盧博敏， 云曉宇， 陳星宇， 楊靖宇， 陳鳳， 柳旭偉*

(1.新疆農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院 動物科技分院，新疆 昌吉 831100； 2.新疆天康畜牧科技有限公司，新疆 昌吉 831100)

高致病性豬藍(lán)耳病是一種病毒性傳染病，由豬的繁殖與呼吸系統(tǒng)結(jié)合病毒引起，在國內(nèi)外豬藍(lán)耳病都以其極大的危害性威脅著養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展[1]。豬藍(lán)耳病以高致病性和傳染性使豬群引發(fā)繁殖及呼吸障礙綜合征和腹瀉癥狀，使豬群出現(xiàn)較高的死亡率[2]。并且豬藍(lán)耳病屬于免疫抑制性疫病，其病毒通過抑制豬的體液免疫和細(xì)胞免疫致使豬的免疫力下降，從而引發(fā)多種其他疫病引發(fā)的并發(fā)癥[3]。為了促進石河子地區(qū)養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，提高規(guī)模化養(yǎng)豬的經(jīng)濟效益。作者于2020年7—12月對石河子周邊地區(qū)5個團場12個規(guī)?；i場進行高致病性豬藍(lán)耳病的病原學(xué)監(jiān)測，以期為科學(xué)防控高致病性豬藍(lán)耳病奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品來源

樣品來自2020年7—12月石河子地區(qū)5個監(jiān)測團場共12個規(guī)模豬場。其中，A團5個豬場，包括132份血清樣、107份睪丸樣、32份組織樣，共計271份樣；B團3個豬場，包括112份血清樣、98份睪丸樣、22份組織樣，共計232份樣；C團2個豬場，包括72份血清樣、67份睪丸樣、13份組織樣，共計152份樣；D團1個豬場，包括43份血清樣、43份睪丸樣、7份組織樣，共計93份樣；E團1個豬場，包括46份血清樣、36份睪丸樣、7份組織樣，共計89份樣。

1.1.2 試劑與儀器

核酸提取試劑(上海之江生物科技有限公司)、異丙醇(分析純)、實時熒光RT-PCR檢測試劑盒(哈爾濱元亨生物藥業(yè)有限公司)、無水乙醇(分析純)、豬繁殖與呼吸綜合征(類NADC-30毒株)。

高壓蒸汽滅菌鍋(LS-50H D型)，超凈工作臺(BBS-SDC型)，高速離心機(Sorvall Legend Micro 17型)，核酸提取機(EX3600型)，實時熒光定量PCR分析儀(MICPOCDX48型)，移液器(LE196AL0440445型)。

1.2 方法

1.2.1 樣品采集和處理

無菌條件下采集肺、睪丸液、肝、扁桃體、心、脾、腎等病變器官及血清等，將病樣研磨處理，使用消毒后的器械取心肝脾肺腎各5 g，置于研磨器玻璃管中(一豬一離心管一套處理器械)，加入0.5 mL生理鹽水反復(fù)擠壓研磨3 min，取1 mL研磨液置于離心管中備用。將處理后的樣本于12 000 r·min-1離心10 min，提取上清液備用。

1.2.2 提取病毒DNA

取200 μL的病樣上清液，通過核酸提取試劑(上海之江生物科技有限公司)的提取說明書進行核酸提取，獲得病毒DNA。

1.2.3 PCR檢測

設(shè)被檢樣品、陰性對照和陽性對照的總和為X，則反應(yīng)體系：無菌無核酸酶水7.0(X+1)μL，RT-PCR反應(yīng)液12.5(X+1)μL，酶混合液1.0(X+1)μL，熒光探針2.5(X+1)μL。

按照實時熒光RT-PCR檢測試劑盒(哈爾濱元亨生物藥業(yè)有限公司)說明書配制體系，分別加入2 μL DNA模板和2 μL陰陽性對照標(biāo)準(zhǔn)品。在熒光PCR儀上進行以下反應(yīng)：42 ℃ 5 min，95 ℃ 10 s；循環(huán)95 ℃ 5 s，60 ℃ 35 s，共40次，在每次循環(huán)第二步(60 ℃ 35 s)收集熒光信號。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同生產(chǎn)階段病原監(jiān)測

表1顯示，在監(jiān)測的12個豬場為期半年的840份送檢樣品中，高致病性藍(lán)耳病樣品96份，病原監(jiān)測陽性率平均為11.42%。其中，病原監(jiān)測陽性率最高的為5～9周齡的保育豬，為12.35%；病原監(jiān)測陽性率最低的為1～4周齡的仔豬，僅為8.33%，其余日齡豬的病原監(jiān)測陽性率均≥10%。

表1 不同生產(chǎn)階段的病原監(jiān)測結(jié)果

2.2 不同團場病原監(jiān)測

表2顯示，在監(jiān)測的5個團場規(guī)模豬場半年內(nèi)送檢的840份樣品中，5個團場的平均陽性監(jiān)測率≥10%。其中，高致病性豬藍(lán)耳病陽性率最高為C團，達(dá)13.55%；陽性率最低為E團，為10.11%。

表2 不同團場的病原監(jiān)測結(jié)果

2.3 各監(jiān)測團場每月病原監(jiān)測對比

監(jiān)測的5個團場規(guī)模豬場半年內(nèi)送檢結(jié)果為陽性的96份樣品中，分別有A團場29份、B團場27份、C團場21份、D團場10份、E團場9份。圖1顯示，5個團場監(jiān)測出陽性的數(shù)量在8—10月基本都有上升的趨勢，A、B、E團場有較為明顯的上升曲線，其中以A團場最具代表性。除D團場以外，其他團場的陽性檢出均在10月達(dá)到峰值。在10—12月，檢測出陽性數(shù)量均呈下降趨勢，其中A、B、E團場下降趨勢較為明顯，C、D團場下降雖不明顯，但總體來看檢出陽性量呈下降趨勢。

圖1 不同團場每月高致病性豬藍(lán)耳病病原監(jiān)測結(jié)果

3 討論與分析

3.1 不同生產(chǎn)階段病原監(jiān)測結(jié)果分析

從不同生產(chǎn)階段病原監(jiān)測結(jié)果來看，陽性率均低于13.00%，在10.00%上下波動，平均值為11.42%，大大低于肖盛中等[4]報道的新疆北疆地區(qū)豬場高致病豬藍(lán)耳病毒79.01%的陽性率，高于彭曉玲等[5]報道的新疆地區(qū)生豬高致病性豬藍(lán)耳病的6.4%的陽性率。從監(jiān)測結(jié)果以及石河子市高致病性豬藍(lán)耳病疫情發(fā)生的動態(tài)情況來看，各團場豬場未出現(xiàn)高致病性豬藍(lán)耳病的暴發(fā)，這可能與石河子市規(guī)?；i場的科學(xué)養(yǎng)殖技術(shù)水平較高，有著較為完善、成熟的疫病防控系統(tǒng)及應(yīng)急處置措施等有關(guān)。同時，石河子市規(guī)?；i場主要是新疆的上市企業(yè)進行生產(chǎn)，各監(jiān)測的規(guī)?；i場均有自己較為完善的產(chǎn)業(yè)鏈，保證了飼料、藥品、器械及豬只的流通等各環(huán)節(jié)的供應(yīng)安全，未攜帶病毒。

從監(jiān)測結(jié)果來看，1～4周齡的仔豬的陽性率最低，這可能與這一階段較高的母源抗體水平有關(guān)。同時，還可能與其環(huán)境溫度、濕度較穩(wěn)定，不隨外界溫度變化出現(xiàn)較明顯波動，以及接種疫苗的頻率和飼養(yǎng)管理等有關(guān)[6]。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，各監(jiān)測豬場使用的系統(tǒng)化標(biāo)準(zhǔn)手冊中關(guān)于初生仔豬更為規(guī)范詳盡。由此可見，要盡可能的控制一切人為因素，形成理論系統(tǒng)的養(yǎng)殖指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)，對于每一階段的豬只都要形成系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)的飼養(yǎng)體系。做到“一豬一策，一場一標(biāo)準(zhǔn)”的因地制宜、因豬防控，降低患病率及陽性檢出率。相比規(guī)?；B(yǎng)殖，小型經(jīng)營管理的散養(yǎng)農(nóng)戶應(yīng)該更加重視這一問題，集力群策共同防控[7]。

3.2 不同團場病原監(jiān)測結(jié)果分析

不同團場的樣品檢測陽性率均不相同。除C團場外，其他團場基本控制在11.00%左右，未出現(xiàn)大規(guī)模暴發(fā)較為穩(wěn)定，稍高于張建新等[8]報道的全國高致病性豬藍(lán)耳病10.00%的陽性率，這可能與石河子地區(qū)地處新疆北部，氣候干燥，一年內(nèi)溫度變化較極端，造成病原易在空氣中傳播有關(guān)。但C團場檢出陽性率較高，根據(jù)訪問與調(diào)查發(fā)現(xiàn)，C團場在2020年下半年從其他地方引進1批種豬，而其他團場的豬場未引進其他豬只，且在7月中旬對C團場送檢的樣品中，有1輛外省牌號運豬車輛檢測為弱陽性，但同時間段引進豬只并未檢測出陽性。因此，C團場豬藍(lán)耳病檢出陽性率較高，可能是因為引進豬群的運輸車輛攜帶病毒進入該豬場，因未消殺干凈而感染了易感豬群，或者引進豬群時豬的應(yīng)激反應(yīng)使免疫力下降，易被病豬感染。因此，需要做好隔離防控，堅持自繁自養(yǎng)原則不輕易引種[9]。如果必須進行引種，則須調(diào)查清楚所要引進豬場的疫情，之外還要進行血清學(xué)檢測，非陽性豬可引進。引進豬群后還應(yīng)建立合適的隔離區(qū)，以方便做好監(jiān)測，正常需要4～5周時間隔離檢疫，健康者方可混群飼養(yǎng)[10]。

3.3 不同監(jiān)測月份病原監(jiān)測結(jié)果分析

各團豬場送檢量與陽性檢出量具有一定的時間性，在9—10月時都較高，出現(xiàn)異常的病豬增加，檢測出患攜有高致病性豬藍(lán)耳病的豬只也有所增加，且在9—10月數(shù)量都偏大。但全國范圍來看，尤其對比南方某些地區(qū)規(guī)?；B(yǎng)豬場并未出現(xiàn)豬藍(lán)耳病陽性明顯的季節(jié)變化[11]。根據(jù)豬藍(lán)耳病毒的傳染途徑發(fā)現(xiàn)，病毒的傳播與風(fēng)向、風(fēng)速及溫度濕度有著密不可分的關(guān)系。根據(jù)新疆地區(qū)氣溫的變化可以大概推斷出，該病適宜的溫度是20～35 ℃，當(dāng)超過35 ℃以上，濕度低，紫外線強，在空氣中就沒有了傳播能力。在進入11月以后，新疆石河子地區(qū)氣溫迅速下降，空氣濕度低，病毒的活性降低，且基于9、10月陽性率升高，人為進行緊急干預(yù)調(diào)整，病毒的傳播途徑被切斷，12月時藍(lán)耳病原檢出陽性率降低[12]。

4 小結(jié)

將各監(jiān)測豬場送檢的病料，運用實驗室檢查、熒光定量PCR進行診斷，確定其為高致病性豬藍(lán)耳病病毒感染，確診之后對不同個體的疾病進行專項分析，并制定相應(yīng)的防控措施。新疆石河子地區(qū)未出現(xiàn)大規(guī)模的高致病性豬藍(lán)耳病疫情，但受監(jiān)測的豬場不同程度因為某些原因出現(xiàn)了高致病性禽流感的感染。在制定措施時需要根據(jù)各規(guī)?；i場內(nèi)的具體情況，關(guān)注重點突出情況，根據(jù)當(dāng)?shù)貧夂驐l件及豬只生長最適條件有所側(cè)重，藥物預(yù)防需要根據(jù)場內(nèi)豬只的藥敏程度對癥下藥[13]。

對豬場使用PCR技術(shù)進行病原性監(jiān)測是當(dāng)今比較流行的分子檢測技術(shù)，在各領(lǐng)域都進行了廣泛的應(yīng)用，高致病性豬藍(lán)耳病病毒對規(guī)模豬場養(yǎng)殖危害極大。從利用病原學(xué)為期半年的集中監(jiān)測來看，共監(jiān)測的規(guī)?；i場12個，監(jiān)測樣品數(shù)840份，從2020年下半年所監(jiān)測點的高致病性豬藍(lán)耳病陽性率來看，監(jiān)測點平均病原陽性檢出率為11.42%，月均最高為10月，檢出率為14.88%，監(jiān)測點陽性檢出率最高為13.55%。高致病性豬藍(lán)耳病的發(fā)病率高于秋季溫度，為20～35 ℃時，但其他季節(jié)也存在陽性感染。高致病性豬藍(lán)耳病病毒感染率高，難以根除，不容忽視。