張鋒燕，任 曼*，余 琦，徐茂森，袁宇塵，趙春芳，江衛(wèi)軍，李升和*

（1.安徽科技學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)調(diào)控與健康安徽省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽鳳陽(yáng) 233100；2.安徽展羽生態(tài)農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司，安徽六安 237100）

蜂花粉是蜜蜂從植物花蕊內(nèi)采集的花粉粒，并加入腺體分泌物混合而成的一種不規(guī)則扁圓形狀物。蜂花粉富含必需氨基酸、礦物質(zhì)、多糖和維生素等營(yíng)養(yǎng)成分，具有促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育和提高免疫力等多種生理功能。蜂花粉種類繁多，來(lái)源多樣，其功能也有一定差異。相關(guān)研究表明，蜂花粉可促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育、降低炎癥因子含量、加強(qiáng)腸道免疫和改善腸道屏障功能等特點(diǎn)。廖呂燕等研究表明，添加不同劑量的油菜花粉超微粉可顯著提高肉雞體質(zhì)量，促進(jìn)肉雞生長(zhǎng)。李娟等研究表明，蕎麥蜂花粉多糖可以改善小鼠腸道隱窩結(jié)構(gòu)，加強(qiáng)腸道免疫，促進(jìn)小鼠生長(zhǎng)發(fā)育及免疫器官發(fā)育。位孟聰研究發(fā)現(xiàn)，板栗蜂花粉可以提高五龍鵝的繁殖性能，并且疾病少、抗病力強(qiáng)。

皖西白鵝是我國(guó)優(yōu)良的地方水禽，在國(guó)際市場(chǎng)上享有“世界珍禽”美譽(yù)。與傳統(tǒng)放牧相比，集約化飼養(yǎng)易導(dǎo)致各種疾病的發(fā)生和自身抵抗力下降。因此，開展提高皖西白鵝抗病抗逆性的研究具有重要意義。本試驗(yàn)旨在研究油菜蜂花粉和茶花蜂花粉對(duì)皖西白鵝生長(zhǎng)性能、肌胃和腺胃組織結(jié)構(gòu)及功能的作用，以期開發(fā)出相應(yīng)綠色飼料添加劑為規(guī)?；B(yǎng)鵝業(yè)的健康發(fā)展提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與日糧 皖西白鵝購(gòu)自六安市裕安區(qū)軍明皖西白鵝良種繁育基地。選用30 日齡健康的皖西白鵝150只，隨機(jī)分成3組，每組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10只鵝。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)組分別在基礎(chǔ)日糧中添加200 mg/kg茶花蜂花粉（葆春蜂王漿有限責(zé)任公司）、200 mg/kg油菜蜂花粉（上海冠生園蜂制品有限公司），試驗(yàn)期為60 d。試驗(yàn)日糧由玉米、豆粕、稻谷、麥麩、石粉、稻殼等組成。日糧營(yíng)養(yǎng)成分參考“中國(guó)飼料成分與營(yíng)養(yǎng)價(jià)值表2019”計(jì)算?；A(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)成分見表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)成分（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.2 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)鵝采用地面平養(yǎng)，自由采食、飲水，嚴(yán)格按照養(yǎng)鵝場(chǎng)提供的免疫程序免疫。

1.3 樣品采集與指標(biāo)測(cè)定

1.3.1 生長(zhǎng)性能 試驗(yàn)期間每天09:00以組內(nèi)的每個(gè)重復(fù)為單位記錄剩余料重，統(tǒng)計(jì)采食量。在試驗(yàn)開始第30、60、90 天時(shí)每只試驗(yàn)鵝空腹稱重并記錄。計(jì)算每只鵝的平均采食量（ADFI）、平均日增重（ADG）、耗料增重比（F/G）。

1.3.2 肌胃、腺胃器官指數(shù) 分別在試驗(yàn)開始第60、90天時(shí)各組中隨機(jī)選取5只鵝（每個(gè)重復(fù)1只）頸靜脈放血處死，屠宰放血后解剖分離肌胃（去角質(zhì)及內(nèi)容物）、腺胃分別稱重，并計(jì)算臟器指數(shù)。

1.3.3 肌胃、腺胃組織觀察 肌胃和腺胃稱重后剝開，用生理鹽水沖洗后取出一塊組織置于4%福爾馬林溶液中固定，石蠟包埋，連續(xù)切片，厚度為5 μm，蘇木精-伊紅（HE）染色，在全自動(dòng)顯微鏡（BA600-4）下觀察其組織結(jié)構(gòu)。

1.3.4 腺胃胃蛋白酶活力測(cè)定 鵝屠宰后，取腺胃組織0.1 g，按1:9加勻漿介質(zhì)，組織勻漿（Schwing muhle Tissue Lyser2勻漿機(jī)）、2 500 r/min離心10 min，取上清液，用試劑盒（南京建成生物工程研究所）測(cè)定腺胃的胃蛋白酶活性。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 數(shù)據(jù)采用IBM SPSS Statistic 23軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，各數(shù)據(jù)之間的差異性采用單因子方差分析（One-Way ANOVA LSD）法進(jìn)行多重比較分析，以<0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。所有數(shù)據(jù)均用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果

2.1 不同來(lái)源蜂花粉對(duì)皖西白鵝生長(zhǎng)性能的影響 如表2所示，試驗(yàn)各組30、60、90日齡體重差異不顯著，油菜蜂花粉組、茶花蜂花粉組30～60、60～90、30～90日齡ADFI、ADG、F/G與對(duì)照組均無(wú)顯著差異。

表2 不同來(lái)源蜂花粉對(duì)皖西白鵝生長(zhǎng)性能的影響

2.2 不同來(lái)源蜂花粉對(duì)皖西白鵝器官指數(shù)的影響 如表3所示，90日齡皖西白鵝的肌胃重量略高于60日齡，90日齡腺胃重量與60日齡差異不顯著。而90日齡的肌胃指數(shù)和腺胃指數(shù)低于60日齡。油菜蜂花粉組、茶花蜂花粉組皖西白鵝60、90日齡的肌胃重、腺胃重、肌胃指數(shù)和腺胃指數(shù)與對(duì)照組均無(wú)顯著差異。

表3 不同來(lái)源蜂花粉對(duì)皖西白鵝肌胃腺胃器官指數(shù)的影響

2.3 不同來(lái)源蜂花粉對(duì)皖西白鵝腺胃、肌胃組織結(jié)構(gòu)的影響 腺胃和肌胃的結(jié)構(gòu)可分為黏膜層、黏膜下層、肌層和外膜4層。如圖1所示，與60日齡相比，90日齡腺胃的腺體數(shù)量多，排列緊湊，腺小管密集，深層黏膜肌厚。60日齡，對(duì)照組腺胃單管腺排列不整齊且較短，深層復(fù)管腺稀疏；茶花蜂花粉組淺層管狀腺排列整齊且較長(zhǎng)，深層復(fù)管腺密集且數(shù)量多，深層黏膜肌比較厚，固有層管狀腺數(shù)量較多；油菜蜂花粉組腺胃單管腺排列不整齊，腺體大小不一；茶花蜂花粉組腺胃發(fā)育較好。90日齡，對(duì)照組腺胃的單管腺較短，腺體數(shù)量不多而且不緊湊；油菜蜂花粉組腺體數(shù)量多，排列緊湊，黏膜層和深層黏膜肌較厚，發(fā)育優(yōu)于對(duì)照組和茶花蜂花粉組。

圖1 不同來(lái)源蜂花粉對(duì)皖西白鵝腺胃組織結(jié)構(gòu)的影響（HE染色，×400）

肌胃黏膜層表面分布一層硬度較大的類角質(zhì)膜。如圖2所示，與60日齡相比，90日齡肌胃腺長(zhǎng)且排列整齊，類角質(zhì)膜平整，說(shuō)明肌胃結(jié)構(gòu)更趨于成熟。60日齡，對(duì)照組肌胃腺較短，油菜蜂花粉組黏膜層厚，肌層也較厚，肌胃腺長(zhǎng)且排列整齊，并且上皮下陷形成漏斗狀的隱窩較深；茶花蜂花粉組肌胃腺數(shù)量多但較短，隱窩較淺但類角質(zhì)膜較厚。90日齡，油菜蜂花粉組、茶花蜂花粉組肌胃的黏膜上皮比對(duì)照組厚，肌胃腺排列整齊。60日齡時(shí)，茶花蜂花粉組的肌胃發(fā)育較好；90日齡時(shí)，油菜蜂花粉組肌胃發(fā)育優(yōu)于對(duì)照組、茶花蜂花粉組。

圖2 不同來(lái)源蜂花粉對(duì)皖西白鵝肌胃組織結(jié)構(gòu)的影響（HE染色，×400）

2.4 不同來(lái)源蜂花粉對(duì)皖西白鵝腺胃胃蛋白酶活力的影響 如圖3所示，90日齡皖西白鵝腺胃的胃蛋白酶活性高于60日齡（<0.01）。60日齡，油菜蜂花粉組、茶花蜂花粉組腺胃胃蛋白酶活力與對(duì)照組沒有顯著差異；90日齡，油菜蜂花粉組高于對(duì)照組和茶花蜂花粉組（<0.01），茶花蜂花粉組與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異。

圖3 不同來(lái)源蜂花粉對(duì)皖西白鵝腺胃胃蛋白酶活力的影響

3 討 論

皖西白鵝屬于中型肉絨兼用品種，是同類型中早期生長(zhǎng)最快的地方鵝品種之一。從4周齡開始其生長(zhǎng)加速，至第5周時(shí)體重生長(zhǎng)強(qiáng)度達(dá)到高峰，之后生長(zhǎng)強(qiáng)度降低，至第7周齡趨于穩(wěn)定。8周齡后主要是骨骼和羽毛生長(zhǎng)，尤其毛囊快速發(fā)育和羽毛的生長(zhǎng)，飼料轉(zhuǎn)化效率顯著降低。有研究發(fā)現(xiàn)，添加0.5%、1.0%、1.5%油菜蜂花粉對(duì)產(chǎn)蛋高峰期和產(chǎn)蛋后期蘆花雞的ADFI、料蛋比、平均蛋重?zé)o顯著影響，但添加1.0%油菜蜂花粉可以顯著提高產(chǎn)蛋后期產(chǎn)蛋率。肉雞中添加2%蜂花粉多糖4周齡體重和F/G與對(duì)照組差異不顯著，但8周齡時(shí)體重和F/G與對(duì)照組差異顯著。本研究中，添加蜂花粉對(duì)皖西白鵝生長(zhǎng)性能有一定提高，但影響不顯著，可能與添加劑量和鵝的周齡有關(guān)。劉曉紅等研究表明，與對(duì)照組相比，50 mg/kg茶花粉水提物組大鼠體重?zé)o顯著差異；意大利蜜蜂補(bǔ)飼茶花粉和油菜花粉可促進(jìn)工蜂幼蟲生長(zhǎng)并可顯著提高工蜂的壽命。不同品種和產(chǎn)地蜂花粉的礦物元素和蛋白質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)含量的差異非常大。不同品種蜂花粉的總黃酮含量和自由基清除能力差異也較大。油菜蜂花粉的總黃酮含量較高，具有較強(qiáng)的自由基清除活性和抗氧化潛力。本研究中，添加相同劑量的油菜蜂花粉和茶花蜂花粉對(duì)動(dòng)物生長(zhǎng)性能的影響均不顯著，但油菜蜂花粉總體效果較好，這可能與油菜花粉中多不飽和脂肪酸（Polyunsaturated Fatty Acid，PUFA）含量豐富有關(guān)。油菜蜂花粉中-亞麻酸（α-Linolenic Acid，ALA）的含量占總脂肪酸含量的48.51%，飽和脂肪酸與PUFA比例合理，維生素E含量豐富，PUFA的平衡可以減少一些疾病的發(fā)生，對(duì)機(jī)體正常生長(zhǎng)和內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定有重要作用。

腺胃和肌胃對(duì)皖西白鵝營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收、機(jī)體免疫和生長(zhǎng)發(fā)育等具有至關(guān)重要的影響。鵝肌胃極其發(fā)達(dá)，崩解壓力遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于雞和鴨，能把植物細(xì)胞壁壓裂，利于吸收細(xì)胞內(nèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。肌胃黏膜是由上皮和固有層構(gòu)成，沒有黏膜肌層，在黏膜表面覆蓋有一層厚而且粗糙的類角質(zhì)膜，俗稱肫皮，中藥稱“雞內(nèi)金”，它具有保護(hù)黏膜的作用，并可抵抗蛋白酶、稀酸和弱酸的作用，對(duì)吞入食物起機(jī)械性磨碎作用，消化能力強(qiáng)。本試驗(yàn)通過(guò)組織結(jié)構(gòu)觀察發(fā)現(xiàn)，蜂花粉可顯著改善肌胃的組織結(jié)構(gòu)，促進(jìn)肌胃腺發(fā)育，類角質(zhì)膜更加平整，黏膜下層發(fā)育較厚。腺胃亦稱前胃，紡錘型，黏膜表面有許多圓形乳頭，乳頭體積較小，但是數(shù)量較多。腺胃具有分泌黏液、酸及酶的功能，對(duì)飼料的磨碎起到了潤(rùn)滑和柔化的作用，有助于粗飼料的進(jìn)一步粉碎和消化，而酸所帶來(lái)的pH降低也有助于纖維素分解菌的生長(zhǎng)。家禽的腺胃較小，其內(nèi)腔比食管內(nèi)腔略大，但由于腺胃黏膜固有層內(nèi)存在大量深層復(fù)管腺，所以比食管壁厚很多，腺體腺細(xì)胞具有家畜胃底腺中壁細(xì)胞和主細(xì)胞的特征，這表明該細(xì)胞既能分泌鹽酸又能分泌胃蛋白酶。蜂花粉中具有抗氧化、抗腫瘤、抗菌、提高免疫力、清除自由基等功效，對(duì)沙門氏菌、大腸桿菌具有良好的殺滅作用，能夠促進(jìn)胃液分泌和改善腸道功能。研究表明，日糧中添加蜂花粉能夠改善蛋雞消化道的組織結(jié)構(gòu)并增強(qiáng)機(jī)體的消化吸收功能。本試驗(yàn)研究顯示，添加油菜蜂花粉腺胃的深層復(fù)管腺數(shù)量多且密集，黏膜層變厚，而深層復(fù)管腺可以分泌鹽酸和胃蛋白酶。本研究中，90日齡時(shí)油菜蜂花粉組胃蛋白酶活力極顯著高于對(duì)照組和茶花蜂花粉組，這可能與油菜蜂花粉中的黃酮類物質(zhì)比其他類花粉要高，而黃酮類化合物具有很好的保健和促消化作用。

4 結(jié) 論

本研究結(jié)果表明，在基礎(chǔ)日糧中添加200 mg/kg的油菜蜂花粉和200 mg/kg茶花蜂花粉對(duì)皖西白鵝生長(zhǎng)性能沒有顯著影響，但可以改善皖西白鵝肌胃和腺胃組織結(jié)構(gòu)，提高腺胃胃蛋白酶活力，增強(qiáng)機(jī)體消化吸收功能，其中200 mg/kg油菜蜂花粉對(duì)皖西白鵝應(yīng)用效果較好。