央 珍，王玉恒，吉哈利，于子淇，周海娟，普布卓瑪，丹真次旦

（1.西藏自治區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心(畜牧總站) 850000；2.西藏自治區(qū)獸醫(yī)生物藥品制造廠 850000；3.那曲市畜牧獸醫(yī)技術(shù)推廣總站 852000；4.西藏蓮莖生物科技有限公司 850000）

布氏桿菌病是由布氏桿菌引起的一種流產(chǎn)、生殖器官和胎膜發(fā)炎等臨床癥狀的人畜共患傳染病，牛、羊、豬等動物最常發(fā)。迄今為止，該病在世界范圍內(nèi)廣泛傳播，對畜牧業(yè)和人類健康造成嚴(yán)重?fù)p害[1-2]。因此對于該病的監(jiān)測以及防控尤為重要。酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）是國際貿(mào)易中檢測牛種布魯氏菌病的指定試驗，這種方法可以用于乳汁檢查，還可用于血清學(xué)檢查[3]。本文用 ELISA 試驗方法對西藏那曲市尼瑪縣牦牛血清進(jìn)行檢測，以了解該病在本地區(qū)的流行情況，為該病防控提供一定參考。

1 材料

1.1 血清

西藏牦牛血清100份，采集于西藏那曲市尼瑪縣。2℃～8℃保存，4h送至獸醫(yī)生物實驗室。

1.2 檢測試劑

布魯氏菌競爭ELISA抗體檢測試劑盒購于洛陽萊普生信息科技有限公司，生產(chǎn)批號為20191204。

1.3 儀器

酶標(biāo)分析儀（DNX-9620，北京普朗新技術(shù)有限公司）、恒溫培養(yǎng)箱（GNP-9050，上海三發(fā)科學(xué)儀器有限公司）、臺式高速冷凍離心機(jī)（TGL16，湖南星科科學(xué)儀器有限公司）、電熱恒溫水浴鍋（HH-2A，北京科偉永興儀器有限公司），其他耗材均為Corning公司產(chǎn)品。

2 試驗方法

在稀釋板上利用樣品稀釋液5倍稀釋待檢樣品，并吹打混勻；取預(yù)包被的酶標(biāo)板，加入50μL牛陰性對照血清和50μL牛陽性對照血清，在相應(yīng)的孔中加入50μL稀釋樣品，然后每孔再加50μL抗體溶液和酶結(jié)合物的混合物，混合均勻后于37℃條件下溫育30min；將各孔的液體廢棄，利用300μL洗滌液洗滌板孔，共重復(fù)洗滌5次，在最后一次洗滌液棄去后，將孔中殘留的洗滌液在吸水紙上拍干；每酶標(biāo)孔加入50μL顯色液A和50μL顯色液B；在37℃條件下溫育15min； 每孔加入50μL終止液，振蕩混勻，終止反應(yīng)；在酶標(biāo)儀上測量并且記錄樣品和對照的OD值（450nm）。

3 結(jié)果

由表1可得，那曲市尼瑪縣100份牦牛血清均為布氏桿菌病抗體陰性。

表1 西藏那曲牦牛中的布氏桿菌抗體與其他文獻(xiàn)數(shù)據(jù)對比情況

4 討論

布氏桿菌病是由布氏桿菌引起的一種流產(chǎn)、生殖器官和胎膜發(fā)炎等臨床癥狀的人畜共患傳染病，牛、羊、豬等動物最常發(fā)。迄今為止，該病在世界范圍內(nèi)廣泛傳播，對畜牧業(yè)和人類健康造成嚴(yán)重?fù)p害[1-2]。因此對于該病的日常監(jiān)測以及防控尤為重要。本實驗利用 ELISA 檢測方法對西藏那曲市尼瑪縣100份牦牛血清進(jìn)行血清抗體檢測，結(jié)果顯示100份牦牛血清中未檢測到布氏桿菌病抗體，進(jìn)一步表明西藏那曲市尼瑪縣無布氏桿菌病分布，這可能與西藏那曲市養(yǎng)殖環(huán)境、地理位置等原因，導(dǎo)致該病沒有傳播途徑。此外與當(dāng)?shù)孬F醫(yī)主管部門重視傳染病的防疫也有一定關(guān)系。2007年、2015年分別在新疆庫爾勒地區(qū)、吉林松原地區(qū)和吉林延邊地區(qū)的牛群中檢測到布氏桿菌病抗體，陽性率為10.97%、35.90%、58.13%。由此可見，布魯氏桿菌病在其他省區(qū)較為普遍，陽性率較高。雖然本次在西藏那曲市尼瑪縣沒有檢測到該病分布，但也應(yīng)該保持警惕，做好日常監(jiān)測，防止該病的傳入。

5 原因分析及防控措施

5.1 該病陽性率較高的原因分析

當(dāng)發(fā)現(xiàn)布魯氏桿菌病時，通常會采取屠宰患病動物和對健康動物進(jìn)行隔離和免疫等措施，但有個別養(yǎng)殖場對于奶牛、種羊、種牛等經(jīng)濟(jì)價值較高的病畜，采取隔離、逐漸淘汰等措施，從而該病傳染源沒有徹底清除，導(dǎo)致該病在牛群中流行；飼養(yǎng)管理不到位，常見流產(chǎn)羔羊、死胎等隨處亂放的惡性習(xí)慣；飼養(yǎng)環(huán)境消毒不全面，常見消毒藥選擇不匹配、配制不準(zhǔn)確、使用不正確等問題，導(dǎo)致消毒效果大大降低；養(yǎng)殖人員自我防護(hù)意識薄弱，對于該病的危害認(rèn)識不充分，也是布氏桿菌病流行主要原因之一。

5.2 防控措施

布魯氏菌病防控是一場長期的斗爭，要做好長期防控的準(zhǔn)備。 一經(jīng)發(fā)現(xiàn)，應(yīng)嚴(yán)格按照有關(guān)法律、法規(guī)的規(guī)定，采取隔離、接種、屠宰等措施，徹底切斷該病傳播環(huán)節(jié)，避免該病再次流行，造成二次危害；對于易感動物進(jìn)行強(qiáng)制性免疫，提高免疫密度；提升養(yǎng)殖人員動物疫病相關(guān)知識，做好自我防護(hù)；對于養(yǎng)殖環(huán)境進(jìn)行定期消毒，定期更換消毒種類，從而切斷該病傳播途徑；并時刻關(guān)注疫情變化和發(fā)展走向，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，嚴(yán)格執(zhí)行免疫程序，盡一切力量控制布氏桿菌病的暴發(fā)和流行[6-10]。