謝軍，毛玉潔，王思宇，劉偉，劉剛

四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院/四川省人民醫(yī)院皮膚科，成都 610000

慢性皮膚潰瘍是一種常見(jiàn)的外科疾病，病因多樣，具有病程遷延、容易復(fù)發(fā)等特點(diǎn)，且伴發(fā)皮膚炎癥，有致癌風(fēng)險(xiǎn)[1]。目前，慢性皮膚潰瘍的治療多以藥物外用為主，盡管國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究較多，但尚未研制出一種高效、價(jià)廉、方便、無(wú)不良反應(yīng)的藥物[2-3]。中醫(yī)對(duì)慢性皮膚潰瘍的治療積累了豐富的臨床經(jīng)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)了多種治療藥物，其中以紫草的療效最為突出。紫草是紫草科紫草屬多年生草本植物，具有解毒祛斑、清熱消腫、治燙傷等功效，適用于斑疹、瘡瘍、濕疹、燙傷者，是中醫(yī)治療皮膚病的常用藥物[4]。紫草素是由天然植物宗阜根中所提取的紫紅色茶醌類天然色素，以紫草醌及其衍生物為主要成分，對(duì)促進(jìn)皮膚潰瘍愈合有重要作用，但其具體機(jī)制尚未明確。An等[5]報(bào)道，Notch1信號(hào)通路可調(diào)控炎癥反應(yīng)，而慢性皮膚潰瘍以炎癥為主要特征，因此，本研究基于Notch1信號(hào)通路分析紫草素對(duì)慢性皮膚潰瘍的治療作用及其機(jī)制，以期為紫草素的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑及儀器 紫草素(HPLC≥98%，成都普菲德生物技術(shù)有限公司)；重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子凝膠(珠海億勝生物制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字S20040001，規(guī)格21 000 U×5 g)；CD34一抗(上海博湖生物科技有限公司)；生物素標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗(上海一基生物有限公司)；羥脯氨酸(hydroxyproline，HyP)試劑盒(南京建成生物工程研究所)；白細(xì)胞介素-8(interleukin-1，IL-8)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α) ELISA試劑盒(上海雙贏生物科技有限公司)；兔抗大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(transforming growth factor β1，TGF-β1)、Notch1、GAPDH一抗(美國(guó)Santa Cruz公司)；辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔IgG二抗(上海古朵生物科技有限公司)。1658033型電泳儀(美國(guó)Bio-Rad公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)健康雄性SD大鼠60只，7 周齡，體重2 6 0～2 7 0 g，由北京斯貝福生物技術(shù)有限公司提供[實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(京)2019-0010]。實(shí)驗(yàn)開(kāi)展前適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周，室溫保持在2 2～2 4 ℃，相對(duì)濕度保持在40%～70%，光照按白晝夜間各12 h，飼喂全價(jià)顆粒料，自由攝食飲水。本研究經(jīng)四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究所批準(zhǔn)(2019121309)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程符合國(guó)家和單位有關(guān)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的管理及使用規(guī)定。

1.3 慢性皮膚潰瘍大鼠模型的構(gòu)建及分組 慢性皮膚潰瘍模型構(gòu)建[6]：取50只大鼠，戊巴比妥鈉麻醉后，剃去背部長(zhǎng)毛，在脫毛區(qū)域標(biāo)記4 cm×4 cm造模面積，無(wú)菌條件下剪去造模區(qū)皮膚，深至筋膜，肌內(nèi)注射氫化可的松60 mg/kg，筋膜下噴灑金黃色葡萄球菌1 ml，醫(yī)用紗布覆蓋創(chuàng)面，包扎固定，1周后形成慢性皮膚潰瘍模型。余10只作為對(duì)照組，僅在相應(yīng)部位分離皮瓣，原位縫合。造模成功標(biāo)準(zhǔn)：用大頭針刺創(chuàng)面5 mm，無(wú)滲血且潰瘍表面有肉芽組織生長(zhǎng)，表示造模成功。共造模成功40只，隨機(jī)分為模型組、陽(yáng)性對(duì)照組及紫草素低、高劑量組，每組10只。

大鼠造模1周后開(kāi)始給藥：用生理鹽水擦拭潰瘍創(chuàng)面分泌物，清潔后給藥，并用紗條覆蓋。紫草素以大豆油稀釋成4 mg/ml混懸液，4 ℃保存。紫草素低、高劑量組分別用4、8 mg/cm2紫草素混懸液均勻涂抹創(chuàng)面，陽(yáng)性對(duì)照組用1890 U/cm2重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子凝膠涂抹創(chuàng)面(具體給藥劑量根據(jù)“人和動(dòng)物體表面積折算的等效劑量比率表”換算)，模型組與對(duì)照組給予等體積生理鹽水外敷。每日換藥1次，連續(xù)干預(yù)14 d。

1.4 大鼠皮膚潰瘍創(chuàng)面愈合情況觀察 干預(yù)第3、7、14天，用玻璃紙覆蓋大鼠潰瘍創(chuàng)面，劃出潰瘍面邊緣，沿邊剪下玻璃紙用電子天平(分度值0.1 mg)稱重，按面積比值換算成潰瘍面積(mm2)，計(jì)算潰瘍創(chuàng)面愈合率，重復(fù)測(cè)量3次。潰瘍創(chuàng)面愈合率(%)=(用藥前潰瘍面積—用藥后潰瘍面積)/用藥前潰瘍面積×100%。

1.5 HE染色觀察大鼠潰瘍創(chuàng)面肉芽組織病理學(xué)變化 干預(yù)結(jié)束后，大鼠麻醉后斷頭處死，取腹主動(dòng)脈血3 ml備用。用無(wú)菌手術(shù)器械分離潰瘍創(chuàng)面肉芽組織，切取1 cm×1 cm組織包埋，其余部分液氮冷凍。切取的組織進(jìn)行石蠟切片、HE染色，顯微鏡下觀察潰瘍創(chuàng)面肉芽組織毛細(xì)血管、炎性細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等病理學(xué)變化。

1.6 免疫組化染色觀察大鼠創(chuàng)面肉芽組織新生血管形成情況 取石蠟切片，0.01 mol/L PBS浸泡，加30% H2O2滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，熱修復(fù)抗原后，5% BSA封閉液封閉20 min，滴加CD34一抗(1:100) 4 ℃孵育過(guò)夜，滴加生物素標(biāo)記的山羊抗兔IgG孵育30 min，PBS清洗，經(jīng)DAB顯色、蘇木精復(fù)染、水洗返藍(lán)、梯度乙醇脫水、二甲苯透明后，用中性樹(shù)脂封片。利用纖維圖像采集系統(tǒng)拍照，用Image-Pro Plus6.0圖像分析軟件分析蛋白表達(dá)強(qiáng)度，以棕黃色為陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)，測(cè)定積分光密度值(integrated option density，IOD)。

1.7 水解法檢測(cè)大鼠創(chuàng)面肉芽組織中HyP含量 取30 mg液氮冷凍的創(chuàng)面肉芽組織，加堿水水解液1 ml混勻，95 ℃水解20 min，流水冷卻后各管加pH液，將pH值調(diào)為6.0～6.8，管內(nèi)液體變?yōu)辄S綠色，加蒸餾水稀釋至10 ml混勻，取4 ml稀釋液加適量活性炭混勻，3500 r/min離心10 min，離心半徑10 cm，取1 ml上清液按照HyP試劑盒說(shuō)明書步驟測(cè)定HyP含量。

1.8 Western blotting檢測(cè)大鼠創(chuàng)面肉芽組織中Notch1信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá) 取0.1 g液氮冷凍的創(chuàng)面肉芽組織，冰上裂解，4 ℃下14 000 r/min離心30 min，離心半徑10 cm，取上清，BCA法測(cè)定蛋白濃度。取20 μg蛋白上樣，經(jīng)10% SDS-PAGE電泳后，轉(zhuǎn)至PVDF膜上；5%脫脂奶粉封閉1 h，加入兔抗大鼠VEGF(1:1000)、Notch1(1:1000)、TGF-β1(1:1000)、GAPDH(1:1000)一抗4 ℃孵育過(guò)夜；TBST洗膜，加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔IgG二抗(1:15 000)室溫孵育1 h；TBST洗膜，ECL發(fā)光顯色，用Gel-pro Application軟件分析目的條帶的灰度值。

1.9 ELISA法檢測(cè)大鼠血清炎性因子水平 取大鼠腹主動(dòng)脈血，3000 r/min離心20 min，離心半徑10 cm，取上清分裝在EP管內(nèi)，-70 ℃保存，按照IL-8、TNF-α ELISA試劑盒說(shuō)明書操作，采用酶標(biāo)儀檢測(cè)450 nm波長(zhǎng)處的吸光度(OD)值，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算血清IL-8、TNF-α水平。

1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 26.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以表示，多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠皮膚潰瘍創(chuàng)面愈合率比較 各組大鼠皮膚潰瘍創(chuàng)面愈合率均隨時(shí)間延長(zhǎng)而增高，呈時(shí)間依賴性(P＜0.05)。與模型組比較，陽(yáng)性對(duì)照組及紫草素低、高劑量組干預(yù)第3、7、14天的皮膚潰瘍創(chuàng)面愈合率增高(P＜0.05)；與陽(yáng)性對(duì)照組比較，紫草素低、高劑量組干預(yù)第3、7、14天的皮膚潰瘍創(chuàng)面愈合率降低(P＜0.05)；與紫草素低劑量組比較，紫草素高劑量組干預(yù)第3、7、14天的皮膚潰瘍創(chuàng)面愈合率增高(P＜0.05)(表1)。

表1 各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)皮膚潰瘍創(chuàng)面愈合率比較(%，±s，n=10)Tab.1 Comparison of wound healing rate of skin ulcer in each group of rats at different time points (%, ±s, n=10)

表1 各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)皮膚潰瘍創(chuàng)面愈合率比較(%，±s，n=10)Tab.1 Comparison of wound healing rate of skin ulcer in each group of rats at different time points (%, ±s, n=10)

與模型組比較，(1)P＜0.05；與陽(yáng)性對(duì)照組比較，(2)P＜0.05；與紫草素低劑量組比較，(3)P＜0.05；與干預(yù)第3天比較，(4)P＜0.05；與干預(yù)第7天比較，(5)P＜0.05

組別干預(yù)第3天干預(yù)第7天干預(yù)第14天模型組12.06±0.2131.16±3.12(4)45.18±3.52(4)(5)陽(yáng)性對(duì)照組30.45±2.17(1)57.69±3.97(1)(4)80.12±3.15(1)(4)(5)紫草素低劑量組21.74±1.45(1)(2)43.69±3.91(1)(2)(4)64.12±3.14(1)(2)(4)(5)紫草素高劑量組27.69±1.22(1)(2)(3)50.66±4.48(1)(2)(3)(4)71.86±3.88(1)(2)(3)(4)(5)F 317.627164.673188.839 P＜0.001＜0.001＜0.001

2.2 各組大鼠潰瘍創(chuàng)面肉芽組織病理學(xué)變化 HE染色結(jié)果顯示，干預(yù)14 d后，模型組可見(jiàn)新生肉芽組織，伴有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；與模型組比較，紫草素低、高劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組可見(jiàn)陳舊性肉芽組織，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)依次減輕(圖1)。

圖1 各組大鼠潰瘍創(chuàng)面肉芽組織病理學(xué)變化(HE ×200)Fig.1 Histopathological changes of ulcer wound in rats of each group (HE ×200)

2.3 各組大鼠潰瘍創(chuàng)面肉芽組織中新生血管形成情況 免疫組化染色結(jié)果顯示，模型組大鼠潰瘍創(chuàng)面肉芽組織中C D 3 4 蛋白表達(dá)不明顯。與模型組比較，紫草素低、高劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組C D 3 4 蛋白表達(dá)依次增強(qiáng)(圖2)，各組I O D 值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=6 4 5 9.0 0 3，P＜0.001)。與模型組(72 455.25±1421.12)比較，紫草素低劑量組(104 725.45±2062.45)、紫草素高劑量組(149 752.54±2441.86)和陽(yáng)性對(duì)照組(197 585.23±2478.42)IOD值增高(P＜0.05)；與陽(yáng)性對(duì)照組比較，紫草素低、高劑量組IOD值降低(P＜0.05)；與紫草素低劑量組比較，紫草素高劑量組IOD值增高(P＜0.05)。

圖2 各組大鼠潰瘍創(chuàng)面肉芽組織新生血管形成情況(免疫組化 ×100)Fig.2 Neovascularization of ulcer wound in rats of each group (Immunohistochemical ×100)

2.4 各組大鼠潰瘍創(chuàng)面肉芽組織中HyP含量比較水解法檢測(cè)結(jié)果顯示，與模型組[(2.15±0.11) μg/mg]比較，紫草素低劑量組[(3.62±0.12) μg/mg]、紫草素高劑量組[(4.94±0.15) μg/mg]和陽(yáng)性對(duì)照組[(6.48±0.14) μg/mg]潰瘍創(chuàng)面肉芽組織中HyP含量增高(P＜0.05)；與陽(yáng)性對(duì)照組比較，紫草素低、高劑量組潰瘍創(chuàng)面肉芽組織中HyP含量降低(P＜0.05)；與紫草素低劑量組比較，紫草素高劑量組潰瘍創(chuàng)面肉芽組織中HyP含量增高(P＜0.05)。

2.5 各組大鼠潰瘍創(chuàng)面肉芽組織中Notch1信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)情況 Western blotting檢測(cè)結(jié)果顯示，與模型組比較，紫草素低、高劑量組大鼠潰瘍創(chuàng)面肉芽組織中VEGF、TGF-β1蛋白相對(duì)表達(dá)量增高，Notch1蛋白相對(duì)表達(dá)量降低(P＜0.05)；與紫草素低劑量組比較，紫草素高劑量組大鼠潰瘍創(chuàng)面肉芽組織中VEGF、TGF-β1蛋白相對(duì)表達(dá)量增高，Notch1蛋白相對(duì)表達(dá)量降低(P＜0.05，圖3、表2)。

圖3 Western blotting檢測(cè)各組大鼠潰瘍創(chuàng)面肉芽組織中Notch1信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)Fig.3 Notch1 signaling pathway related proteins in wound tissue of rats in each group (Western blotting)

表2 各組大鼠潰瘍創(chuàng)面肉芽組織中Notch1信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)情況(±s，n=10)Tab.2 Expression of Notch1 signaling pathway related proteins in wound tissue of rats in each group (±s, n=10)

表2 各組大鼠潰瘍創(chuàng)面肉芽組織中Notch1信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)情況(±s，n=10)Tab.2 Expression of Notch1 signaling pathway related proteins in wound tissue of rats in each group (±s, n=10)

VEGF. 血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子；TGF-β1. 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1；與模型組比較，(1)P＜0.05；與紫草素低劑量組比較，(2)P＜0.05

組別VEGFNotch1TGF-β1模型組0.25±0.030.95±0.090.27±0.02紫草素低劑量組 0.42±0.06(1)0.51±0.07(1)0.63±0.07(1)紫草素高劑量組 0.91±0.09(1)(2) 0.21±0.03(1)(2) 0.80±0.08(1)(2)F 279.603298.993187.778 P＜0.001＜0.001＜0.001

2.6 各組大鼠血清炎性因子水平比較 ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，模型組、陽(yáng)性對(duì)照組及紫草素低、高劑量組大鼠血清IL-8、TNF-α水平增高(P＜0.05)；與模型組比較，陽(yáng)性對(duì)照組及紫草素低、高劑量組大鼠血清IL-8、TNF-α水平降低(P＜0.05)；與陽(yáng)性對(duì)照組比較，紫草素低、高劑量組大鼠血清IL-8、TNF-α水平增高(P＜0.05)；與紫草素低劑量組比較，紫草素高劑量組大鼠血清IL-8、TNF-α水平降低(P＜0.05)(表3)。

表3 各組大鼠血清IL-8、TNF-α水平比較(pg/ml，±s，n=10)Tab.3 Comparison of levels of serum IL-8 and TNF-α in each group of rats (pg/ml, ±s, n=10)

表3 各組大鼠血清IL-8、TNF-α水平比較(pg/ml，±s，n=10)Tab.3 Comparison of levels of serum IL-8 and TNF-α in each group of rats (pg/ml, ±s, n=10)

IL-8. 白細(xì)胞介素-8；TNF-α. 腫瘤壞死因子-α；與對(duì)照組比較，(1)P＜0.05；與模型組比較，(2)P＜0.05；與陽(yáng)性對(duì)照組比較，(3)P＜0.05；與紫草素低劑量組比較，(4)P＜0.05

組別IL-8TNF-α對(duì)照組27.12±1.646.99±0.45模型組40.15±2.17(1)20.42±2.13(1)陽(yáng)性對(duì)照組30.12±1.47(1)(2)10.15±0.97(1)(2)紫草素低劑量組36.41±1.97(1)(2)(3)17.36±1.49(1)(2)(3)紫草素高劑量組33.12±1.75(1)(2)(3)(4)14.69±1.48(1)(2)(3)(4)F 79.454144.828 P＜0.001＜0.001

3 討 論

中醫(yī)將慢性皮膚潰瘍歸屬于“頑瘡”范疇，是指皮膚黏膜潰破、組織壞死或骨骼損傷，反復(fù)遷移不愈并伴發(fā)感染[7]。中醫(yī)外科學(xué)對(duì)體表潰瘍累積了豐富的理論和經(jīng)驗(yàn)，主張非手術(shù)治療，即清創(chuàng)、控制感染、改善血液供應(yīng)、促進(jìn)肉芽組織生長(zhǎng)和創(chuàng)面收縮等。紫草具有活血、涼血、解毒等功效，可用于血熱毒盛、瘡瘍等的治療[8]。現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，從紫草中萃取的紫草素具有抗炎、殺菌等作用，臨床用于皮膚科疾病的外治效果確切[9]。本研究探討了紫草素在慢性皮膚潰瘍治療中的作用及其可能機(jī)制，為中醫(yī)藥研發(fā)奠定了理論基礎(chǔ)。

潰瘍創(chuàng)面愈合率是反映慢性皮膚潰瘍療效的最直觀證據(jù)。本研究結(jié)果顯示，與模型組比較，紫草素低、高劑量組皮膚潰瘍創(chuàng)面愈合率增高，且紫草素高劑量組高于紫草素低劑量組，提示紫草素可促進(jìn)大鼠皮膚潰瘍創(chuàng)面愈合，且呈劑量依賴性。HE染色觀察潰瘍創(chuàng)面肉芽組織病理學(xué)變化可見(jiàn)，與模型組比較，紫草素低、高劑量組肉芽組織生長(zhǎng)良好，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)減少，進(jìn)一步提示紫草素對(duì)于慢性皮膚潰瘍具有較好的治療效果及抗炎作用。IL-8為促炎因子，被認(rèn)為是潰瘍發(fā)生過(guò)程中不可或缺的炎性介質(zhì)，其水平隨病變范圍擴(kuò)大、病變程度加深而增高[10]。TNF-α是機(jī)體炎癥及免疫反應(yīng)的重要介質(zhì)，Gourishetti等[11]發(fā)現(xiàn)，TNF-α水平異常升高是影響大鼠糖尿病足潰瘍傷口愈合的重要因素。本研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，模型組大鼠血清IL-8、TNF-α水平增高，提示慢性皮膚潰瘍大鼠存在炎癥；與模型組比較，紫草素低、高劑量組大鼠血清IL-8、TNF-α水平降低，提示紫草素具有抗炎作用，可降低大鼠血清炎性因子水平。皮膚細(xì)胞外間質(zhì)主要成分為膠原，而HyP是膠原的主要成分，可作為衡量膠原組織代謝水平的指標(biāo)，在創(chuàng)傷愈合期間，膠原合成與分泌是促進(jìn)傷口愈合的決定性因素，檢測(cè)HyP含量可反映傷口愈合的程度[12]。本研究結(jié)果顯示，與模型組比較，紫草素低、高劑量組創(chuàng)面肉芽組織中HyP含量增高，提示紫草素可促進(jìn)HyP分泌，從而促進(jìn)肉芽組織生長(zhǎng)與潰瘍創(chuàng)面愈合。除炎癥、HyP外，潰瘍創(chuàng)面肉芽組織中的新生血管情況也影響創(chuàng)面愈合。CD34為高度糖基化Ⅰ型跨膜糖蛋白，是一種黏蛋白樣血管遞質(zhì)素，可作為創(chuàng)面新生血管生成的標(biāo)志物[13]。免疫組化染色顯示，與模型組比較，紫草素低、高劑量組大鼠CD34蛋白表達(dá)強(qiáng)度及IOD值增高，提示應(yīng)用紫草素利于創(chuàng)面肉芽組織新生血管形成，可促進(jìn)創(chuàng)面愈合。由此可見(jiàn)，紫草素可消除炎癥，促進(jìn)慢性皮膚潰瘍創(chuàng)面肉芽組織新生血管形成，改善潰瘍創(chuàng)面病理學(xué)變化，最終促使創(chuàng)面愈合。

VEGF為潰瘍創(chuàng)面肉芽組織新生血管形成的主要效應(yīng)分子，Zhu等[14]發(fā)現(xiàn)，VEGF蛋白表達(dá)與新生血管形成及創(chuàng)面愈合密切相關(guān)。劉濤等[15]報(bào)道，VEGF信號(hào)通路與DLL4/Notch1通路、血管再生關(guān)系密切。VEGF為DLL4的正向調(diào)節(jié)因素，DLL4為VEGF信號(hào)通路的負(fù)向調(diào)節(jié)因素，二者共同影響特定血管內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)VEGF信號(hào)產(chǎn)生的反應(yīng)，協(xié)同促進(jìn)血管網(wǎng)的分化、形成。Notch1為VEGF的下游信號(hào)[16]，VEGF激活其受體VEGFR1、VEGFR2后，誘導(dǎo)Notch1及其配體DLL4表達(dá)，DLL4/Notch1表達(dá)上調(diào)可抑制新生血管過(guò)量芽生，促進(jìn)功能血管網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建[17]。本研究結(jié)果顯示，與模型組比較，紫草素低、高劑量組大鼠創(chuàng)面肉芽組織中VEGF蛋白表達(dá)增高，Notch1蛋白表達(dá)降低，提示VEGF、DLL4/Notch1通路經(jīng)負(fù)反饋機(jī)制協(xié)調(diào)，二者存在協(xié)同作用，紫草素可能通過(guò)上調(diào)VEGF、下調(diào)DLL4/Notch1通路發(fā)揮藥效。TGF-β1是多效能生長(zhǎng)因子，可刺激細(xì)胞外基質(zhì)分泌，調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)分化，促進(jìn)血管形成，在創(chuàng)傷修復(fù)中起促進(jìn)作用[18]。本研究結(jié)果顯示，與模型組比較，紫草素低、高劑量組中TGF-β1蛋白相對(duì)表達(dá)量增高，提示紫草素可能通過(guò)上調(diào)TGF-β1蛋白的表達(dá)促進(jìn)潰瘍創(chuàng)面愈合。

綜上所述，紫草素可能通過(guò)調(diào)節(jié)VEGF/Notch1/TGF-β1信號(hào)通路的表達(dá)促進(jìn)慢性皮膚潰瘍大鼠的創(chuàng)面愈合及新生血管形成。但本研究?jī)H初步觀察了給藥14 d內(nèi)VEGF、Notch1、TGF-β1蛋白的表達(dá)，并得出該通路在紫草素治療期間變化的結(jié)論，但VEGF/Notch1/TGF-β1信號(hào)通路在大鼠創(chuàng)面治療過(guò)程中的變化趨勢(shì)尚不明確，且通路之間有無(wú)相關(guān)性及其具體機(jī)制仍有待進(jìn)一步探討。