李曉麗/河北省承德市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 067000

近年來(lái)，隨著養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展，動(dòng)物疫病呈現(xiàn)出新的特點(diǎn)，動(dòng)物疫病種類(lèi)多發(fā)，多種動(dòng)物疫病混合感染的情況愈發(fā)嚴(yán)重，隱性感染、非典型癥狀和混合感染無(wú)處不在，大大增加了動(dòng)物的發(fā)病率和死亡率，給動(dòng)物疫病的防控和凈化工作帶來(lái)了巨大的挑戰(zhàn)。僅靠傳統(tǒng)的流行病學(xué)調(diào)查、臨床癥狀和病理剖檢變化往往難以準(zhǔn)確診斷動(dòng)物疫病，如不能及時(shí)確診疫病、準(zhǔn)確制定防控措施，可能會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物大量發(fā)病甚至死亡，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。因此，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的重要性也更加突顯，獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果是獸醫(yī)行政和執(zhí)法的重要技術(shù)支撐，是動(dòng)物疫病防控的重要組成部分，在確診疫病、檢測(cè)監(jiān)測(cè)、流行病學(xué)調(diào)查、疫苗免疫效果評(píng)估和檢測(cè)母源抗體水平及動(dòng)物疫病凈化等方面具有重要意義。

1 獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展的主要檢測(cè)

根據(jù)《各級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室建設(shè)標(biāo)準(zhǔn)》及獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展的實(shí)驗(yàn)活動(dòng)范圍規(guī)定，BSL-2 獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室主要進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)和病原學(xué)檢測(cè)。

1.1 血清學(xué)檢測(cè)血清學(xué)檢測(cè)的基本原理是利用抗原與相應(yīng)抗體在體外特異性結(jié)合的特性，對(duì)樣品中的抗原或抗體進(jìn)行定性或定量的檢測(cè)。在機(jī)體免疫應(yīng)答過(guò)程中，主要分為細(xì)胞免疫和體液免疫，獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室血清學(xué)檢測(cè)中，以體液免疫反應(yīng)中的特異性抗體的檢測(cè)應(yīng)用最為廣泛。常用的方法除傳統(tǒng)的沉淀反應(yīng)、凝集試驗(yàn)和補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)外，標(biāo)記免疫測(cè)定，如酶聯(lián)免疫測(cè)定、熒光免疫測(cè)定等方法已成為主要的免疫測(cè)定技術(shù)。近年來(lái)，一些快速測(cè)定法如膠體金方法已被基層廣泛應(yīng)用。目前，BSL-2 獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室血清學(xué)檢測(cè)方法最常用的是ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）方法，該方法具有操作簡(jiǎn)單、時(shí)間短、特異性強(qiáng)、敏感性高和機(jī)器判讀結(jié)果、減少人為誤差等優(yōu)點(diǎn)。主要用于評(píng)估疫苗免疫效果和作為對(duì)未免疫動(dòng)物感染的判定依據(jù)。

ELISA 既可以用于測(cè)定抗體，也可以用于測(cè)定抗原，用于獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)用的ELISA 主要分三種類(lèi)型：雙抗體夾心ELISA、間接ELISA 和競(jìng)爭(zhēng)ELISA。

1.2 病原學(xué)檢測(cè)病原學(xué)檢測(cè)一是采用分離培養(yǎng)、鑒定或直接染色鏡檢等方法直接檢測(cè)病原微生物如細(xì)菌、寄生蟲(chóng)等，這種方法操作復(fù)雜，危險(xiǎn)性較高，在BSL-2 獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室做的相對(duì)較少。二是采用 PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）方法，檢測(cè)樣品中病原微生物的核酸，從而間接反應(yīng)病原微生物是否存在，這種檢測(cè)病原微生物核酸的方法更加便利、快捷，能夠在較短的時(shí)間得到檢測(cè)結(jié)果，應(yīng)用更為廣泛。

PCR 技術(shù)的基本原理類(lèi)似于DNA 的天然復(fù)制過(guò)程，由變性-退火-延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成，具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、對(duì)標(biāo)本純度要求低、簡(jiǎn)便、快捷等優(yōu)點(diǎn)，越來(lái)越多的應(yīng)用于動(dòng)物疫病的診斷。目前實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用最多的是PCR 和熒光PCR 技術(shù)，PCR 技術(shù)可以檢測(cè)病毒、細(xì)菌和寄生蟲(chóng)等各種病原微生物，對(duì)樣品中的核酸進(jìn)行定量和定性分析，可用于突發(fā)動(dòng)物疫情的處置和確診動(dòng)物疫病和流行病學(xué)調(diào)查等工作。

2 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)數(shù)據(jù)對(duì)疫病防控的重要應(yīng)用

實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)數(shù)據(jù)主要為動(dòng)物疫病防控提供技術(shù)支撐，主要應(yīng)用于以下方面：

2.1 確診疫病、處置突發(fā)疫情生產(chǎn)實(shí)踐中，由于亞臨床感染、陰性感染、非典型癥狀和混合感染等情況的存在，許多動(dòng)物疫病已不能僅靠臨床癥狀和病理變化來(lái)進(jìn)行準(zhǔn)確診斷，尤其是非洲豬瘟、高致病性禽流感等重大動(dòng)物疫病的診斷更需要實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)來(lái)確診。以《非洲豬瘟疫情應(yīng)急處置指南（第四版）》為例，疑似疫情和確診疫情均需進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，因?yàn)橹挥幸咔榇_診后，才能按照程序采取劃定疫點(diǎn)、疫區(qū)和受威脅區(qū)、封鎖、撲殺、無(wú)害化處理等一系列后續(xù)措施。

同樣，在處置突發(fā)疫情時(shí)也需要進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，只有根據(jù)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果，才能準(zhǔn)確判斷疫情等級(jí)，采取科學(xué)的防控措施，在撤銷(xiāo)封鎖、終末消毒等任何環(huán)節(jié)都需要實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)數(shù)據(jù)作為支撐。

2.2 檢測(cè)、監(jiān)測(cè)和流行病學(xué)調(diào)查通過(guò)開(kāi)展檢測(cè)、監(jiān)測(cè)和流行病學(xué)調(diào)查，能夠掌握一定區(qū)域的主要?jiǎng)游镆卟“l(fā)生、流行趨勢(shì)，及時(shí)把握疫情動(dòng)態(tài)，準(zhǔn)確評(píng)估動(dòng)物疫情，對(duì)疫情進(jìn)行準(zhǔn)確預(yù)警，制訂科學(xué)的防控措施，提升整體防控水平。

2.3 評(píng)估疫苗免疫效果和檢測(cè)母源抗體動(dòng)物免疫尤其是使用活疫苗免疫時(shí)，免疫效果與其體內(nèi)的母源抗體水平有很大關(guān)系，母源抗體水平高，會(huì)干擾疫苗的免疫作用，只有當(dāng)母源抗體下降到一定水平后，使用疫苗才能充分的發(fā)揮其免疫作用，因此要制定科學(xué)合理的免疫程序，就必須進(jìn)行大量的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，以確定母源抗體水平，從而為制定科學(xué)的免疫程序提供參考。

同樣，動(dòng)物接種疫苗后產(chǎn)生的抗體水平與相關(guān)疫病的防控效果具有相關(guān)性。正常情況下，動(dòng)物機(jī)體免疫抗體水平越高，動(dòng)物群體免疫抗體合格率越高，對(duì)相應(yīng)疫病的防控效果就越好。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能夠?qū)?dòng)物免疫抗體水平進(jìn)行監(jiān)測(cè)，進(jìn)而評(píng)估動(dòng)物群體的免疫效果，可以此為依據(jù)評(píng)判疫苗質(zhì)量、接種劑量、疫苗保存與運(yùn)輸方式、免疫途徑及免疫程序的合理性。

2.4 動(dòng)物疫病凈化新修訂的《中華人民共和國(guó)動(dòng)物防疫法》中，動(dòng)物防疫的方針由原來(lái)的“預(yù)防為主”調(diào)整為“預(yù)防為主，預(yù)防與控制、凈化、消滅相結(jié)合”，將動(dòng)物疫病凈化提升到了一個(gè)新的高度。動(dòng)物疫病凈化，是指在特定區(qū)域或場(chǎng)所對(duì)某種或某些重點(diǎn)動(dòng)物疫病實(shí)施有計(jì)劃的消滅過(guò)程，達(dá)到該范圍內(nèi)個(gè)體不發(fā)病和無(wú)感染狀態(tài)。動(dòng)物疫病凈化主要采用“監(jiān)測(cè)、檢疫、撲殺、消毒、無(wú)害化處理”等一系列的綜合性防控措施，構(gòu)建“規(guī)范化、制度化、設(shè)施化、和無(wú)害化”的防疫和生產(chǎn)體系，最主要的就是通過(guò)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)定期對(duì)感染特定病原微生物的動(dòng)物個(gè)體進(jìn)行準(zhǔn)確識(shí)別，采取相應(yīng)措施，以達(dá)到清除特定病原微生物、凈化疫病目的。

3 影響實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的因素

實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理的方針是科學(xué)、及時(shí)、準(zhǔn)確，準(zhǔn)確即要求“檢測(cè)報(bào)告以準(zhǔn)確無(wú)誤為標(biāo)準(zhǔn)，確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性”，影響實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性的因素主要有以下幾個(gè)方面：

3.1 人員現(xiàn)階段，我國(guó)大部分實(shí)驗(yàn)室特別是基層獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室還未達(dá)到試驗(yàn)全過(guò)程機(jī)器化，主要還是采用人工檢測(cè)的方式，人員的素質(zhì)和水平很大程度上決定了實(shí)驗(yàn)室水平的高低優(yōu)劣。專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員的文化水平、專(zhuān)業(yè)技術(shù)能力、工作熟練程度、對(duì)待工作的態(tài)度以及解決問(wèn)題的能力等，都是影響檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性的重要因素。

3.2 儀器設(shè)備儀器設(shè)備的靈敏度和穩(wěn)定性直接影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，特別是精密儀器，需要定期檢定校準(zhǔn)和維護(hù)，否則會(huì)降低儀器設(shè)備的準(zhǔn)確度和精密度，縮短其使用年限。

3.3 樣品待檢樣品采集的是否規(guī)范及其質(zhì)量對(duì)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性影響也是非常大的，不同種類(lèi)的待檢樣品和不同檢測(cè)項(xiàng)目的樣品的采集和制備是不同的，應(yīng)按具體要求制樣。如進(jìn)行血清學(xué)抗體檢測(cè)，如果待檢血清發(fā)生腐敗、溶血，那么很可能導(dǎo)致樣品抗體檢測(cè)不合格，如果用于檢測(cè)病原的棉拭子樣品不放保存液，就不能真正反映疫病的實(shí)際感染狀況。

3.4 檢測(cè)方法和檢測(cè)試劑根據(jù)檢測(cè)目的，選擇合適的檢測(cè)方法和敏感性、精確性相適應(yīng)的檢測(cè)試劑，能夠保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。檢測(cè)方法應(yīng)優(yōu)先選擇國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法作為檢測(cè)依據(jù)，檢測(cè)試劑應(yīng)優(yōu)先選擇有獸醫(yī)批準(zhǔn)文號(hào)的試劑，同時(shí)，根據(jù)平時(shí)工作經(jīng)驗(yàn)，選擇穩(wěn)定性、敏感性和精確度均較高的試劑。

3.5 檢測(cè)環(huán)境在做血清學(xué)檢測(cè)中，抗原抗體反應(yīng)是一個(gè)復(fù)雜的生物學(xué)反應(yīng)過(guò)程，受很多因素的影響，溫度、濕度是重要的影響因素，特別是溫度的高低會(huì)影響抗原抗體反應(yīng)的結(jié)合和解離，直接影響結(jié)果的正確性，因此獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)按規(guī)定安裝空調(diào)裝置，保障檢測(cè)環(huán)境符合檢測(cè)方法的要求。

檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性是評(píng)價(jià)和提高獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室管理水平的重要手段，應(yīng)加強(qiáng)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室管理，制定標(biāo)準(zhǔn)化的管理體系文件，確保有效運(yùn)行，確保檢測(cè)結(jié)果更加科學(xué)、準(zhǔn)確，使實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)數(shù)據(jù)在動(dòng)物疫病防控工作中發(fā)揮更加重要的作用。

4 結(jié)語(yǔ)

加強(qiáng)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室管理，保證檢測(cè)結(jié)果的科學(xué)準(zhǔn)確，才能夠更好的將檢測(cè)結(jié)果服務(wù)于動(dòng)物疫病防控工作。