杜 賓

(太原學(xué)院 藝術(shù)設(shè)計(jì)系，山西 太原 030032)

0 引言

線蟲(chóng)(Nematode)廣泛分布于整個(gè)生態(tài)系統(tǒng)中，它可分為植物寄生線蟲(chóng)、動(dòng)物寄生線蟲(chóng)和自由生活線蟲(chóng)，其中植物寄生線蟲(chóng)是專性寄生在植物體上，嚴(yán)重破壞植物生長(zhǎng)發(fā)育的病原線蟲(chóng)。全世界植物寄生線蟲(chóng)正式報(bào)道有200余屬5 000余種[1]。它們成為危害人類(lèi)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、林業(yè)生產(chǎn)、蔬菜種植、食品加工安全的重要的致病因子，每年造成的損失高達(dá)1 500億美元，直接影響農(nóng)林業(yè)生產(chǎn)的可持續(xù)發(fā)展。其中，根結(jié)線蟲(chóng)造成的損失占到全部損失的50%以上，常常造成毀滅性的危害[2]。

1 根結(jié)線蟲(chóng)的危害和種類(lèi)

根結(jié)線蟲(chóng)隸屬于線蟲(chóng)門(mén)(Nematoda)，側(cè)尾腺綱(Secernentea)，墊刃目(Tylenchida)，異皮科(Heteroderidae)，根結(jié)線蟲(chóng)屬(Meloidogyne)。該蟲(chóng)蟲(chóng)體細(xì)小，是一種寄主高度?；?、食性廣泛、多雜的植物病原物，寄生于植物根部，誘導(dǎo)根系細(xì)胞代謝紊亂，形成巨型細(xì)胞，呈現(xiàn)根結(jié)或根瘤狀態(tài)，危害根部維管束組織，使植物快速死亡[3]。

全世界報(bào)道的根結(jié)線蟲(chóng)共有90多種，我國(guó)報(bào)道的記錄有57種，其中南方根結(jié)線蟲(chóng)(M.incognita)、花生根結(jié)線蟲(chóng)(M.arenaria)、爪哇根結(jié)線蟲(chóng)(M.javanica)和北方根結(jié)線蟲(chóng)(M.hapla)最為常見(jiàn)，并且危害嚴(yán)重，為傳統(tǒng)意義上的4個(gè)主要代表類(lèi)群。除此以外，危害嚴(yán)重的根結(jié)線蟲(chóng)種類(lèi)還有法拉克斯根結(jié)線蟲(chóng)(M.fallax)、納西根結(jié)線蟲(chóng)(M.naasi)和奇特伍德根結(jié)線蟲(chóng)(M.chitwoodi)。

2 根結(jié)線蟲(chóng)分類(lèi)鑒定的方法

根結(jié)線蟲(chóng)分類(lèi)方法包括形態(tài)學(xué)(測(cè)量值)鑒定和分子生物學(xué)(DNA-PCR)鑒定兩個(gè)方面。形態(tài)學(xué)鑒定方法主要有根結(jié)線蟲(chóng)外部形態(tài)學(xué)特征和測(cè)量值法、輔助鑒別寄主實(shí)驗(yàn)法、生物化學(xué)方法(同工酶電泳技術(shù)、細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù))等 。分子生物學(xué)鑒定主要依據(jù)現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)和方法，通過(guò)分析核酸DNA、線粒體DNA等生物大分子的不同，直接檢測(cè)根結(jié)線蟲(chóng)種群之間和種群內(nèi)部、群體間在生物遺傳物質(zhì)組成上的特有差異，從而鑒別其種類(lèi)。根結(jié)線蟲(chóng)基因組小，只有5.1×107個(gè)堿基對(duì)，DNA分析種內(nèi)及種間的遺傳變異相對(duì)容易，因此隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，DNA分析技術(shù)已經(jīng)成為形態(tài)學(xué)鑒定的一個(gè)重要的不可或缺的輔助手段，使根結(jié)線蟲(chóng)的鑒定更加準(zhǔn)確快速。目前利用分子生物學(xué)鑒定根結(jié)線蟲(chóng)的方法主要有ITS-PCR分析、RFLP分析、RAPD分析、ALFP分析和PCR-RFLP分析。我國(guó)系統(tǒng)研究根結(jié)線蟲(chóng)的分類(lèi)開(kāi)始于2000年，短短20年時(shí)間，取得突飛猛進(jìn)的成效。結(jié)合聯(lián)用不同的鑒定方法，精準(zhǔn)識(shí)別、鑒定不同的根結(jié)線蟲(chóng)種類(lèi)，為進(jìn)一步研究其病害奠定基礎(chǔ)。

2.1 形態(tài)學(xué)特征鑒定

形態(tài)學(xué)特征是根結(jié)線蟲(chóng)鑒定的基礎(chǔ)和依據(jù)，例如Chitwood提出雌蟲(chóng)的會(huì)陰花紋的重要性。早期的根結(jié)線蟲(chóng)分類(lèi)都以其形態(tài)學(xué)特征和相關(guān)測(cè)量值相結(jié)合方式確定其分類(lèi)學(xué)地位，形態(tài)學(xué)特征將一直作為線蟲(chóng)分類(lèi)的關(guān)鍵性狀指標(biāo)。根結(jié)線蟲(chóng)形態(tài)學(xué)鑒定分類(lèi)主要依據(jù)外部形態(tài)特征和內(nèi)部結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，前者包括根結(jié)線蟲(chóng)的蟲(chóng)體形態(tài)、尾部特征(透明尾長(zhǎng)度、比例等)、中食道球結(jié)構(gòu)和形狀、背食道腺開(kāi)口到口針基球的測(cè)量距離(DGO)、排泄孔位置、雌蟲(chóng)會(huì)陰花紋模式、雄蟲(chóng)和二齡幼蟲(chóng)頭部框架結(jié)構(gòu)、口針狀態(tài)等；后者包括生殖系統(tǒng)和消化系統(tǒng)的解剖顯微結(jié)構(gòu)等。根據(jù)Hirschmann對(duì)線蟲(chóng)形態(tài)學(xué)鑒定的論述，雌蟲(chóng)、雄蟲(chóng)和二齡幼蟲(chóng)是其鑒定的主要3個(gè)蟲(chóng)態(tài)，由于其它蟲(chóng)態(tài)外部形態(tài)的不穩(wěn)定性，失去鑒定價(jià)值。在某些種類(lèi)的根結(jié)線蟲(chóng)中，由于缺乏雄蟲(chóng)或雄蟲(chóng)數(shù)量極少，并且雌蟲(chóng)和二齡幼蟲(chóng)的形態(tài)特征十分明顯，通過(guò)雌蟲(chóng)和二齡幼蟲(chóng)即可鑒定其種類(lèi)。成熟雌蟲(chóng)形態(tài)是卵圓形到鴨梨形，但是由于受到生活環(huán)境的影響、生殖時(shí)期、蟲(chóng)態(tài)發(fā)育等各種因素，雌蟲(chóng)的體型變化很大，在種類(lèi)鑒定中，雌蟲(chóng)蟲(chóng)體形態(tài)只是起到輔助作用，前段的頸的長(zhǎng)短也具有多樣性，整體上有大致范圍，例如爪哇根結(jié)線蟲(chóng)通常比北方根結(jié)線蟲(chóng)長(zhǎng)，但是具體種類(lèi)間變異很大[4]。頸部前端的口針是種類(lèi)鑒定的主要指標(biāo)之一，口針的形態(tài)是從質(zhì)的方面對(duì)其分析鑒定，主要包括錐體、基桿和基球的結(jié)構(gòu)狀態(tài)，尤其是口針基部球的高寬值、各部位的連接情況等。口針長(zhǎng)度測(cè)量值是從量的方面對(duì)其種類(lèi)的分析鑒定。DGO值在根結(jié)線蟲(chóng)種間的變化差異明顯，通常為分類(lèi)鑒定的重要指標(biāo)。雌蟲(chóng)的頭冠和頭區(qū)特征、中食道球形態(tài)測(cè)量數(shù)值、排泄孔的位置等由于受外界條件影響大，變異性大，在鑒定中具有一定的價(jià)值。雌蟲(chóng)尾部的肛門(mén)、陰門(mén)及其周?chē)臅?huì)陰花紋一般不受外界因素所影響，形態(tài)結(jié)構(gòu)很穩(wěn)定，尤其在種間，會(huì)陰花紋的特征是固定的，不會(huì)出現(xiàn)其它種類(lèi)的特征變化。識(shí)別會(huì)陰花紋主要從其形狀、測(cè)線、刻點(diǎn)、側(cè)翼，陰門(mén)位置、肛門(mén)位置，陰門(mén)與肛門(mén)的距離等方面分析鑒定。根結(jié)線蟲(chóng)會(huì)陰花紋結(jié)構(gòu)特征和測(cè)量數(shù)值是其形態(tài)學(xué)分類(lèi)鑒定中最重要的指標(biāo)[5]。二齡幼蟲(chóng)蟲(chóng)體變化很大，側(cè)區(qū)和半月體結(jié)構(gòu)等特征在種的分類(lèi)中幾乎沒(méi)有作用。頭部的形狀有圓形和方形的區(qū)別，在頭區(qū)有無(wú)環(huán)紋也是鑒定種類(lèi)的依據(jù)之一。二齡幼蟲(chóng)口針的特點(diǎn)、長(zhǎng)度和尾部的測(cè)量數(shù)值，包括透明尾部的特征和測(cè)量值都是重要的鑒定依據(jù)。雄蟲(chóng)頭冠的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和DGO值具有較大的鑒定價(jià)值，其它形態(tài)結(jié)構(gòu)變異性大，鑒定價(jià)值有限[6]。

2.2 鑒別寄主實(shí)驗(yàn)鑒定

該方法以形態(tài)學(xué)測(cè)量結(jié)果為基礎(chǔ)，對(duì)南方、花生、爪哇和北方根結(jié)線蟲(chóng)準(zhǔn)確區(qū)別的方法，不能應(yīng)用于混合侵染的線蟲(chóng)病原鑒定。通過(guò)6種國(guó)際通用鑒別寄主接種實(shí)驗(yàn)，將4種常見(jiàn)根結(jié)線蟲(chóng)區(qū)分開(kāi)，鑒定到種和生理小種。由于此種鑒定方法條件嚴(yán)格、操作時(shí)間長(zhǎng)，只能鑒定常見(jiàn)的4種根結(jié)線蟲(chóng)，并且還必須與形態(tài)學(xué)特征鑒定相結(jié)合。另外，根結(jié)線蟲(chóng)種間、種內(nèi)變異差別大的實(shí)際情況，經(jīng)過(guò)后期實(shí)踐應(yīng)用，局限性很大，鑒定價(jià)值低，被其它鑒定方法代替。

2.3 生物化學(xué)方法鑒定

根結(jié)線蟲(chóng)早期的生物化學(xué)鑒定方法根據(jù)線蟲(chóng)體內(nèi)不同蛋白質(zhì)在聚丙烯胺凝膠板上移動(dòng)的距離不同，區(qū)分不同的根結(jié)線蟲(chóng)種類(lèi)。一般把線蟲(chóng)放到緩沖液中充分研磨，提取物放到電泳儀中，以溴苯酚藍(lán)作為對(duì)照，觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果，確定根結(jié)線蟲(chóng)的種類(lèi)。雙向電泳實(shí)驗(yàn)研究線蟲(chóng)體內(nèi)可溶性蛋白質(zhì)的總體差異，確定北方根結(jié)線蟲(chóng)和偽根結(jié)線蟲(chóng)屬于不同的生物群體[7]。該方法主要有同工酶技術(shù)、細(xì)胞遺傳鑒定等，同工酶鑒定技術(shù)利用酯酶、蘋(píng)果酸脫氫酶等的同工酶譜，區(qū)分根結(jié)線蟲(chóng)種類(lèi)，其表型穩(wěn)定，不受環(huán)境條件、寄主植物的影響，并且4種常見(jiàn)根結(jié)線蟲(chóng)的酯酶表型區(qū)別很大，易于區(qū)分[8]。Dickson研究團(tuán)隊(duì)在1971年成功將同工酶技術(shù)應(yīng)用到根結(jié)線蟲(chóng)的分類(lèi)鑒定，而且根據(jù)酯酶表型繪制遺傳進(jìn)化樹(shù)狀圖[9]。Hussey發(fā)現(xiàn)蘋(píng)果酸脫氫酶可以區(qū)分南方和花生兩種根結(jié)線蟲(chóng)種類(lèi)[10]。Esbenshade團(tuán)隊(duì)系統(tǒng)研究酯酶譜在根結(jié)線蟲(chóng)分類(lèi)鑒定中的作用，指出“酯酶是根結(jié)線蟲(chóng)分類(lèi)中最具有鑒定價(jià)值的同工酶”，并且以酯酶譜為基礎(chǔ)，構(gòu)建根結(jié)線蟲(chóng)系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)[11]。Almeida利用同工酶技術(shù)鑒定出80多個(gè)根結(jié)線蟲(chóng)，促進(jìn)了根結(jié)線蟲(chóng)分類(lèi)學(xué)的發(fā)展[12]。同一時(shí)期，我國(guó)線蟲(chóng)科學(xué)家同樣利用同工酶技術(shù)鑒定根結(jié)線蟲(chóng)種類(lèi)，中國(guó)林業(yè)科學(xué)院的楊寶君利用同工酶技術(shù)鑒定全國(guó)采集的15種根結(jié)線蟲(chóng)，并且確定在廣東、海南島發(fā)現(xiàn)新的種類(lèi)象耳豆根結(jié)線蟲(chóng)[13]。云南農(nóng)業(yè)大學(xué)的喻盛甫、陳永芳等利用同工酶技術(shù)快速鑒定危害煙草和一串紅的各種根結(jié)線蟲(chóng)，確定爪哇根結(jié)線蟲(chóng)是云南省煙草和花卉根結(jié)線蟲(chóng)病害的主要危害種群[14]。細(xì)胞遺傳鑒定技術(shù)是從細(xì)胞遺傳特征入手，通過(guò)顯微鏡觀察，研究根結(jié)線蟲(chóng)不同種群個(gè)體細(xì)胞內(nèi)遺傳物質(zhì)染色體的不同，區(qū)分根結(jié)線蟲(chóng)種類(lèi)的方法。通過(guò)細(xì)胞固定、染色、觀察，分析染色體數(shù)目，描述其形態(tài)，提供分類(lèi)的依據(jù)，從而鑒定不同的根結(jié)線蟲(chóng)種類(lèi)。由于根結(jié)線蟲(chóng)的生殖方式復(fù)雜，變異性大，相同種類(lèi)根結(jié)線蟲(chóng)也同時(shí)具有多種生殖方式，有些時(shí)候，在不同生殖時(shí)間或環(huán)境下，相同個(gè)體的生殖方式都有不同的情況。另外，細(xì)胞遺傳學(xué)方法操作困難，技術(shù)要求高，所以此種鑒定方法在根結(jié)線蟲(chóng)分類(lèi)中應(yīng)用范圍較小。

2.4 分子生物學(xué)鑒定

根結(jié)線蟲(chóng)傳統(tǒng)的鑒定方法不能完整地反映生物體遺傳的本質(zhì)信息，存在其自身的局限性，即便是經(jīng)典的形態(tài)學(xué)特征和測(cè)量值相結(jié)合的鑒定技術(shù)，也存在一定缺陷，寄主和生活環(huán)境的變化對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)的形態(tài)特征會(huì)產(chǎn)生差異性影響，使線蟲(chóng)性狀表現(xiàn)不穩(wěn)定，鑒定出現(xiàn)偏差；有些根結(jié)線蟲(chóng)種間形態(tài)學(xué)測(cè)量值有重疊現(xiàn)象，干擾鑒定過(guò)程和結(jié)果。近幾年，隨著分子生物學(xué)技術(shù)在線蟲(chóng)分類(lèi)學(xué)科中的應(yīng)用和發(fā)展，快速、準(zhǔn)確的分子分類(lèi)技術(shù)成為根結(jié)線蟲(chóng)種類(lèi)鑒定的常規(guī)手段，由于分子生物學(xué)鑒定技術(shù)不受寄主、線蟲(chóng)蟲(chóng)態(tài)和環(huán)境條件的影響，能直接穩(wěn)定地反映根結(jié)線蟲(chóng)的遺傳信息，越來(lái)越多的線蟲(chóng)分類(lèi)學(xué)家開(kāi)始重視分子生物學(xué)鑒定技術(shù)。

現(xiàn)代根結(jié)線蟲(chóng)鑒定主要基于線蟲(chóng)基因組(DNA)差異和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)。通常采用以線蟲(chóng)DNA為基礎(chǔ)的鑒定方法，DNA可以從很少的樣本甚至是一條線蟲(chóng)個(gè)體中提取，并且根結(jié)線蟲(chóng)的DNA不會(huì)隨著外界環(huán)境條件、食物資源或其它因素的影響而發(fā)生變化，并且分子生物學(xué)的快速發(fā)展，技術(shù)的變革創(chuàng)新，從遺傳物質(zhì)本身研究根結(jié)線蟲(chóng)的分類(lèi)成為可能。DNA鑒定技術(shù)具有快速、可靠、準(zhǔn)確的優(yōu)勢(shì)，迅速成為根結(jié)線蟲(chóng)鑒定的主要手段和方法。目前用于根結(jié)線蟲(chóng)分類(lèi)的靶標(biāo)基因主要是線粒體基因(mtDNA)和核糖體基因(rDNA)。根結(jié)線蟲(chóng)mtDNA是雙鏈、環(huán)狀分子，堿基數(shù)比核基因組少，并且更新速率快，其中細(xì)胞色素氧化酶的基因(COI—COⅢ)可以被用于根結(jié)線蟲(chóng)分類(lèi)學(xué)、進(jìn)化學(xué)研究。Power and Harris通過(guò)細(xì)胞色素氧化酶基因COⅡ區(qū)分4種常見(jiàn)根結(jié)線蟲(chóng)和奇氏根結(jié)線蟲(chóng)[15]，劉樂(lè)樂(lè)基于線粒體Nad5基因序列建立了3種常見(jiàn)根結(jié)線蟲(chóng)檢測(cè)技術(shù)[16]，廖金玲應(yīng)用mtDNA鑒定出番禺根結(jié)線蟲(chóng)，Blok通過(guò)mtDNA的COⅡ基因確定出象耳豆根結(jié)線蟲(chóng)[17]。核糖體rDNA以基因簇為單位通過(guò)重復(fù)連接方式排列，形成6個(gè)結(jié)構(gòu)部分，依次是外轉(zhuǎn)錄間隔ETS區(qū)、18S基因區(qū)、內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔ITS1區(qū)、5.8S基因區(qū)、內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔ITS2區(qū)、基因間隔IGS區(qū)。核糖體中的ITS區(qū)是真核生物鑒定常用的靶標(biāo)基因，由于ITS區(qū)基因進(jìn)化速率快，在不同種間變異性大，對(duì)ITS區(qū)特異性擴(kuò)展，比對(duì)序列，分析種間差異，常用在根結(jié)線蟲(chóng)種的鑒定和分類(lèi)[18]。Zijlstra利用ITS區(qū)基因鑒定出形態(tài)學(xué)上十分相似的北方根結(jié)線蟲(chóng)、奇氏根結(jié)線蟲(chóng)和偽根結(jié)線蟲(chóng)。5.8S區(qū)、18S區(qū)、28S區(qū)和IGS區(qū)基因比ITS區(qū)基因序列保守，更加適合于根結(jié)線蟲(chóng)親緣關(guān)系分析和生物進(jìn)化程度的研究。Niu基于5S區(qū)和IGS區(qū)序列差異，設(shè)計(jì)象耳豆根結(jié)線蟲(chóng)的檢測(cè)方法[19]，林宇研究28S(D2/D3)區(qū)、18S區(qū)和ITS區(qū)序列分別作為根結(jié)線蟲(chóng)分類(lèi)鑒定條形碼標(biāo)記序列，結(jié)果表明28S(D2/D3)區(qū)序列具有一定的物種識(shí)別率和遺傳距離間隔，可以作為根結(jié)線蟲(chóng)鑒定條形碼的基本標(biāo)記序列[20]。

根結(jié)線蟲(chóng)各類(lèi)分子鑒定技術(shù)都是從聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)的理論基礎(chǔ)上衍生出來(lái)的，主要方法有：限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性技術(shù)(RFLP)、實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)(QPCR)、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(LAMP)、DNA條形碼分析技術(shù)(DNA barcoding)、隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA技術(shù)(RAPD)等。RFLP技術(shù)(restriction fragment length polymorphism)是用限制性酶特異性內(nèi)切DNA序列，不同種類(lèi)根結(jié)線蟲(chóng)的DNA堿基組成和序列必定存在差異，其被限制性酶切后的片段數(shù)量和堿基長(zhǎng)度不同，從而鑒定生物種類(lèi)。Power利用RFLP技術(shù)區(qū)分常見(jiàn)根結(jié)線蟲(chóng)，并且鑒定出奇氏根結(jié)線蟲(chóng)(M.chitwoodi)[21]。在某些線蟲(chóng)分類(lèi)鑒定中，通過(guò)先擴(kuò)增ITS區(qū)域，獲得各種根結(jié)線蟲(chóng)的ITS-RFLP譜圖，例如應(yīng)用于短體線蟲(chóng)種類(lèi)鑒定。根結(jié)線蟲(chóng)的ITS區(qū)基因差異大，此方法不能準(zhǔn)確揭示根結(jié)線蟲(chóng)系統(tǒng)發(fā)育的關(guān)系。QPCR技術(shù)(real-time Quantitative PCR)是將熒光基團(tuán)與PCR反應(yīng)、根結(jié)線蟲(chóng)DNA擴(kuò)增產(chǎn)物關(guān)聯(lián)，從物質(zhì)量的層面研究PCR反應(yīng)過(guò)程。此方法檢測(cè)時(shí)間短、結(jié)果準(zhǔn)確，但是操作困難，技術(shù)要求較高。LAMP技術(shù)(loop mediated isothermal amplification)是在恒溫條件(60 ℃)下的DNA擴(kuò)增。兩對(duì)內(nèi)外引物在目標(biāo)序列不同的位點(diǎn)同時(shí)擴(kuò)增，增強(qiáng)其特異性。并且此種DNA擴(kuò)增技術(shù)的檢測(cè)不需要電泳檢測(cè)和PCR儀器等，通過(guò)添加染料的方式直接觀察，但是引物設(shè)計(jì)困難、要求高，只能擴(kuò)增500 BP左右的短DNA序列。目前，此方法在根結(jié)線蟲(chóng)的鑒定中應(yīng)用并不廣泛，有待發(fā)展。DNA barcoding 是選取DNA標(biāo)記物，通過(guò)PCR擴(kuò)增、比對(duì)，區(qū)分不同的根結(jié)線蟲(chóng)種類(lèi)。標(biāo)準(zhǔn)DNA的選擇和應(yīng)用要求片段短小，方便擴(kuò)增，兩端有保守性強(qiáng)的特異序列段，具有顯著的種間差異。mtDNA中的mtCOI基因常用作DNA條形碼。目前線蟲(chóng)DNA條形碼mtCOI基因只局限于海洋自由線蟲(chóng)的鑒定分類(lèi)。植物線蟲(chóng)的DNA條形碼鑒定技術(shù)需要進(jìn)一步研究。RAPD技術(shù)(random amplified polymorphic DNA)操作簡(jiǎn)單快捷、結(jié)果靈敏度高、多態(tài)性明顯、樣本DNA需要量少，因此RAPD廣泛應(yīng)用于物種種群確定、遺傳圖譜繪制、親緣關(guān)系分析、線蟲(chóng)種類(lèi)鑒定和系統(tǒng)進(jìn)化發(fā)育研究。蔣寒利用RAPD-PCR技術(shù)分析4種常見(jiàn)根結(jié)線蟲(chóng)的親緣關(guān)系[22]，吳篆芳設(shè)計(jì)、優(yōu)化RAPD-PCR體系用于南方根結(jié)線蟲(chóng)不同居群間的遺傳多樣性和親緣關(guān)系分析[23]，白萬(wàn)明運(yùn)用RAPD-PCR技術(shù)鑒定南方根結(jié)線蟲(chóng)等常見(jiàn)線蟲(chóng)的種類(lèi)[24]。

3 討論

雖然現(xiàn)代分子生物學(xué)鑒定技術(shù)具有諸多優(yōu)點(diǎn)，但是其并不能完全代替?zhèn)鹘y(tǒng)的形態(tài)學(xué)鑒定方法，在根結(jié)線蟲(chóng)鑒定的時(shí)候，形態(tài)學(xué)特征和相關(guān)測(cè)量數(shù)據(jù)仍然是分類(lèi)的基礎(chǔ)，簡(jiǎn)單依據(jù)基因序列作出主觀判斷是不正確的鑒定方式。充分發(fā)揮形態(tài)學(xué)鑒定和分子生物學(xué)鑒定各自的優(yōu)勢(shì)，將兩者相互結(jié)合、相互參考、取長(zhǎng)補(bǔ)短，才能得出更準(zhǔn)確的鑒定結(jié)果。

4 結(jié)語(yǔ)

根結(jié)線蟲(chóng)種類(lèi)繁多、危害嚴(yán)重，給植物保護(hù)工作帶來(lái)實(shí)踐性難題。對(duì)其科學(xué)地分類(lèi)鑒定是防治該病原生物的關(guān)鍵，是綜合防治根結(jié)線蟲(chóng)病的基礎(chǔ)。根結(jié)線蟲(chóng)的分類(lèi)主要采用形態(tài)學(xué)特征和分子生物學(xué)特征進(jìn)行鑒定，分子生物學(xué)特征鑒定方法的引入，降低了分類(lèi)工作的勞動(dòng)強(qiáng)度，提高了鑒定的準(zhǔn)確度，是一種優(yōu)質(zhì)的鑒定方式。