溫度花粉萌發(fā)率的影響及方差分析

2.2.3 培養(yǎng)時間 在pH 6.0、培養(yǎng)溫度25℃的條件下，設(shè)置1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 h 5個時間梯度進(jìn)行單因素試驗，花粉萌發(fā)率統(tǒng)計結(jié)果見表6。從圖5可知，隨培養(yǎng)時間延長，花粉萌發(fā)率呈上升趨勢。當(dāng)培養(yǎng)時間達(dá)2.5 h時，花粉萌發(fā)率達(dá)64.7%，隨后進(jìn)入緩慢上升趨勢。培養(yǎng)2.5 h時，花粉管長度明顯伸長（圖6），且與培養(yǎng)時間為3.0 h相比無顯著差異。

圖5 不同培養(yǎng)時間的大麗花花粉萌發(fā)率

表6 培養(yǎng)時間對大麗花花粉萌發(fā)率的影響及方差分析

圖6 不同培養(yǎng)時間條件下的大麗花花粉萌發(fā)及花粉管伸長情況

2.3 不同培養(yǎng)基組分對大麗花花粉萌發(fā)的影響

表7結(jié)果顯示RA＞RB＞RC，可以判斷3個試驗因素對‘白色飄雪’花粉萌發(fā)率的影響程度由大到小依次為PEG、蔗糖、硼酸；從K1、K2、K3、K4的平均值看，最佳組合為A3B3C2，但該組合并未出現(xiàn)在正交設(shè)計表中。A1B1C1處理的‘白色飄雪’平均花粉萌發(fā)率最低，僅為3.0%；A3B4C2處理的平均花粉萌發(fā)率最高，平均可達(dá)62.1%，即實際最佳處理組合為A3B4C2。采用SPSSAU進(jìn)行進(jìn)一步的方差分析（表8），A、B因素對花粉萌發(fā)率的影響達(dá)到極顯著水平(P＜0.01)，而C因素并不會對試驗結(jié)果產(chǎn)生差異(P＞0.05)。

表7 L16(43)正交試驗設(shè)計表及大麗花花粉萌發(fā)率統(tǒng)計結(jié)果

表8 SPSSAU的方差分析表

2.4 不同大麗花品種的花粉萌發(fā)率比較與分析

采用篩選出的實際最佳培養(yǎng)基組合，即0.05% H3BO3+0.03% CaCl2·2H2O+0.02% MgSO4·7H2O+0.01% KNO3+25 g/L PEG4000+6%蔗糖對22個大麗花品種的花粉萌發(fā)率進(jìn)行檢測。采用SPSSAU進(jìn)行方差分析。結(jié)果（表9和圖7）顯示，不同品種的花粉萌發(fā)率全部呈現(xiàn)出顯著性差異(F=156.003，P=0.000)，花粉萌發(fā)率11.75%～78.72%，平均為54.00%；萌發(fā)率在70%以上的品種有7個，占檢測品種數(shù)的31.82%；萌發(fā)率在60%～70%的品種3個，占13.64%；萌發(fā)率在50%～60%的品種4個，占18.18%；萌發(fā)率在40%～50%的品種有3個，占13.64%；萌發(fā)率在40%以下的品種有5個，占22.72%。其中‘波徹兒’的花粉萌發(fā)率最高(78.72%)，而‘蘭花公主’的花粉萌發(fā)率最低，僅為11.75%。進(jìn)一步采用事后多重比較，品種兩兩比較結(jié)果差異用字母標(biāo)注(A～J)，從結(jié)果可知，除‘波徹兒’和‘回憶’，‘紫珠’和‘綠野仙蹤’，‘琳達(dá)夫人’和‘簡.萬.斯卡法拉’，‘芬克里夫的錯覺’、‘白色飄雪’和‘瘋狂的愛’，‘熱情似火’和

‘雪蓮花’，‘瀟灑’、‘可美大地’和‘紫霞’，‘歡樂萬圣節(jié)’、‘黃金縷’、‘琳達(dá)’和‘愛丁堡’的花粉萌發(fā)率標(biāo)注的字母一樣外(P＞0.01)，其他品種的花粉萌發(fā)率兩兩比較，標(biāo)注字母均不同，存在顯著性差異(P＜0.01)，說明大麗花花粉活力多樣性豐富。

表9 22個大麗花品種的花粉萌發(fā)率測定結(jié)果

圖7 不同大麗花品種花粉萌發(fā)情況

采用最短距離法，以花粉萌發(fā)率為變量對大麗花進(jìn)行聚類分析，供試的22個大麗花品種可以分為5個類群（圖8）。其中，Ⅰ類群包括了‘琳達(dá)夫人’等10個品種，花粉萌發(fā)率為63.84%～78.72%，是正?？捎贩N；Ⅱ類群包括‘雪蓮花’等4個品種，花粉萌發(fā)率為51.20%～57.25%，是正常可育品種；Ⅲ類群包括‘紫霞’、‘瀟灑’、‘可美大地’，花粉萌發(fā)率為40.69%～45.02%，為低不育品種；Ⅳ類群包括‘愛丁堡’等4個品種，花粉萌發(fā)率為24.78%～29.35%，為半不育品種；Ⅴ類群僅有‘蘭花公主’1個品種，花粉萌發(fā)率為11.75%，為半不育品種。

圖8 不同大麗花花粉萌發(fā)率聚類圖

3 結(jié)論

離體萌發(fā)法能夠準(zhǔn)確直觀地反映花粉是否具有活力，是測定大麗花花粉活力有效方法。pH 6.0、培養(yǎng)溫度25℃、培養(yǎng)時間2.5 h是大麗花花粉離體萌發(fā)最適宜的培養(yǎng)條件。培養(yǎng)基組分對大麗花花粉萌發(fā)的影響程度依次為PEG＞蔗糖＞硼酸，實際最佳處理組合為A3B4C2，即PEG4000 25 g/L、蔗糖60 g/L、硼酸50 mg/L的處理組合。本研究中22個大麗花品種的花粉萌發(fā)率為11.75%～78.72%，不同品種的花粉萌發(fā)率差異大，可以分為5個類群，其中有14個品種正常可育，雜交時可用作父本；8個品種為半不育或低不育，雜交時更適合作母本。

4 討論

4.1 大麗花花粉活力測定方法

本研究采用TTC染色法、I2-KI染色法、孢粉染色法和離體萌發(fā)法4種方法測定了大麗花花粉活力，結(jié)果表明，TTC染液不能使大麗花花粉粒著色，I2-KI和孢粉染液可使所有花粉著色，但是不能區(qū)分有活力花粉和敗育花粉。染色法簡便易行，但該方法是以花粉細(xì)胞中的活性物質(zhì)或者細(xì)胞膜的通透性與完整性為基礎(chǔ)，受花粉自身特性，如細(xì)胞壁的厚薄、細(xì)胞外壁成分、細(xì)胞內(nèi)各種酶活性的強(qiáng)弱等的影響較大，其適用性和準(zhǔn)確性在不同物種之間的差異極大[23-24]。本試驗中，TTC、I2-KI和孢粉染液的染色效果不佳，可能是大麗花花粉外壁太厚或花粉內(nèi)含物中支鏈淀粉含量太少等原因造成的。離體萌發(fā)法耗時長，但該方法是以花粉萌發(fā)并長出花粉管為判斷依據(jù)，能夠準(zhǔn)確直觀地反映花粉是否具有活力。Stone等[25]指出花粉離體萌發(fā)法被普遍認(rèn)為可以提供植物體內(nèi)花粉生活力的最佳估計值。本試驗的研究結(jié)果也表明離體萌發(fā)法是測定大麗花花粉活力的有效方法。了解植物的花粉活力狀況是雜交育種工作的基礎(chǔ)，本研究確定了離體萌發(fā)法是大麗花花粉活力的有效測定方法，為促進(jìn)大麗花人工授粉雜交結(jié)實、培育新品種提供了必要的研究基礎(chǔ)。但測定花粉活力的方法很多，本研究僅采用了4種測定方法，除離體萌發(fā)法，是否還有其他有效測定方法有待于進(jìn)一步探索。

4.2 不同培養(yǎng)條件對大麗花花粉離體萌發(fā)的影響

花粉萌發(fā)需要在一定的環(huán)境條件下進(jìn)行。張露等[26]研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)pH 5.5、培養(yǎng)溫度25℃時礬根的花粉萌發(fā)率明顯提高，培養(yǎng)120 min時花粉管明顯伸長，認(rèn)為采用適宜的培養(yǎng)條件對礬根的花粉萌發(fā)很有必要。詹妮和黃烈健[27]也認(rèn)為不同培養(yǎng)溫度對厚莢相相思花粉的體外萌發(fā)影響較大，當(dāng)培養(yǎng)溫度為24℃時，厚莢相相思的花粉萌發(fā)效果最好。本研究采用單因素試驗研究pH、溫度、時間對大麗花花粉離體萌發(fā)的影響，結(jié)果表明pH 6.0時，大麗花花粉的萌發(fā)率較其他pH條件的萌發(fā)率高，達(dá)到58.37%；在此基礎(chǔ)上，給予不同的培養(yǎng)溫度，溫度過高或過低都不利于大麗花花粉離體萌發(fā)，當(dāng)培養(yǎng)溫度為25℃時大麗花花粉的離體萌發(fā)率最高，達(dá)到59.77%。當(dāng)培養(yǎng)時間達(dá)到2.5 h時大麗花花粉管發(fā)生明顯伸長。本研究中，在篩選到離體萌發(fā)法可以有效測定大麗花花粉萌發(fā)的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步優(yōu)化了培養(yǎng)條件，確定了pH 6.0、培養(yǎng)溫度25℃、培養(yǎng)時間2.5 h是大麗花品種‘紫珠’花粉離體萌發(fā)最適宜的培養(yǎng)條件，但大麗花品種繁多，品種之間具有差異性，該方案是否適用于其他品種還需要進(jìn)一步研究。

4.3 不同培養(yǎng)基組分對大麗花花粉萌發(fā)的影響

花粉離體萌發(fā)在人工配制的培養(yǎng)基上進(jìn)行，受到培養(yǎng)基組分的影響。本研究采用3因素4水平的正交試驗來研究蔗糖、PEG、硼酸對大麗花花粉離體萌發(fā)的影響，從試驗結(jié)果可知，3個試驗因素對大麗花‘白色飄雪’花粉萌發(fā)率的影響程度依次為PEG＞蔗糖＞硼酸，PEG和蔗糖的影響達(dá)到了極顯著水平，而硼酸的影響較小；用于大麗花‘白色飄雪’花粉離體萌發(fā)的實際最佳組合為A3B4C2，即當(dāng)PEG含量為25 mg/L、蔗糖含量為60 g/L、硼酸含量為50 mg/L時，‘白色飄雪’花粉離體萌發(fā)率達(dá)到最高，為62.1%。PEG是一種高分子滲透劑，能夠提高細(xì)胞膜的柔軟程度和通透性，從而促進(jìn)花粉萌發(fā)和花粉管生長[26-28]。前人研究發(fā)現(xiàn)，適宜濃度的PEG能促進(jìn)桔梗[28]、菊花[29-30]、梅花[31]、山茶[32]等植物的花粉萌發(fā)。本研究結(jié)果也驗證了在一定范圍內(nèi)，PEG能顯著促進(jìn)大麗花花粉萌發(fā)，最適宜大麗花花粉萌發(fā)的PEG濃度為25 g/L，濃度過高反而會抑制花粉的萌發(fā)。

蔗糖為花粉離體萌發(fā)提供碳源并維持一定的滲透壓，它對花粉萌發(fā)和花粉管生長具有重要作用。研究表明，在一定范圍內(nèi)，礬根[26]、核桃楸[33]、平榛[34]、淫羊藿[35-36]等植物的花粉萌發(fā)率隨蔗糖濃度的升高而增加，但蔗糖濃度過高反而會抑制花粉萌發(fā)。在本研究中蔗糖濃度設(shè)置了0、20、40、60 g/L 4個水平，從正交試驗的K值看，最佳的蔗糖濃度為40 g/L，也驗證了前人的結(jié)論，即蔗糖濃度過低或過高均不利于大麗花花粉的離體萌發(fā)，當(dāng)糖濃度過低時會造成花粉壁破裂，內(nèi)溶物析出，導(dǎo)致花粉失去生活力，而蔗糖濃度過高時又會造成花粉的質(zhì)壁分離從而抑制萌發(fā)[23,37]。

前人研究表明，由于硼酸能夠增加花粉對糖的吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝，適量的硼酸有利于花粉萌發(fā)[19,33,38]。然而，本研究結(jié)果表明，硼酸對大麗花花粉的萌發(fā)不產(chǎn)生影響或影響極小，這可能是大麗花自身的花柱和柱頭內(nèi)具有足夠的硼離子來補(bǔ)償或者是由于大麗花對硼離子的需求不高造成的。

4.4 不同大麗花品種的花粉活力

花粉萌發(fā)率的測定是開花植物學(xué)特性研究中的一個重要組成部分，萌發(fā)率的高低會影響到植物的授粉、受精和結(jié)實。因此，花粉萌發(fā)率對引種栽培工作和雜交育種工作的開展具有重要指導(dǎo)意義。本研究在篩選出離體萌發(fā)法，以及最適宜的培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基組分的基礎(chǔ)上，測定了22個大麗花品種的花粉活力，結(jié)果表明不同品種的花粉萌發(fā)率差異明顯，說明大麗花花粉活力多樣性豐富?；ǚ刍盍δ軌蜃鳛榉从承叟渥影l(fā)育狀況的一項指標(biāo)，對花粉活力進(jìn)行分級，可以將不同品種劃分為不同等級的育性，并為后續(xù)雜交親本選配提供依據(jù)。一般花粉可育率0%為全不育，小于5%為高不育，6%～30%為半不育，31%～50%為低不育，大于50%為正常可育[21]。根據(jù)聚類結(jié)果可知，Ⅰ類群和Ⅱ類群的花粉萌發(fā)率均大于50%，為正常可育品種，人工雜交授粉時可用作父本；Ⅲ類群的花粉萌發(fā)率低于50%、大于30%，為低不育品種，在親本選配不建議用作父本，更適宜用作母本；Ⅳ類群和Ⅴ類群的花粉萌發(fā)率低于30%，為半不育品種，若在雜交育種工作中選作親本時，需要采取相應(yīng)的輔助措施才有助于提高雜交結(jié)實率。