李鳳娟，宋鏡南

信陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院，河南 信陽 464000

0 引言

感染性腹瀉是一種細(xì)菌感染引發(fā)的腸道傳染病，而小腸結(jié)腸炎耶爾森菌是引發(fā)該病的主要致病菌。小腸結(jié)腸炎耶爾森菌可通過糞口途徑進(jìn)入體內(nèi)，導(dǎo)致患者出現(xiàn)急性腹瀉、腸道外感染癥狀，直接對生活造成嚴(yán)重影響[1]。目前，培養(yǎng)法、RT-PCR法均是臨床上常用于檢驗(yàn)小腸結(jié)腸炎耶爾森菌的手段，前者具有操作簡單、成本低等特點(diǎn)，主要通過人工的方式促使細(xì)菌生長、繁殖，但也存在耗時(shí)、耗力的缺陷；后者檢測迅速，可避免標(biāo)本受到其他因素的影響，對檢驗(yàn)工作的開展具有積極意義[2]。此次研究，附屬醫(yī)院回顧性分析100例腹瀉患者臨床資料，對腹瀉糞便中小腸結(jié)腸炎耶爾森菌檢驗(yàn)中應(yīng)用培養(yǎng)法、RT-PCR法的價(jià)值進(jìn)行探究，詳細(xì)匯報(bào)如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取附屬醫(yī)院2019年1月-2020年10月收治的100例腹瀉患者臨床資料進(jìn)行回顧性分析，所有患者均行糞便中小腸結(jié)腸炎耶爾森菌檢驗(yàn)，以檢驗(yàn)方式的不同進(jìn)行分組，應(yīng)用培養(yǎng)法的50例患者納入對照組，而應(yīng)用RT-PCR法的患者納入觀察組。對照組中男25例，女25例；年齡23～65歲，平均（50.24±4.30）歲；每日排便次數(shù)在3～8次，平均（5.67±1.02）次。觀察組中男27例，女23例；年齡23～65歲，平均（50.39±4.25）歲；每日排便次數(shù)在3～8次，平均（5.58±1.12）次。兩組一般資料比較，差異不顯著（P>0.05），此次研究經(jīng)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者經(jīng)血常規(guī)、病原學(xué)、糞便常規(guī)檢查等明確病情為感染性腹瀉，且排便次數(shù)顯著增加，性質(zhì)發(fā)生變化；②患者臨床資料完整。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并嚴(yán)重慢性疾病者；②合并惡性腫瘤或器質(zhì)性疾病者；③合并血液系統(tǒng)疾病者；④合并內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病者。

1.2 方法

所有患者均行糞便中小腸結(jié)腸炎耶爾森菌檢驗(yàn)。首先，取患者新鮮糞便，保存于干燥、無吸水性容器中。其次，對照組應(yīng)用培養(yǎng)法：采集0.5g糞便樣本，保存于Cary-Blari保存液中，加入45mL生理鹽水后放置于16℃環(huán)境下，培養(yǎng)18h；培養(yǎng)結(jié)束后，在CIN平臺(tái)上接種，再放置于25℃環(huán)境下進(jìn)行培育，時(shí)間為24h。觀察組應(yīng)用RTPCR法：采集0.5g糞便標(biāo)本，保存于16℃環(huán)境下，培養(yǎng)18h；取200μL糞便標(biāo)本，對DNA進(jìn)行提取，將溫度控制在95℃，實(shí)施擴(kuò)增處理，擴(kuò)增長度為154bp，并設(shè)立對照組。

1.3 觀察指標(biāo)

對比兩組陽性檢出率。培養(yǎng)法陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)：與標(biāo)準(zhǔn)菌株產(chǎn)生相同生化反應(yīng)。RT-PCR法陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)：樣品經(jīng)擴(kuò)增處理后出現(xiàn)接近于預(yù)期大小的條帶；檢測費(fèi)用和檢測時(shí)間。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

本研究數(shù)據(jù)均采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理。計(jì)量資料采用（）；組間比較行t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)指標(biāo)采用（%）表示，行χ2檢驗(yàn)；若檢驗(yàn)結(jié)果顯示P<0.05說明組間差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組陽性檢出率

對照組、觀察組陽性檢出率分別為44.00%、7 6.0 0%，對比發(fā)現(xiàn)觀察組陽性檢出率更高（P<0.05），見表1。

表1 比較兩組陽性檢出率[n(%)]

2.2 比較兩組患者的檢測費(fèi)用和檢測時(shí)間

觀察組患者的檢測費(fèi)用和檢測時(shí)間均低于對照組（P<0.05），見表2。

表2 比較兩組患者的檢測費(fèi)用和檢測時(shí)間（±s）

表2 比較兩組患者的檢測費(fèi)用和檢測時(shí)間（±s）

3 討論

20世紀(jì)80年代中期，小腸結(jié)腸炎耶爾森菌曾在我國引發(fā)兩次大流行，并且逐漸受到相關(guān)領(lǐng)域?qū)W者的重視。經(jīng)過長期研究發(fā)現(xiàn)，小腸結(jié)腸炎耶爾森菌可廣泛分布于自然界，侵入人體后會(huì)潛伏1～10d，部分學(xué)者將其引發(fā)的感染劃分為3個(gè)臨床期，如急性期患者主要出現(xiàn)急性胃腸炎癥狀，包括腹痛、腹瀉等；并發(fā)癥期患者主要發(fā)生腸道外癥狀，如心肌炎、腦膜炎與敗血癥等；再發(fā)期時(shí)患者血中小腸結(jié)腸炎耶爾森菌的抗體滴度仍處于高水平[3]。此外，部分患者感染小腸結(jié)腸炎耶爾森菌后，表現(xiàn)的臨床癥狀類似于闌尾炎，易導(dǎo)致病情誤診，影響下一步的治療。雖然小腸結(jié)腸炎葉爾森病感染后患者表現(xiàn)的腹瀉具有自限性的特點(diǎn)，但其屬于革蘭氏陰性小桿菌，可對腸系膜淋巴結(jié)造成侵犯，使患者成為潛在傳染源，且該菌具有超抗原，低溫時(shí)可在氨基酸或維生素狀態(tài)下迅速繁殖，易誘發(fā)關(guān)節(jié)炎與甲狀腺疾病等，故及時(shí)、正確的診斷對下一步臨床治療方案的制定具有極為重要的意義。

臨床檢查方法均存在一定弊端，診斷效率低。小腸結(jié)腸炎耶爾森菌傳染性病菌是引起小腸結(jié)腸炎的主要因素，若未得到及時(shí)的科學(xué)治療，易引起患者機(jī)體的胃腸炎腹瀉以及呼吸系統(tǒng)疾病。另外，該病菌具有傳染性較強(qiáng)的特點(diǎn)，甚至產(chǎn)生人畜之間傳播現(xiàn)象。因此及早的診斷和治療有重要意義。在檢驗(yàn)方面，小腸結(jié)腸炎耶爾森菌可以通過食物傳播，并引發(fā)小腸結(jié)腸炎耶爾森菌病，大部分國家已將其作為進(jìn)出口食品的必檢常規(guī)項(xiàng)目。在小腸結(jié)腸炎耶爾森菌檢驗(yàn)中，培養(yǎng)法、RT-PCR法均是常用的方法，兩種方法各具優(yōu)缺點(diǎn)，如培養(yǎng)法操作簡單，可以減少肉眼判斷疾病的難度；RT-PCR法陽性檢出率高，且整個(gè)操作過程時(shí)間短、流程短，大約需要48h，同時(shí)反應(yīng)不要電池維持，能夠減少實(shí)驗(yàn)室污染，縮短檢查時(shí)間。另外，RT-PCR檢查進(jìn)行定量的檢測方法，有助于患者充分的了解機(jī)體感染情況。依據(jù)臨床患者需求，還可以將RT-PCR檢測方法與其他方法聯(lián)合檢測小腸結(jié)腸炎感染情況，增加臨床診斷的準(zhǔn)確率，提升診斷價(jià)值。滿玉霞等[4]研究發(fā)現(xiàn)RT-PCR法和培養(yǎng)法在實(shí)際應(yīng)用中取得的效果并不一致。結(jié)合此次研究結(jié)果：對照組、觀察組陽性檢出率分別為44.00%、76.00%，對比發(fā)現(xiàn)觀察組陽性檢出率更高（P<0.05），這一研究結(jié)果與李曉蕾[5]研究結(jié)果類似。以上研究結(jié)果說明，應(yīng)用RT-PCR于腹瀉患者糞便小腸結(jié)腸炎耶爾森菌檢驗(yàn)中，陽性檢出率顯著高于培養(yǎng)法，可能與RT-PCR法具備的優(yōu)勢相關(guān)。具體而言，培養(yǎng)法屬于人工細(xì)菌生長繁殖技術(shù)，主要是借助小腸結(jié)腸炎耶爾森菌的嗜冷性，經(jīng)過長時(shí)間冷增殖后對其他細(xì)菌的生長進(jìn)行抑制，并促進(jìn)目標(biāo)菌的繁殖。雖然培養(yǎng)法對操作人員的操作技術(shù)要求并不高，可降低肉眼判斷難度，但在實(shí)際檢驗(yàn)過程中，若操作人員未嚴(yán)格遵循無菌操作的原則，外界因素極易對檢驗(yàn)結(jié)果造成影響。同時(shí)，培養(yǎng)法也存在著不足之處，如無法實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化，不適用于大規(guī)模流行病學(xué)調(diào)查；檢測周期、檢測材料準(zhǔn)備時(shí)間長，易對疾病防治措施的制定與實(shí)施造成影響；在長時(shí)間培養(yǎng)過程中，易丟失部分細(xì)菌基因，其他特性可能隨之發(fā)生變化，降低生化結(jié)果的準(zhǔn)確性。RT-PCR法是將cDNA聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增、RND反轉(zhuǎn)錄雙重技術(shù)為一體的生化技術(shù)，其操作方法是醫(yī)護(hù)人員對組織或細(xì)胞內(nèi)總RNA進(jìn)行提取，以mRNA為模板，首先應(yīng)用隨機(jī)引物利用逆轉(zhuǎn)錄酶或Oligo轉(zhuǎn)錄成為cDNA，再以此為模板行PCR擴(kuò)增處理，從而獲得基因的相關(guān)信息。相對于培養(yǎng)法而言，RT-PCR法具有如下幾點(diǎn)優(yōu)勢：①RT-PCR法特異性強(qiáng)，且靈敏度高，應(yīng)用于細(xì)菌檢驗(yàn)中不僅能夠分離出RNA，而且能夠保證RNA的質(zhì)量，提升檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性[6]；②RT-PCR法擴(kuò)增速度快，適用于病原微生物檢驗(yàn)與大規(guī)模監(jiān)測；③RT-PCR法檢測迅速，一方面能夠縮短檢測時(shí)間，另一方面也有助于降低污染的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，減少檢驗(yàn)結(jié)果的誤差；④在檢驗(yàn)過程中，通過微量物質(zhì)即可獲得目的片段，以便醫(yī)護(hù)人員定量、定性分析樣品，了解感染程度，且檢驗(yàn)反應(yīng)產(chǎn)生后無須使用電泳，這一優(yōu)勢能夠避免環(huán)境污染，具有一定的環(huán)境效益。值得注意的是，即使RT-PCR法在腹瀉患者糞便小腸結(jié)腸炎耶爾森菌檢驗(yàn)中的應(yīng)用效果已得到證實(shí)，但該方法也存在著一些缺陷，如檢驗(yàn)使用的實(shí)驗(yàn)儀器價(jià)格昂貴，導(dǎo)致檢測成本較高，不僅在基層醫(yī)院中無法得到推廣，而且部分患者難以承擔(dān)檢驗(yàn)費(fèi)用；需要操作人員熟練檢驗(yàn)操作，且具備較高的技術(shù)水平；檢驗(yàn)中可能會(huì)出現(xiàn)假陽性或假陰性結(jié)果，或是得到的片段無法為檢驗(yàn)提供參考。因此，需要醫(yī)護(hù)人員在實(shí)際中根據(jù)情況合理選擇方法進(jìn)行糞便小腸結(jié)腸炎耶爾森菌檢驗(yàn)，以保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性與客觀性。

長時(shí)間腹瀉導(dǎo)致機(jī)體免疫功能和消化系統(tǒng)功能降低，體電解質(zhì)紊亂和體內(nèi)酸堿度失衡狀態(tài)，對臨床治療的效果產(chǎn)生一定的影響，因此，臨床治療及時(shí)改善患者腹瀉現(xiàn)象有著重要的意義。根據(jù)相關(guān)數(shù)據(jù)[7]顯示，依據(jù)患者的文化程度和對疾病的了解情況進(jìn)行相應(yīng)的健康教育，使患者保持積極的治療狀態(tài)。若患者大便次數(shù)較多，應(yīng)及時(shí)更換內(nèi)衣和床上用品，并且采用清水清洗或者適當(dāng)涂抹藥物，避免感染。另外，患者需要進(jìn)行體能鍛煉，增加機(jī)體的抵抗能力。隨著天氣改變，應(yīng)及時(shí)增加衣物和補(bǔ)充水分，預(yù)防患者脫水，治療過程中應(yīng)密切監(jiān)測患者的生命體征，及時(shí)應(yīng)對出現(xiàn)的不良反應(yīng)。本研究結(jié)果顯示，觀察組患者的檢測費(fèi)用和住院時(shí)間均低于對照組。說明RT-PCR法檢測在保證臨床治療療效的情況下，縮短患者住院時(shí)間和降低患者檢測痛苦。分析其原因，治療過程中告知患者及時(shí)清理大便，對肛門周圍擦洗，避免肛門周圍的皮膚因長期刺激，引發(fā)肛門周圍組織潮紅和破損的現(xiàn)象。若患者有需要應(yīng)盡可能使用一次性造口袋材料為水膠體敷料，改善肛門周圍皮膚潮紅的情況。另外，告知患者應(yīng)培養(yǎng)良好的個(gè)人衛(wèi)生習(xí)慣，肛門應(yīng)盡可能保持干燥和整潔狀態(tài)，患者排便后，用干凈的衛(wèi)生紙或者毛巾擦拭肛門，禁止使用刺激的肥皂或者熱水，引發(fā)肛門周圍感染。治療過程中患者出現(xiàn)的負(fù)面情緒，醫(yī)護(hù)人員應(yīng)及時(shí)進(jìn)行心理疏導(dǎo)，使患者積極的配合醫(yī)護(hù)人員治療，家屬應(yīng)多陪伴患者，改善治療過程中的焦慮和抑郁的態(tài)度，提升治療的臨床療效。

綜上所述，在腹瀉患者糞便小腸結(jié)腸炎耶爾森菌檢驗(yàn)中應(yīng)用RT-PCR法，能夠促進(jìn)陽性檢出率的提升，為臨床醫(yī)師診斷提供有效的依據(jù)，從而制定科學(xué)、合理的治療方法，符合臨床需求。