唐英琪

（沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附屬中心醫(yī)院內(nèi)分泌科，遼寧 沈陽(yáng) 110000）

糖尿病在早期階段并無(wú)典型臨床癥狀，隨著病情發(fā)展到侵害靶器官后才會(huì)有對(duì)應(yīng)的癥狀出現(xiàn)，作為當(dāng)前中老年人慢性病發(fā)病率最高的疾病之一，2型糖尿病受環(huán)境、遺傳、生活方式等多種因素相互影響，雖然作為內(nèi)分泌代謝紊亂性疾病對(duì)患者的威脅程度較低，但其可能引發(fā)各種并發(fā)癥如腎病、心血管疾病、神經(jīng)性疾病、潰瘍性疾病甚至心理疾病等，嚴(yán)重威脅患者身體健康和生活質(zhì)量。利拉魯肽是臨床常用于治療2型糖尿病的藥物，其氨基酸序列與人體中內(nèi)源性?；雀哐撬貥与?接近，且代謝穩(wěn)定性較高，在臨床試驗(yàn)中無(wú)論是單獨(dú)用藥或聯(lián)合用藥調(diào)整血糖水平效果均較顯著，但隨著其在臨床廣泛應(yīng)用，大量的研究者[1-3]發(fā)現(xiàn)，該藥物對(duì)于2型糖尿病患者在療效方面具有個(gè)體差異。任麗君[4]的相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)2型糖尿病病情有推動(dòng)作用的相關(guān)位點(diǎn)接近100個(gè)，而位于6Q14-Q15位置的內(nèi)源性大麻素受體1型基因（CNR1）為其中1個(gè)重要因素，有8個(gè)外顯子，且不同的人群也有對(duì)應(yīng)的表現(xiàn)。近年來(lái)，CNR1基因1260G＞A單核苷酸多態(tài)性已被公認(rèn)為與2型糖尿病疾病重要關(guān)聯(lián)易感基因，不同個(gè)體的不同基因表達(dá)對(duì)于病情、藥物療效等也有不同影響。本研究旨在了解CNR1基因的多態(tài)性對(duì)于利拉魯肽治療早期2型糖尿病患者效果的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2018年1月至2019年1月本院收治的230例確診為早期2型糖尿病患者作為研究對(duì)象。其中男118例，女112例；年齡26～59歲，平均（46.22±2.51）歲。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：患者及家屬均簽署知情同意書(shū)；確診為2型糖尿病且病程＜2年；曾用二甲雙胍治療對(duì)血糖未能達(dá)到預(yù)期改善效果而改用利拉魯肽治療；空腹血糖（FPG）＞7.0 mmol/L，餐后2 h血糖（2 h PG）＞11.1 mmol/L，糖化血紅蛋白（HbA1c）＞6.5%。排除標(biāo)準(zhǔn)：在本研究前曾應(yīng)用GLP-1藥物治療；聯(lián)合其他降糖藥物治療；合并有肝腎功能障礙、心腦血管疾病、惡性腫瘤。

1.2 方法 所有患者均通過(guò)皮下注射方式應(yīng)用利拉魯肽治療，初始計(jì)量為每天0.6 mg，隨著病情調(diào)整逐漸增加至每天1.2 mg，治療期間通過(guò)檢測(cè)患者血糖指標(biāo)以及對(duì)藥物治療耐受情況來(lái)調(diào)整藥物劑量，但每天劑量不超過(guò)1.8 mg。

1.3 觀(guān)察指標(biāo) ①比較治療前后患者體重指數(shù)（BMI）、空腹血糖（FPG）、餐后2 h血糖（2 h PG）及糖化血紅蛋白（HbA1c）。②基因分型：抽取患者外周靜脈血5 ml，用儀器Chelex-100在全血中得到基因組DNA，置于-20℃環(huán)境中備用，在聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增中使用。對(duì)1260G＞A位點(diǎn)的上游、下游PCR引物進(jìn)行設(shè)計(jì)，擴(kuò)增該位點(diǎn)和附近的DNA片段，擴(kuò)增條件：95℃，初始變性6 min，94℃，35個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)30 s，60℃退火30 s，72℃延伸1 min。使用5U MSPI限制性核酸內(nèi)切酶在37℃環(huán)境中對(duì)10μl的PCR產(chǎn)物做過(guò)度消化處理。使用2%瓊脂糖凝膠電泳分離消化產(chǎn)物，對(duì)A等基因進(jìn)行切割，分別為92 bp及19 bp兩個(gè)片段，G等位基因則不作切割處理為111 bp片段。③比較不同基因分型患者mRNA表達(dá)水平及不良反應(yīng)發(fā)生率（低血糖、惡心嘔吐）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以“±s”表示，行t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，行χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 1260G＞A位點(diǎn)基因分型結(jié)果 GG型188例，GA型39例，AA型3例，其中等位基因頻率最小為0.098，其分布頻率與哈迪溫伯格平衡相符合（P=0.550）。鑒于A(yíng)A型例數(shù)較少，將GA型、AA型患者合并。

2.2 治療前后患者各項(xiàng)指標(biāo)比較 治療后，患者BMI、FPG、2 h PG及HbA1c均低于治療前（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 治療前后血糖指標(biāo)比較Table 1 Comparison of blood glucose index data before and after treatment

2.3 不同基因分型患者mRNA表達(dá)水平 GG型患者CNR1 mRNA表達(dá)水平為（4.2±1.3），GA/AA型患者CNR1 mRNA表達(dá)水平為（2.8±1.2），比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.4 不同基因分析患者不良反應(yīng)發(fā)生率比較 不同基因分型患者的藥物治療不良反應(yīng)發(fā)生率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表2。

表2 不同基因分析患者不良反應(yīng)發(fā)生率比較Table 2 Comparison of adverse reaction rates in patients with different gene analysis

3 討論

本研究通過(guò)基因分型來(lái)系統(tǒng)的探究大麻素受體1型基因多態(tài)性與利拉魯肽干預(yù)效果間的關(guān)聯(lián)性。相對(duì)于位點(diǎn)野生型GG型患者而言，攜帶A等位基因的GG型以及AA型基因型患者對(duì)于血糖指標(biāo)的控制程度更為突出，再對(duì)符合PBMC標(biāo)本標(biāo)準(zhǔn)的患者進(jìn)行CNR1 mRNA表達(dá)水平分析，提示不同基因類(lèi)型的表達(dá)間也存在著一定的差異[5-6]。

目前CNR1基因在2型糖尿病的發(fā)病以及相關(guān)并發(fā)癥誘發(fā)過(guò)程中發(fā)揮的作用以及靶點(diǎn)仍未完全闡明，但相關(guān)研究表明，CNR1系統(tǒng)失衡可能會(huì)引發(fā)如肥胖、胰島素抵抗、血脂異常等代謝性疾病，而這些疾病本身也會(huì)促進(jìn)2型糖尿病的發(fā)生和惡化[7]。

本研究結(jié)果表明，治療后，患者BMI、FPG、2 h PG及HbA1c均低于治療前（P＜0.05），說(shuō)明基因表現(xiàn)型為GA或AA型的2型糖尿病患者相關(guān)指標(biāo)水平調(diào)整更佳。GG型患者CNR1 mRNA表達(dá)水平高于GA/AA型患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。推斷2型糖尿病患者接受藥物治療后其療效在一定程度上受到了CNR1基因1260＞A位點(diǎn)多態(tài)性的影響，其關(guān)聯(lián)性出現(xiàn)的原因可能為內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)通過(guò)外周、中樞相關(guān)機(jī)制影響甚至改變患者攝入食材的行為，增加CNR1表達(dá)導(dǎo)致患者食欲增加[8]，也說(shuō)明了GG基因表達(dá)型患者因?yàn)閙RNA表達(dá)量較高的情況下而使治療效果相對(duì)較低，而攜帶A等位基因患者在接受利拉魯肽干預(yù)后對(duì)于胰島素抵抗有一定的調(diào)整降低效果，代謝值逐漸升高會(huì)對(duì)應(yīng)的降低體質(zhì)量，這也是對(duì)利拉魯肽藥物治療后效果相對(duì)較差的原因。同時(shí)，在臨床上對(duì)合并肥胖的2型糖尿病患者應(yīng)用利拉魯肽治療還存在有其他多種機(jī)制[9-10]：胰島β細(xì)胞中的相關(guān)肽被直接激活并加快胰島素分泌、合成速度；讓胃部排空所需時(shí)間相對(duì)更長(zhǎng)從而達(dá)到降低患者食欲的目的；抑制胰高血糖素分泌速度來(lái)改善機(jī)體血糖指標(biāo)。利拉魯肽在治療中不會(huì)對(duì)血管造成明顯傷害，對(duì)于改善動(dòng)脈粥樣硬化和降低心血管疾病不良事件發(fā)揮積極保護(hù)作用。

綜上所述，應(yīng)用利拉魯肽藥物治療早期2型糖尿病患者可取得良好的干預(yù)改善效果，其中CNR1基因1260G＞A位點(diǎn)表達(dá)為GA型、AA型患者，其基因表達(dá)可能對(duì)藥物療效產(chǎn)生影響，但本研究仍存在一定的局限性，還需進(jìn)一步研究以得到更明確的結(jié)論。