韋治艷 楊熙彬 桂子萌 楊宇 楊洪 戴仁懷
摘要:為明確貴州省辣椒上棉蚜的發(fā)生規(guī)律和抗藥性現(xiàn)狀,本研究于2019年和2020年進(jìn)行了系統(tǒng)調(diào)查和田間普查,并采用葉片浸漬法測(cè)定了4個(gè)棉蚜田間種群對(duì)4種殺蟲劑的抗性。結(jié)果表明,系統(tǒng)調(diào)查發(fā)現(xiàn)棉蚜每年均有2個(gè)發(fā)生高峰,2019年6月下旬至7月初是第一個(gè)高峰期,8月上旬是第二個(gè)小高峰期;2020年6月下旬至7月初是第一個(gè)高峰期,7月中旬是第二個(gè)小高峰期。兩年的調(diào)查發(fā)現(xiàn)棉蚜為害的第一個(gè)高峰期發(fā)生在辣椒的開花坐果期,在結(jié)果期達(dá)到第二個(gè)小高峰。不同棉蚜種群抗性監(jiān)測(cè)結(jié)果表明,黔西南安龍縣種群對(duì)吡蟲啉敏感(1.28倍),對(duì)啶蟲脒、阿維菌素和吡蚜酮的敏感性逐漸降低;黔東南榕江縣種群對(duì)啶蟲脒和吡蚜酮敏感(分別為2.61倍和1.12倍),對(duì)阿維菌素和吡蟲啉產(chǎn)生了抗性;黔東南錦屏縣種群對(duì)吡蚜酮的抗性最高(11.19倍),其次是吡蟲啉(7.91倍)、阿維菌素(2.86倍)和啶蟲脒(2.38倍);遵義市播州區(qū)種群對(duì)啶蟲脒、吡蚜酮、阿維菌素和吡蟲啉的抗性倍數(shù)分別為1.63倍、5.74倍、18.44倍和70.22倍。除個(gè)別種群對(duì)阿維菌素和吡蚜酮比較敏感外,其余均產(chǎn)生了低至中等水平抗性;安龍縣種群對(duì)吡蟲啉較敏感,錦屏縣種群產(chǎn)生了低水平抗性,但榕江和遵義種群產(chǎn)生了高水平抗性;除安龍種群對(duì)啶蟲脒產(chǎn)生了低水平抗性外,其余種群對(duì)啶蟲脒較敏感。建議在棉蚜種群大暴發(fā)之前使用抗性倍數(shù)低的殺蟲劑進(jìn)行防治,以延緩抗藥性的進(jìn)一步發(fā)展。
關(guān)鍵詞:棉蚜;發(fā)生規(guī)律;殺蟲劑;抗藥性
中圖分類號(hào):S43
文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A
文章編號(hào):1008-0457(2022)02-0026-006
國(guó)際DOI編碼:10.15958/j.cnki.sdnyswxb.2022.02.004
棉蚜Aphis gossypii Glover屬半翅目Hemiptera蚜科Aphididae,廣泛分布于溫帶、亞熱帶及熱帶地區(qū),可為害茄科(Solanaceae)、菊科(Compositae)、豆科(Leguminosae)和十字花科(Cruciferae)等116科,900多種[1-4]。該蟲具有繁殖能力強(qiáng)、世代周期短且世代重疊嚴(yán)重等特點(diǎn),是典型的R對(duì)策昆蟲。棉蚜主要通過(guò)刺吸植株汁液、分泌蜜露阻礙植株光合作用、傳播病毒等方式對(duì)作物造成為害[5-6],由傳毒導(dǎo)致的損失往往比直接刺吸還要大,是危害農(nóng)、林、牧業(yè)等多種植物的世界性重要雜食害蟲[7]。近年來(lái),全球氣候變暖、栽培作物種類及布局多元化、種植面積不斷增加,為蚜蟲的發(fā)生提供了有利條件,且發(fā)生面積呈擴(kuò)大趨勢(shì),給防治帶來(lái)了很大困難
化學(xué)防治是防治害蟲的主要手段,但隨著化學(xué)藥劑的大量不合理使用,害蟲對(duì)農(nóng)藥產(chǎn)生抗性的趨勢(shì)也變得越來(lái)越明顯??剐缘漠a(chǎn)生是害蟲對(duì)殺蟲劑選擇作用的結(jié)果,害蟲對(duì)殺蟲劑的抗性是生物進(jìn)化的一個(gè)特例[8]。有研究表明棉蚜已對(duì)有機(jī)磷類、擬除蟲菊酯類、氨基甲酸酯類和新煙堿類等多種類殺蟲劑產(chǎn)生了不同程度抗性[9-12]。棉蚜抗藥性的產(chǎn)生不僅加快了殺蟲劑品種的淘汰速度,還給棉蚜的防治帶來(lái)阻礙。辣椒是貴州省重要茄科蔬菜種類,隨著栽培面積不斷擴(kuò)大,棉蚜為害日趨嚴(yán)重,嚴(yán)重影響了辣椒產(chǎn)量和品質(zhì)。因此了解田間辣椒上棉蚜種群發(fā)生特點(diǎn)及開展抗藥性監(jiān)測(cè),對(duì)棉蚜發(fā)生預(yù)測(cè)預(yù)報(bào)和延緩抗性的進(jìn)一步發(fā)展具有重要意義。
1材料與方法
1.1棉蚜發(fā)生規(guī)律系統(tǒng)調(diào)查
在花溪區(qū)金竹鎮(zhèn)辣椒試驗(yàn)地(約0.134 hm2)內(nèi)設(shè)置監(jiān)測(cè)點(diǎn),辣椒栽培技術(shù)參照當(dāng)?shù)貥?biāo)準(zhǔn),全程不施用任何藥劑。辣椒移栽時(shí)間分別為2019年5月13日和2020年6月1日,移栽2周后采用棋盤式取樣法對(duì)棉蚜發(fā)生動(dòng)態(tài)進(jìn)行系統(tǒng)調(diào)查,每壟選取3個(gè)點(diǎn),每點(diǎn)調(diào)查10~15株,記錄每株棉蚜的發(fā)生數(shù)量。每周調(diào)查一次(雨天順延),直至采收結(jié)束。
1.2棉蚜發(fā)生情況田間普查
在貴州省遵義、安順、黔西南、黔南、黔東南各選1~2個(gè)調(diào)查點(diǎn),開展棉蚜發(fā)生情況普查。以株為單位,每個(gè)調(diào)查地點(diǎn)隨機(jī)選擇三塊辣椒地,每塊辣椒地隨機(jī)調(diào)查100株,共計(jì)300株,調(diào)查記錄每株辣椒上棉蚜的發(fā)生量。
1.3棉蚜抗藥性監(jiān)測(cè)
1.3.1供試蟲源
棉蚜相對(duì)敏感種群(SS):于2019年5月采自貴州省金竹鎮(zhèn)試驗(yàn)基地的辣椒植株上,在室內(nèi)不接觸任何藥劑的情況下,用盆栽辣椒植株連續(xù)飼養(yǎng)多代,獲得蚜蟲相對(duì)敏感品系。飼養(yǎng)條件為:溫度(25±1)℃、相對(duì)濕度75%±5%、光周期14 L∶10 D。
田間棉蚜種群:2020年7-8月,分別于貴州省榕江縣車江大壩(RJ)、錦屏縣新化鄉(xiāng)(JP)、遵義市播州區(qū)(ZY)和安龍縣板磨村(AL)辣椒地采集田間棉蚜種群,將植株隨蚜蟲一起帶回實(shí)驗(yàn)室,在室內(nèi)不接觸任何藥劑的情況下飼養(yǎng)一代后取大小一致的健壯無(wú)翅成蚜進(jìn)行生物測(cè)定。飼養(yǎng)條件同上。
1.3.2供試藥劑
25%吡蟲啉可濕性粉劑(WP)和20%啶蟲脒可濕性粉劑(WP)均購(gòu)自河北凱斯特農(nóng)化有限公司;25%吡蚜酮懸浮劑(SC)和5%阿維菌素乳油(EC)均購(gòu)自河北中保綠農(nóng)作物科技有限公司。
1.3.3供試植物
辣椒品種為貴研13號(hào)(貴州粒豐種業(yè)有限公司),以滅菌營(yíng)養(yǎng)土種植,期間未接觸任何藥劑和蟲傷。選擇新鮮、潔凈、健康且大小一致的辣椒葉片備用。
1.3.4抗藥性測(cè)定
采用葉片浸漬法測(cè)定4種藥劑對(duì)不同棉蚜種群的毒力[13]。使用去離子水將藥劑稀釋(或溶解)為較高濃度母液,根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果,再將母液等比稀釋為5個(gè)濃度,將新鮮辣椒葉片分別放入不同濃度藥劑中浸漬10 s后取出,自然條件下晾干,去離子水處理作為對(duì)照。晾干后的葉面朝下置于墊有保濕濾紙的一次性塑料培養(yǎng)皿中(直徑為9 cm),并用細(xì)毛刷挑取個(gè)體大小一致的健康無(wú)翅成蚜置于葉片背部,蓋上外皿并用橡皮筋固定,以防蚜蟲逃逸。每個(gè)處理3個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)20頭蚜蟲。將培養(yǎng)皿放入人工氣候培養(yǎng)箱中,48 h后統(tǒng)計(jì)死亡數(shù),用細(xì)毛刷輕輕觸動(dòng),無(wú)反應(yīng)則視為死亡,飼養(yǎng)條件同上。
1.3.5數(shù)據(jù)分析
采用SPSS 24.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理,利用Probit模型擬合毒力回歸方程,并計(jì)算致死中濃度LC50值及95%置信區(qū)間。
抗性倍數(shù)及抗性水平的計(jì)算:
抗性倍數(shù)(RR)=田間種群的LC50/敏感種群的LC50
抗性水平分級(jí)標(biāo)準(zhǔn):RR<3為敏感;3≤RR<5為敏感性下降;5≤RR<10為低水平抗性;10≤RR<40為中等水平抗性;40≤RR<160為高水平抗性;RR≥160為極高水平抗性[11]。
2結(jié)果與分析
2.1棉蚜發(fā)生規(guī)律
2019年對(duì)辣椒上棉蚜的系統(tǒng)調(diào)查如圖1a所示,于移栽后27天即6月10日開始在辣椒上發(fā)現(xiàn)棉蚜,為2.75頭/株;之后種群數(shù)量開始增加,至7月1日達(dá)到種群數(shù)量的最高峰,為51.36頭/株。隨后種群數(shù)量開始明顯減少,7月中下旬幾乎沒有發(fā)現(xiàn)蚜蟲。但8月4日棉蚜數(shù)量增加至3.87頭/株,為棉蚜種群數(shù)量第二個(gè)小高峰期。此后棉蚜種群數(shù)量開始減少,且一直處于低數(shù)量水平。2020年的系統(tǒng)調(diào)查結(jié)果表明(圖1b),在移栽2周后即6月15日,辣椒上發(fā)現(xiàn)已有棉蚜為害,為4.33頭/株,隨后種群數(shù)量不斷增加,在7月4日時(shí)達(dá)到峰值后減少,此時(shí)棉蚜數(shù)量為121.84頭/株。7月12日時(shí)棉蚜種群數(shù)量減少至3.67頭/株。而在7月19日時(shí),棉蚜達(dá)到第二個(gè)小高峰期,數(shù)量為26.05頭/株,此后種群數(shù)量持續(xù)減少。2019年和2020年調(diào)查發(fā)現(xiàn),棉蚜發(fā)生量均在辣椒開花坐果期時(shí)達(dá)到第一個(gè)高峰期,在結(jié)果期達(dá)到第二個(gè)小高峰。
2.2棉蚜大田發(fā)生調(diào)查
2019年7月通過(guò)對(duì)辣椒上棉蚜發(fā)生情況進(jìn)行普查(圖2)發(fā)現(xiàn),棉蚜在各地方辣椒上都有發(fā)生。結(jié)果表明,錦屏縣架寨村辣椒處于幼苗期,棉蚜種群的發(fā)生量最多,達(dá)到10.85頭/株,其次為遵義市播州區(qū)和安龍縣民族村棉蚜種群,分別為6.92頭/株和1.06頭/株,獨(dú)山縣么碑村棉蚜種群數(shù)量次之,為0.25頭/株,榕江縣車江大壩辣椒處于結(jié)果期,棉蚜種群數(shù)量最少,僅0.04頭/株。2020年7月的普查(圖3)發(fā)現(xiàn),錦屏縣新化鄉(xiāng)和安龍縣板磨村辣椒上的棉蚜種群數(shù)量最多,分別為997.33頭/株和438.92頭/株,此時(shí)辣椒為幼苗期;其次種群數(shù)量由多到少依次為榕江縣車江大壩、安順市土壩村、平壩區(qū)蔬菜基地、興義市興坪村、播州區(qū)楓香鎮(zhèn)和西秀區(qū)蔬菜基地,龍里縣楊家寨辣椒雖然也處于幼苗期,但棉蚜種群數(shù)量最少,僅為0.08頭/株。
2.3田間棉蚜種群抗藥性測(cè)定
不同地區(qū)棉蚜種群對(duì)殺蟲劑的抗性測(cè)定結(jié)果見表1。安龍種群對(duì)吡蟲啉比較敏感,對(duì)啶蟲脒產(chǎn)生了低水平抗性,為6.64倍,對(duì)阿維菌素和吡蚜酮產(chǎn)生了中等水平抗性,抗性倍數(shù)分別為18.61倍和24.00倍;榕江種群對(duì)啶蟲脒和吡蚜酮比較敏感,對(duì)阿維菌素產(chǎn)生了低水平抗性,對(duì)吡蟲啉的抗性最高,為50.00倍;錦屏種群對(duì)吡蚜酮的抗性最高,為11.19倍,其次是吡蟲啉,抗性倍數(shù)為7.91倍,對(duì)啶蟲脒和阿維菌素處于敏感階段;遵義種群對(duì)啶蟲脒、吡蚜酮、阿維菌素和吡蟲啉的敏感性依次降低,抗性倍數(shù)分別為1.63倍、5.74倍、18.44倍和70.22倍。
由表1可知,除JP棉蚜種群對(duì)阿維菌素和RJ棉蚜種群對(duì)吡蚜酮還比較敏感,抗性倍數(shù)都小于3,其余均產(chǎn)生了低至中等水平抗性,抗性倍數(shù)分別達(dá)到8.40~18.61倍和5.74~24.00倍;安龍種群對(duì)吡蟲啉較敏感,錦屏種群產(chǎn)生了低水平抗性(7.91倍),LC50值為9.15 mg/L,但榕江和遵義種群產(chǎn)生了高水平抗性,抗性倍數(shù)分別為50.00倍和70.22倍,LC50值分別為57.85 mg/L和81.25 mg/L;除安龍棉蚜種群對(duì)啶蟲脒產(chǎn)生了低水平抗性(6.64倍)外,其余種群對(duì)啶蟲脒比較敏感。
3結(jié)論與討論
蟲害預(yù)測(cè)預(yù)報(bào)是控制害蟲的基礎(chǔ),對(duì)田間害蟲的發(fā)生情況進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè),可為及時(shí)防治各種有害生物提供重要的參考數(shù)據(jù)[14]。本研究分別于2019年和2020年對(duì)貴州省辣椒上棉蚜的發(fā)生規(guī)律開展了田間定點(diǎn)系統(tǒng)調(diào)查,同時(shí)進(jìn)行了典型產(chǎn)區(qū)的危害普查。結(jié)果發(fā)現(xiàn),貴州省辣椒上棉蚜在6月上旬至8月上旬發(fā)生危害,8月中旬之后幾乎無(wú)棉蚜為害,其中6月下旬至7月上旬為盛發(fā)期。從整體上來(lái)看,2020年棉蚜發(fā)生數(shù)量略高于2019年,這可能是由于全省2020年夏季(6-8月)平均氣溫高于2019年,與Satar等[15]研究棉蚜在適宜的溫度范圍內(nèi),發(fā)育速率隨溫度升高而顯著增加的結(jié)果一致。2019年和2020年辣椒棉蚜種群動(dòng)態(tài)趨勢(shì)基本一致,均為雙峰曲線,與汪鳳娟等[16]研究石河子辣椒上棉蚜發(fā)生規(guī)律的結(jié)果一致,但為害盛期出現(xiàn)時(shí)間和峰值有所差別,可能與作物生育期和不同地區(qū)氣象因素不同有關(guān),當(dāng)氣象因素改變時(shí),高峰期也會(huì)改變。
通過(guò)2019年對(duì)貴州省部分地方辣椒上棉蚜發(fā)生情況普查發(fā)現(xiàn),錦屏縣架寨村辣椒上棉蚜種群數(shù)量最多,榕江縣車江大壩辣椒上棉蚜種群數(shù)量最少,可能與辣椒不同生育期有關(guān)。榕江縣辣椒種植較早,錦屏縣辣椒種植較晚且調(diào)查時(shí)還是幼苗期,蚜蟲喜在植物嫩莖、嫩葉等部位刺吸為害[17],幼苗為蚜蟲的大發(fā)生提供了營(yíng)養(yǎng)基礎(chǔ),故錦屏縣棉蚜種群數(shù)量較多。而2020年普查發(fā)現(xiàn),錦屏縣新化鄉(xiāng)、安龍縣民族村和榕江縣車江大壩辣椒上棉蚜種群數(shù)量明顯多于其他地方,可能與地理位置不同有關(guān)。因?yàn)槿齻€(gè)縣地處貴州省南部,溫濕度更適宜蚜蟲的發(fā)育和繁殖,也有可能與當(dāng)?shù)赜盟幈尘安煌嘘P(guān)[18]。2020年錦屏縣新化鄉(xiāng)大棚辣椒上棉蚜種群數(shù)量最多,可能是由于其栽培于溫室大棚內(nèi),大棚封閉的環(huán)境與其他露天種植的辣椒相比,為害蟲的發(fā)生和繁殖創(chuàng)造了更有利的條件,從而導(dǎo)致棉蚜等害蟲大爆發(fā)[19]。
抗性監(jiān)測(cè)是明確害蟲是否具有抗藥性和抗性水平,以及判斷已實(shí)施的防治措施是否有效的最簡(jiǎn)單、最有效的手段,監(jiān)測(cè)的結(jié)果直接關(guān)系到害蟲綜合治理體系和抗性治理策略的制定[12]??剐灾卫淼闹饕P(guān)鍵點(diǎn)是要早期對(duì)害蟲進(jìn)行監(jiān)測(cè)和評(píng)估抗性水平,并以此結(jié)果來(lái)指導(dǎo)殺蟲劑的使用。
本研究采用葉片浸漬法測(cè)定了貴州省不同地方棉蚜種群對(duì)阿維菌素、吡蚜酮、吡蟲啉和啶蟲脒的敏感性,監(jiān)測(cè)結(jié)果表明,測(cè)試的棉蚜種群已對(duì)供試的4種殺蟲劑產(chǎn)生了不同程度的抗性。從抗性水平上看,ZY和RJ棉蚜種群對(duì)吡蟲啉抗性最為嚴(yán)重,均達(dá)到了高水平抗性,相同研究結(jié)果在山東省棉花主產(chǎn)區(qū)的棉蚜種群中也有報(bào)道[20],因此為了達(dá)到預(yù)期防治效果,在當(dāng)?shù)厣a(chǎn)過(guò)程中應(yīng)該限制對(duì)吡蟲啉的使用。本研究中少部分田間棉蚜種群對(duì)部分供試藥劑較為敏感,這些藥劑可繼續(xù)用來(lái)防治,但大部分地區(qū)棉蚜種群對(duì)殺蟲劑產(chǎn)生了低至中等水平抗性,因此在進(jìn)行害蟲防治時(shí)要注意殺蟲劑的輪換使用[21],也可混用不同作用機(jī)制或無(wú)交互抗性的殺蟲劑[22-24],避免重復(fù)連續(xù)使用單種殺蟲劑[25]。在本研究中,同一地區(qū)棉蚜種群對(duì)不同藥劑的抗性不同,不同地區(qū)棉蚜種群對(duì)同一種殺蟲劑的抗性也存在差異,與Koo等[26]研究結(jié)果一致,這可能是由于當(dāng)?shù)亻L(zhǎng)期大量、高頻率使用某種殺蟲劑導(dǎo)致,也可能與棉蚜體內(nèi)解毒酶活性升高有關(guān)[22]
在實(shí)際生產(chǎn)中,應(yīng)當(dāng)持續(xù)關(guān)注蚜蟲種群動(dòng)態(tài)。在棉蚜大暴發(fā)時(shí),可使用抗性倍數(shù)低的殺蟲劑進(jìn)行防治,但應(yīng)嚴(yán)格控制用藥劑量和施藥次數(shù);也可與其他不同作用機(jī)理的藥物交替使用,或?qū)煞N或多種具有不同作用方式的殺蟲劑復(fù)配使用,以延緩抗藥性的進(jìn)一步發(fā)展。
致謝:貴州大學(xué)昆蟲研究所2016級(jí)研究生龍貴云;2017級(jí)碩士研究生廖應(yīng)江;2019級(jí)碩士研究生吳麗紅、龔明富和楊佳鵬;2020級(jí)碩士研究生賈澤艷、曾慶會(huì)、何麗、陸繼開和張森穩(wěn);2018級(jí)植物保護(hù)專業(yè)本科生郭盼盼和袁娜;錦屏縣植保站楊林、龍向祥、段鑾梅;榕江縣植保站江滋瓊和貴州省農(nóng)科院辣椒所袁圓等參與本研究部分調(diào)查工作,在此致以誠(chéng)摯的謝意!
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Occurrence Regularity and Insecticide Resistance of Aphis gossypii on Capsicum annuum in Guizhou Province
Wei Zhiyan1,Yang Xibin1,Gui Zimeng1,Yang Yu1,Yang Hong1,2,Dai Renhuai1*
(1.Institute of Entomology,Guizhou University/Guizhou Provincial Key Laboratory for Agricultural Pest Management of the Mountainous Region,Guiyang,Guizhou 550025,China;2.College of Tobacco Science,Guizhou University,Guiyang,Guizhou 550025,China)
Abstract:In order to clarify the occurrence regularity and insecticide resistance of Aphis gossypii Glover on Capsicum annuum in Guizhou Province,the study conducted systematic field investigation in 2019 and 2020,and the susceptibility of A.gossypii from four different field populations in Guizhou Province to four insecticides were determined by leaf dipping method.The results showed that there were two peaks of occurrence of A.gossypii every year in the systematic investigation.The first peak period was from late June to early July in 2019,and the second was early August.The first peak in 2020 was the same as in 2019,while the second was mid-July.Two-years investigation showed that the first peak of A.gossypii occurred at the flowering and fruit-setting period,and reached the second peak at fruit-bearing stage.In addition,the results of resistance monitoring of different A.gossypii populations showed that the population of A.gossypii from Anlong county was sensitive (1.28 times) to imidacloprid,and the sensitivity to acetamiprid,abamectin and pymetrozine were gradually decreased.The Rongjiang population was sensitive to acetamiprid and pymetrozine(2.61 times and 1.12 times respectively),while that developed resistance to abamectin and imidacloprid.The population in Jinping country had the highest resistance to pymetrozine (11.19 times),followed by imidacloprid (7.91 times),abamectin (2.86 times) and acetamiprid (2.38 times).The resistance ratio of population in Bozhou District of Zunyi City to acetamiprid,pymetrozine,abamectin and imidacloprid were 1.63 times,5.74 times,18.44 times and 70.22 times,respectively.Except for individual populations still kept sensitive to abamectin and pymetrozine,the others had developed low-to-moderate level resistance.The Anlong population was sensitive to imidacloprid,and the population in Jinping Coutry had developed low-level resistance,but the populations in Rongjiang and Zunyi were at a high-level resistance.All of populations were sensitive to acetamiprid except for Anlong population,which was at a low level resistance (6.64 times).It is recommended to use insecticides with low resistance multiples to prevent and control A.gossypii population before large outbreaks in order to delay the further development of resistance.
Keywords:Aphis gossypii;occurrence;insecticide;resistance
收稿日期:2021-09-10;
修回日期:2021-10-17
基金項(xiàng)目:貴州省科技計(jì)劃項(xiàng)目([2019]2412);貴州省科學(xué)技術(shù)基金項(xiàng)目(重點(diǎn))([2020]1Z021);貴州省高層次創(chuàng)新型人才培養(yǎng)計(jì)劃項(xiàng)目(“百”層次人才)([2020]6003)
通訊作者:戴仁懷(1975—),女,博士,教授,主要從事昆蟲系統(tǒng)學(xué)和農(nóng)業(yè)昆蟲與害蟲防治的研究,E-mail:rhdai69@163.com.