宋吉玲，王偉科，閆 靜，陸 娜，周祖法，袁衛(wèi)東

(杭州市農業(yè)科學研究院，浙江 杭州 310024)

桑黃是一類傳統(tǒng)藥用真菌的統(tǒng)稱，隸屬于擔子菌門(Basidiomycota)、傘菌綱(Agaricomycetes)、銹革孔菌目(Hymenochaetales)、銹革孔菌科(Hymenochaetaceae)、桑黃孔菌屬(Sanghuangporus)[1]。在《藥性論》、《本草綱目》和《神農本草經》等著作中均有桑黃及其藥效的明確記載，也被現(xiàn)代人稱為“森林黃金”[2-4]?，F(xiàn)代研究表明，桑黃提取物在提高免疫力、抑制腫瘤細胞轉移和增強抗腫瘤活性方面具有顯著效果，是目前公認的抗癌效果較好的一種珍稀藥用真菌，已成為藥用真菌研究領域的熱點[5]。

桑黃除了具有備受矚目的抗腫瘤功效外，較好的抗氧化活性也是其特色之一[6-7]。研究表明，抗氧化作用過程是預防諸多慢性疾病和衰老的關鍵步驟，因為機體在正常生長發(fā)育過程中所產生的自由基或某些氧化劑對細胞和組織有分解、破壞作用，進而影響代謝功能，并引起不同的健康問題[8-10]。因此，消除人體內過多的氧化自由基，進而會對許多氧化自由基所引起的相關疾病起到一定的預防作用，如某些癌癥[11]、心血管病[12]、糖尿病[13]、老年癡呆[14]、關節(jié)炎[15]等常見的老年疾病[16-17]。近年來，隨著桑黃孔菌屬(Sanghuangporus)屬名與分類的進一步明確[1,18]，桑黃受到越來越多的關注，而有關桑黃抗氧化活性的研究主要圍繞少數(shù)幾個種類展開，如王一菲等[19]發(fā)現(xiàn)，忍冬桑黃(S.lonicericola(Parmasto)L.W.Zhou & Y.C.Dai)和櫟生桑黃(S.quercicolaLin Zhu & B.K.Cui)均具有較強的抗氧化能力；鄭飛等[20]的研究結果表明，桑黃(S.sanghuangSheng H.Wu, L.W.Zhou & Y.C.Dai)在清除羥自由基、超氧陰離子、DPPH自由基和ABTS自由基方面表現(xiàn)出較強的能力，是一種較好的清除自由基的天然原料。桑黃抗氧化活性強弱與活性成分的種類和含量有密切的關聯(lián)，且不同品種之間亦有所差異[21]。因此本研究在種質資源收集、鑒定和篩選工作的基礎上[3,22-23]，進一步對市場上流通較多并可栽培的楊樹桑黃(S.vaninii(Ljub.) L.W. Zhou & Y.C. Dai)、鮑姆桑黃(S.baumii(Pilát) L.W. Zhou & Y.C. Dai)和桑樹桑黃(S.sanghuang)進行研究，測定發(fā)酵液多糖、多酚、黃酮和抗壞血酸含量，以及DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、羥自由基清除能力、超氧陰離子清除能力、鐵離子還原能力、亞鐵離子螯合能力、總抗氧化能力和超氧化物歧化酶(SOD)活性，分析不同桑黃品種抗氧化活性與抗氧化物質含量的關系，旨在為桑黃種質資源的開發(fā)與應用提供科學參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 菌 株 供試菌株為楊樹桑黃(S.vaninii)、鮑姆桑黃(S.baumii)和桑樹桑黃(S.sanghuang)，保藏于杭州市農業(yè)科學研究院。

1.1.2 試 劑 苯酚、硫酸、乙醇、齊墩果酸、甲醇、葡萄糖、瓊脂、KH2PO4、ZnSO4、MgSO4·7H2O、酵母浸粉、冰醋酸和高氯酸，均為分析純試劑；多酚、黃酮、抗壞血酸、DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、鐵離子還原能力、亞鐵離子螯合能力、總抗氧化能力、超氧陰離子清除能力、羥自由基清除能力和SOD活性等試劑盒，均購自南京建成生物工程研究所。

1.1.3 培養(yǎng)基 PDA固體培養(yǎng)基組成為：土豆200 g/L(煮水，過濾)、葡萄糖20.0 g/L、酵母浸粉5.0 g/L、瓊脂粉15.0 g/L、KH2PO41.0 g/L，pH自然，121 ℃ 高壓蒸汽滅菌30 min，取出置于室溫冷卻，備用。PDA液體培養(yǎng)基中，除不加瓊脂粉外，其余成分與PDA固體培養(yǎng)基相同。

1.2 試驗設計

從活化的PDA固體培養(yǎng)基中各取5個1 cm大小菌塊，接種于裝有100 mL液體培養(yǎng)基的三角瓶(250 mL)中，28 ℃、140 r/min振蕩培養(yǎng)6～8 d，使用勻漿機將其制成懸液，充分振蕩，以5.0%(體積分數(shù))的接種量接種到裝有100 mL PDA液體培養(yǎng)基的三角瓶(250 mL)中，28 ℃、140 r/min振蕩培養(yǎng)，設3個重復[18]。每隔3 d取樣1次，共測定7次。發(fā)酵液經4 ℃ 冷凍離心(12 000 r/min，10 min)后，于-80 ℃ 冰箱保存，用于測定抗氧化物質含量及抗氧化活性。pH計測量溶液pH值。

每隔3 d取50 mL液體培養(yǎng)混合物，經3層紗布過濾后，蒸餾水沖洗多次，于50 ℃烘箱烘至恒質量，稱質量并統(tǒng)計生物量，同步觀察發(fā)酵液顏色的變化。

1.3 測定指標及方法

1.3.1 抗氧化物質的測定 多糖含量采用苯酚-硫酸法[16,23-24]測定；多酚、黃酮、抗壞血酸含量和SOD活性的測定按照試劑盒說明書的步驟進行，以標準物的質量濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，制作標準曲線，并計算相應的回歸方程，分別為y=182.395 8x+2.214 3(R2=0.998 1)，y=28.277 2x+0.067 1(R2=0.998 3)，y=2 205.652 2x+10.013 6(R2=0.998 0)，y=5.476 4x+0.072 7(R2=0.998 0)，測定樣品的吸光度(測定波長均為450 nm)，計算樣品中的多糖、多酚、黃酮、抗壞血酸含量和SOD活性。

1.3.2 抗氧化物質活性的測定 (1) DPPH自由基清除能力。按照試劑盒說明書的步驟，先吸取100 μL發(fā)酵液，然后加入900 μL提取液，旋渦振蕩混勻，室溫10 000 r/min離心10 min，取上清，置冰上待測。取配制好的發(fā)酵液溶液10 μL，加入190 μL工作液，混勻后室溫避光靜置30 min，測定515 nm 處的吸光度，計算發(fā)酵液對DPPH自由基的清除能力[16]。

(2)ABTS自由基清除能力。按照試劑盒說明書的步驟，測定734 nm處的吸光度，計算發(fā)酵液對ABTS自由基的清除能力[25]。

(3)羥自由基清除能力。按照試劑盒說明書的步驟，在200 μL發(fā)酵液中依次加入各試劑，充分混勻，37 ℃保溫20 min，吸取200 μL混勻后的樣品溶液于96孔板中，測定510 nm處的吸光度，計算發(fā)酵液的羥自由基清除能力[25]。

(4)超氧陰離子清除能力。按照試劑盒說明書的步驟，取50 μL發(fā)酵液依次加入各試劑，充分混勻，室溫避光靜置5 min使之充分反應，于560 nm處采用酶標儀測定吸光度。發(fā)酵液處理完成后立即進行測定，或者低溫保存不超過24 h，計算樣品的超氧陰離子清除能力[16]。

(5)亞鐵離子螯合能力。按照試劑盒說明書的步驟，移取發(fā)酵液50 μL，加入150 μL工作液，充分混勻后，于562 nm處測定吸光度，計算發(fā)酵液的亞鐵離子螯合能力[16]。

上述指標的計算公式為：

清除能力或螯合能力=[1-(標準溶液OD值-發(fā)酵液OD值)/標準溶液OD值]×100%。

(6)總抗氧化能力。按照試劑盒說明書的步驟，取10 μL發(fā)酵液，加入20 μL應用液和170 μL ABTS工作液，充分混勻，室溫反應6 min，波長405 nm，酶標儀讀取各孔OD值，計算發(fā)酵液的總抗氧化能力[25]。

總抗氧化能力=樣品OD值/標準溶液OD值×標準溶液的抗氧化能力(8 U/mL)×V。

式中：V為提取液體積。

(7)鐵離子還原能力。按照試劑盒說明書的步驟，取40 μL發(fā)酵液，先后依次加入工作液共計340 μL，充分混勻，10 min內于700 nm處測定吸光度，計算發(fā)酵液的鐵離子還原能力[16]。

鐵離子還原能力=樣品OD值/標準溶液OD值×標準溶液的鐵離子還原能力(12 U/mL)×V。

式中：V為提取液體積。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

試驗結果以“平均值±標準差”表示，利用SPSS 17.0軟件進行單因素方差分析(ANOVA)、t檢驗和LSD檢驗。采用Pearson相關性分析法，以3個菌株各指標的平均值為基準，分析抗氧化物質含量與其抗氧化活性間的相關性[23]。運用Qrigin 8.0軟件制圖[25]。

2 結果與分析

2.1 3個桑黃菌株培養(yǎng)過程中菌絲體生物量和pH的變化

由圖1和圖2可見，在液體培養(yǎng)過程中，3個桑黃菌株的菌絲生物量均呈先上升后下降的趨勢，并隨著培養(yǎng)時間的延長逐漸由淺黃色變?yōu)辄S褐色，直至黑褐色。培養(yǎng)后3～6 d，菌絲生物量均呈緩慢增長模式；6～12 d則呈現(xiàn)快速增長模式，其中楊樹桑黃菌株由0.127 g增加至0.337 g，鮑姆桑黃由0.132 g增加至0.369 g，桑樹桑黃由0.158 g增加至0.396 g；培養(yǎng)18 d時，菌絲生物量均達到最大，此時楊樹桑黃菌絲生物量略低于其余2個菌株；之后伴隨著菌絲自溶，菌株生物量均有所下降。

圖1 3個桑黃菌株液體培養(yǎng)過程中的菌絲體生物量變化Fig.1 Changes in mycelial biomass of three Sanghuangporus strains during culture

圖2 3個桑黃菌株液體培養(yǎng)過程中顏色的變化Fig.2 Changes in colour of three Sanghuangporus strains during liquid culture

3個桑黃菌株液體培養(yǎng)過程中pH的變化(圖3)顯示，3個桑黃菌株液體培養(yǎng)基隨時間推移逐漸轉酸，接種初期pH為6.03～6.08，隨著培養(yǎng)時間的延長，至21 d時pH下降至4.52～4.80，這可能是由于菌株分泌的次級代謝產物逐漸增加，使得培養(yǎng)液pH逐漸下降。

圖3 3個桑黃菌株液體培養(yǎng)過程中培養(yǎng)基pH的變化Fig.3 Changes in pH of medium in liquid culture of threeSanghuangporus strains

2.2 3個桑黃菌株培養(yǎng)過程中多糖的變化

多糖是一類由多個醛糖或酮糖通過糖苷鍵聚合而成的高分子化合物，也是目前研究最為深入的活性成分[26-27]。由圖4可知，3個桑黃菌株發(fā)酵液中的多糖含量均呈先上升后下降的趨勢，其中楊樹桑黃和鮑姆桑黃的多糖含量略高于桑樹桑黃，變化趨勢與課題組前期研究結果[23]相近，培養(yǎng)15 d時，3個桑黃菌株發(fā)酵液中的多糖含量均達到最高，其中楊樹桑黃為0.370 mg/mL、鮑姆桑黃為0.371 mg/mL，桑樹桑黃為0.321 mg/mL。

2.3 3個桑黃菌株培養(yǎng)過程中多酚的變化

多酚是廣泛存在于植物和高等真菌體內的芳香族羥基衍生物的總稱，其在抗腫瘤、抑菌、消炎和抗氧化方面具有較好的生理活性[16,19-20]。3個桑黃菌株液體培養(yǎng)過程中多酚含量的變化見圖5。由圖5可見，楊樹桑黃和桑樹桑黃的多酚含量在培養(yǎng)18 d時達到最高，均為0.416 μg/L；但二者變化趨勢有別，楊樹桑黃在培養(yǎng)開始后的前9天多酚含量逐漸降低，隨后快速上升，而桑樹桑黃在培養(yǎng)12 d后多酚含量才開始逐漸增加；鮑姆桑黃多酚含量在培養(yǎng)前9天時快速上升，隨后有所下降并在18 d時達到最大(0.396 μg/L)。培養(yǎng)18 d后，3個桑黃菌株多酚含量均有所下降。在整個培養(yǎng)過程中，楊樹桑黃的多酚含量幾乎一直高于鮑姆桑黃和桑樹桑黃(9 d除外)，說明該菌株多酚分泌能力較強。

圖5 3個桑黃菌株培養(yǎng)過程中多酚的變化Fig.5 Changes in polyphenol contents of three Sanghuangporus strains during culture

2.4 3個桑黃菌株培養(yǎng)過程中黃酮的變化

黃酮類物質是一類天然產物，廣泛存在于植物和真菌的次級代謝產物中，具有抗癌、抗衰老、抗炎、降血糖、降血壓、調節(jié)內分泌等諸多功能[20,28-29]。由圖6可見，隨著培養(yǎng)時間的延長，3個桑黃菌株的黃酮含量均呈不斷上升趨勢。楊樹桑黃在培養(yǎng)后的3～15 d，黃酮含量由40.63 ng/L上升至52.837 ng/L，于培養(yǎng)21 d時達到最大值，為53.543 ng/L。培養(yǎng)3～9 d時，鮑姆桑黃和桑樹桑黃的黃酮含量分別由41.667，48.357 ng/L上升至49.257，51.187 ng/L；12 d時有所下降，分別在15和18 d達最大值，為56.467和57.503 ng/L。綜合來看，桑樹桑黃黃酮含量明顯優(yōu)于其他2個菌株，而楊樹桑黃和鮑姆桑黃在培養(yǎng)初期差異不明顯，培養(yǎng)后期鮑姆桑黃明顯優(yōu)于楊樹桑黃。

2.5 3個桑黃菌株培養(yǎng)過程中抗壞血酸的變化

圖7顯示，在整個培養(yǎng)過程中，3個桑黃菌株的抗壞血酸含量整體均呈現(xiàn)先緩慢上升再下降又上升的趨勢，其中楊樹桑黃的抗壞血酸含量一直高于其他2個菌株，并在培養(yǎng)的第15天時達到最大值，為28.899 μmol/L；鮑姆桑黃和桑樹桑黃均于21 d時達到最大值，分別為25.328和26.435 μmol/L。

圖7 3個桑黃菌株培養(yǎng)過程中抗壞血酸的變化Fig.7 Changes in ascorbic acid contents of threeSanghuangporus strains during culture

2.6 3個桑黃菌株的DPPH自由基清除能力

抗氧化能力是指對機體內ROS等氧化物質的清除能力[16]。由圖8可見，在21 d的液體培養(yǎng)過程中，3個桑黃菌株的DPPH自由基清除能力整體均呈先上升后下降趨勢，其中楊樹桑黃在培養(yǎng)3～15 d時緩慢增大，并在培養(yǎng)15 d時達到最大，為87.71%；鮑姆桑黃除在培養(yǎng)的前6天有所下降外，其余時間一直呈穩(wěn)定增長趨勢，于18 d達到最大值，為95.83%；桑樹桑黃在培養(yǎng)的3～9 d時，DPPH自由基清除能力顯著提高，9～12 d又快速下降，隨后又緩慢升高，至18 d達到最大值，為81.92%。綜合分析來看，楊樹桑黃的DPPH自由基清除能力整體優(yōu)于桑樹桑黃和鮑姆桑黃，但在培養(yǎng)18 d時，以鮑姆桑黃的DPPH自由基清除能力最高。

2.7 3個桑黃菌株的ABTS自由基清除能力

ABTS是一種水溶性自由基引發(fā)劑，氧化后生成藍綠色的ABTS+陽離子自由基，在抗氧化劑作用下，ABTS+還原成無色的ABTS，且抗氧化能力越強，顏色越淡[16]。圖9顯示，在21 d液體培養(yǎng)過程中，楊樹桑黃和桑樹桑黃的ABTS自由基清除能力總體均呈先上升后下降的趨勢，分別于18和15 d達到最大，為88.22%，78.61%；鮑姆桑黃的ABTS自由基清除能力總體也呈先上升后下降的趨勢，于12 d時達到最大，為75.09%。從整個培養(yǎng)過程來看，楊樹桑黃的ABTS自由基清除能力明顯優(yōu)于鮑姆桑黃和桑樹桑黃。

圖9 3個桑黃菌株培養(yǎng)過程中ABTS自由基清除能力的變化 Fig.9 Changes in ABTS free radical scavenging ability ofthree Sanghuangporus strains during culture

2.8 3個桑黃菌株的羥自由基清除能力

羥自由基是人體新陳代謝過程中產生的毒性最強、危害最大的一種自由基，其可以使組織中的糖類、氨基酸、蛋白質、核酸等物質遭受氧化性損傷和破壞，導致細胞壞死或突變[30]。圖10顯示，整個培養(yǎng)過程中，楊樹桑黃菌株的羥自由基清除能力在培養(yǎng)3～6 d變化不大，隨著培養(yǎng)時間的延長，其清除能力呈逐漸上升趨勢，于15 d時達到最大，為87.61%；鮑姆桑黃的羥自由基清除能力呈現(xiàn)階梯式上漲趨勢，于21 d時達到最大，為90.08%；桑樹桑黃的羥自由基清除能力在培養(yǎng)6～9 d急劇下降，隨后又呈快速上升趨勢，并在15 d達到最大，為94.06%。綜合分析來看，桑樹桑黃的羥自由基清除能力整體優(yōu)于楊樹桑黃和鮑姆桑黃。

2.9 3個桑黃菌株的超氧陰離子清除能力

超氧陰離子作為生物體代謝過程中產生的一種自由基，與機體衰老和病變密切相關[31-32]。圖11顯示，3個桑黃菌株的超氧陽離子清除能力整體均呈先上升后下降趨勢，且均于15 d時達到最大，其中楊樹桑黃的超氧陰離子清除能力最大，為84.30%；鮑姆桑黃菌株的超氧陰離子清除能力整體低于楊樹桑黃和桑樹桑黃，為76.07%；桑樹桑黃的超氧陰離子清除能力則隨著時間延長而呈階梯式上漲，達到最大時為83.38%。綜合分析來看，楊樹桑黃的超氧陰離子清除能力整體優(yōu)于桑樹桑黃和鮑姆桑黃。

圖11 桑黃菌株培養(yǎng)過程中超氧陰離子清除能力的變化Fig.11 Changes in superoxide anion scavenging ability of three Sanghuangporus strains during culture

2.10 3個桑黃菌株的總抗氧化能力

總抗氧化能力是指對機體內ROS的清除能力，過多的ROS會導致大量的細胞損傷并產生毒性，因此，消除過多的ROS對于生物體的健康十分重要[19,33]。由圖12可見，楊樹桑黃在培養(yǎng)3～9 d時保持穩(wěn)定增長，之后快速提升，于18 d達到最強，為6.61 U/mL；鮑姆桑黃培養(yǎng)9 d后的總抗氧化能力穩(wěn)定增強，于21 d時達到最大，為6.47 U/mL；桑樹桑黃的總抗氧化能力整體呈先上升后下降再上升的趨勢，于15 d時最低，在21 d時達到最大，為6.85 U/mL。綜合分析來看，桑樹桑黃在總抗氧化能力方面明顯優(yōu)于楊樹桑黃和鮑姆桑黃。

2.11 3個桑黃菌株的鐵離子還原能力

鐵離子還原能力是Fe3+被抗氧化物質還原成Fe2+，以供機體正常生長發(fā)育的能力[34-35]。由圖13可見，楊樹桑黃的鐵離子還原能力隨培養(yǎng)時間延長呈先增強后減弱的趨勢，于15 d達到最大值，為8.89 U/mL；鮑姆桑黃的鐵離子還原能力在培養(yǎng)9 d前明顯高于桑樹桑黃和楊樹桑黃，于18 d時達到最大值，為9.77 U/mL；桑樹桑黃的鐵離子還原能力在培養(yǎng)12 d后明顯提升，并在18 d達到最大值，為9.45 U/mL。綜合分析來看，鮑姆桑黃的鐵離子還原能力整體優(yōu)于桑樹桑黃和楊樹桑黃。

圖13 3個桑黃菌株培養(yǎng)過程中鐵離子還原能力的變化Fig.13 Changes in iron reduction ability of threeSanghuangporus strains during culture

2.12 3個桑黃菌株的亞鐵離子螯合能力

由圖14可知，在整個培養(yǎng)過程中，楊樹桑黃和鮑姆桑黃的亞鐵離子螯合能力整體優(yōu)于桑樹桑黃(18 d除外)，整體均表現(xiàn)出先上升后下降的趨勢。培養(yǎng)3～9 d時3個菌株處于平穩(wěn)狀態(tài)，均于12 d時均達到最大值，此時楊樹桑黃、桑樹桑黃和鮑姆桑黃的亞鐵離子螯合能力分別為82.53%，79.73%和80.1%，之后均有所下降。

2.13 3個桑黃菌株的超氧化物歧化酶(SOD)活性

SOD是催化去除ROS的重要酶類，在生物體的生長、代謝、抗氧化和氧化還原調節(jié)中起主要作用[19,33]。由圖15可見，楊樹桑黃的SOD活性在培養(yǎng)的3～6 d有所下降，之后增長迅速，于18 d時達到最大值，為12.75 U/mL；桑樹桑黃和鮑姆桑黃SOD活性在培養(yǎng)3～12 d呈浮動增長(先升后降)，之后均迅速增強，均在18 d達到最強，分別為12.34和11.43 U/mL。綜合分析來看，楊樹桑黃的SOD活性整體優(yōu)于鮑姆桑黃和桑樹桑黃。

圖15 3個桑黃菌株培養(yǎng)過程中超氧化物歧化酶活性的變化Fig.15 Changes in activity of superoxide dismutase of three Sanghuangporus strains during culture

2.14 3個桑黃菌株抗氧化物質與抗氧化活性的相關性分析

Pearson相關性分析結果(表1)表明，桑黃真菌活性成分與其抗氧化活性有一定的相關性，其中多糖含量與DPPH自由基清除能力、鐵離子還原能力、亞鐵離子螯合能力呈極顯著正相關，與ABTS自由基清除能力、超氧陰離子清除能力呈顯著正相關；多酚含量與DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、鐵離子還原能力、超氧陰離子清除能力、亞鐵離子螯合能力和SOD活性呈極顯著正相關；黃酮含量與鐵離子還原能力、羥自由基清除能力、超氧陰離子清除能力和總抗氧化能力呈極顯著正相關，與ABTS自由基清除能力和SOD活性呈顯著正相關；抗壞血酸含量與DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、羥自由基清除能力、超氧陰離子清除能力和SOD活性呈極顯著正相關，與鐵離子還原能力呈顯著正相關。

表1 桑黃真菌抗氧化物質與其抗氧化活性的相關性Table 1 Correlations between antioxidants and their antioxidant activity of Sanghuangporus strains

桑黃菌株活性成分中與ABTS自由基清除能力和超氧陰離子清除能力相關性最強的為抗壞血酸含量，相關系數(shù)分別為0.819和0.855；與鐵離子還原能力和超氧化物歧化酶活性相關性最強的為多酚含量，相關系數(shù)分別為0.642和0.759；與羥自由基清除能力和總抗氧化能力相關性最強的為黃酮含量，相關系數(shù)分別為0.790和0.765；與亞鐵離子螯合能力相關性最強的為多糖含量，相關系數(shù)為0.606。

3 討 論

桑黃作為一類具有重要藥用價值的大型真菌，因其具有多種生理活性且無毒副作用而受到廣泛的關注。本研究發(fā)現(xiàn)，楊樹桑黃、鮑姆桑黃和桑樹桑黃3個桑黃菌株均具有較強的抗氧化能力，但在不同抗氧化能力指標及強度上的表現(xiàn)不盡相同。隨著培養(yǎng)時間的延長，其抗氧化能力總體呈現(xiàn)階梯上升趨勢，各抗氧化指標多在培養(yǎng)12～18 d時達到峰值。3個桑黃菌株亞鐵離子螯合能力均于培養(yǎng)12 d時達到最強；培養(yǎng)15 d時，楊樹桑黃清除羥自由基和超氧陰離子的能力達到最強；培養(yǎng)18 d時，楊樹桑黃ABTS自由基清除能力和SOD活性達到最大，鮑姆桑黃的鐵離子還原能力和DPPH自由基清除能力也達到最強，與此同時桑樹桑黃和楊樹桑黃的總抗氧化能力亦達到峰值。綜合分析可知，桑黃菌株在培養(yǎng)12～18 d時抗氧化能力最強，這與鄭飛等[20]“桑黃清除DPPH自由基能力在培養(yǎng)初期(第2天)最強”的研究結果不同，可能與菌株來源差異或培養(yǎng)條件不同有關，具體原因有待進一步研究。

桑黃的次級代謝產物含量與抗氧化能力具有一定的相關性[27]。本研究發(fā)現(xiàn)，楊樹桑黃的多酚和抗壞血酸含量較高，鮑姆桑黃菌株的多糖含量較高，桑樹桑黃的黃酮含量較高。相關分析結果表明，多酚含量與DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、鐵離子還原能力、超氧陰離子清除能力、亞鐵離子螯合能力和SOD活性呈極顯著正相關；而黃酮含量與鐵離子還原能力、羥自由基清除能力、超氧陰離子清除能力和總抗氧化能力呈極顯著正相關；抗壞血酸含量與DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、羥自由基清除能力、超氧陰離子清除能力和SOD活性呈極顯著正相關；多糖含量與DPPH自由基清除能力、鐵離子還原能力、亞鐵離子螯合能力呈極顯著正相關。綜合分析來看，多酚、黃酮和抗壞血酸為抗氧化能力的主要活性物質，多糖次之，這與應瑞峰等[36]、崔詩遙等[37]、錢驊等[38]及王偉科等[39]對桑黃子實體的研究結果相一致。與桑黃(S.sanghuang)[20]、櫟生桑黃(S.quercicola)[19]和忍冬桑黃(S.lonicericol)[19]3個菌株的活性物質含量相比，本研究3個桑黃菌株的多糖含量相對較高，多酚、黃酮和抗壞血酸含量相對較低，可能是由于供試菌株生長狀況差異導致不同代謝產物的合成有所偏差。