張一幟，張 媛，李 建，王秀麗，劉元杰，辛凌翔，任小俠，彭國瑞，宋佳誠，李俊平

（中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，北京 100081）

黏膜是機(jī)體應(yīng)對(duì)外源病原體的第一道免疫系統(tǒng)防線[1]，能夠激發(fā)持久有效的黏膜免疫反應(yīng)對(duì)于防御病原體感染大有裨益。然而目前黏膜免疫系統(tǒng)局部保護(hù)機(jī)制的相關(guān)信息還較為匱乏[2-3]，且通過黏膜途徑免疫的抗原相對(duì)來說產(chǎn)生的免疫反應(yīng)強(qiáng)度較低[3]。要產(chǎn)生強(qiáng)力而持久的免疫反應(yīng)，適配于黏膜免疫且安全有效的佐劑就至關(guān)重要。一般來講，佐劑的作用取決于其結(jié)構(gòu)、物化性質(zhì)、與細(xì)胞互作以及抗原類型[4-5]。黏膜免疫佐劑可以根據(jù)其功能分為兩類：抗原載體型及免疫刺激型?？乖d體型佐劑能夠在黏膜表面保護(hù)抗原抵抗艱難條件及巨噬細(xì)胞的清除作用，如病毒樣顆粒、脂質(zhì)體、古菌體等。免疫刺激型佐劑能夠通過直接激活先天性免疫，進(jìn)一步促進(jìn)持續(xù)性的免疫反應(yīng)，如LT、CT、TLR受體，以及細(xì)胞因子等[6]。

目前通過FDA批準(zhǔn)的佐劑主要為鋁佐劑，鋁佐劑因其穩(wěn)定的成分結(jié)構(gòu)和較低的免疫原性獲得了衛(wèi)生部門的批準(zhǔn)，然而這種傳統(tǒng)佐劑無法誘導(dǎo)產(chǎn)生理想的黏膜免疫反應(yīng)[7]。因此亟需研發(fā)新的、安全性良好的、能夠承載抗原或激發(fā)特定免疫反應(yīng)的黏膜免疫佐劑，本文整理匯總了目前黏膜免疫佐劑的發(fā)展并討論了部分佐劑發(fā)揮其功能的內(nèi)在原因。

1 抗原載體型佐劑

1.1 病毒樣顆粒（VLPs）病毒樣顆粒是由重組表達(dá)的單個(gè)或多個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白組裝成衣殼，再進(jìn)一步整合形成的多樣復(fù)合物[8-9]。安全性方面，在顆粒整合過程中沒有內(nèi)部病毒RNA折疊于其中，因而沒有感染或增殖的風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)將病毒整合酶刪除以保證其無法重組或插入宿主細(xì)胞的基因組。有效性方面，VLPs作為黏膜免疫佐劑，除自身顆粒蛋白能夠額外表達(dá)或包裹抗原外（如病原體表位蛋白、共刺激分子、免疫調(diào)節(jié)蛋白、免疫活性小分子、多肽及多糖類分子等）[8,10-12]，VLPs重復(fù)有序的表面特殊結(jié)構(gòu)還能通過PAMPs識(shí)別機(jī)制激發(fā)先天性免疫及抗體的產(chǎn)生[11,13]（圖1-1）。有研究使用TLR7和TLR9激動(dòng)劑作為諾如病毒VLP疫苗的佐劑，經(jīng)口服或鼻內(nèi)給藥小鼠，都在黏膜局部產(chǎn)生了特異性免疫反應(yīng)[14]。在預(yù)防性HIV疫苗研究中，VLPs佐劑疫苗黏膜免疫后使豚鼠產(chǎn)生特異性抗體。值得關(guān)注的是，該研究在VLP中插入了膜錨鞭毛蛋白序列，相較于等量可溶性鞭毛蛋白和常規(guī)VLPs組，插入了膜錨鞭毛蛋白序列的VLP作為佐劑能產(chǎn)生更為強(qiáng)力的免疫反應(yīng)[15]。

1.2 脂質(zhì)體與VLPs類似，脂質(zhì)體也是納米粒子的一種，兩者均為自組裝磷脂雙層包水相，不同點(diǎn)在于脂質(zhì)體能夠形成單層或多層脂質(zhì)體[8,16]。脂質(zhì)體類納米粒子作為疫苗佐劑前景十分廣闊，其優(yōu)勢在于能夠?qū)⑺幬锵鄬?duì)封閉，減少藥物降解，能夠運(yùn)輸?shù)腿芙庑运幬铮ㄟ^包被作用將藥物運(yùn)送到靶組織減少了毒性藥物對(duì)機(jī)體的危害[16-17]。脂質(zhì)體通過內(nèi)吞作用被抗原遞呈細(xì)胞吸收，包括其中的抗原、免疫調(diào)節(jié)分子以及Toll樣受體等，激活并增強(qiáng)特異性免疫反應(yīng)。Christensen等[18]使用脂質(zhì)體CAF01作為流感疫苗佐劑鼻內(nèi)給藥，小鼠脾臟檢測到大量IFN-γ表達(dá)，血清中檢測到了高水平的特異性IgG，并且發(fā)現(xiàn)CAF01脂質(zhì)體能顯著提高黏膜甘露醇單分子層轉(zhuǎn)運(yùn)并增強(qiáng)抗原融合，同時(shí)不影響單分子層的活性和完整性。Henderson等[19]以陽離子脂質(zhì)體聯(lián)合非編碼質(zhì)粒DNA佐劑（cationic liposome-plasmid DNA complexes,CLDC）作為黏膜免疫佐劑接種小鼠，發(fā)現(xiàn)CDLC能夠增強(qiáng)卵清蛋白（Ovalbumin, Ova）在唾液和肺部灌洗液中IgA和血清中IgG1、IgG2的分泌，并且在肺部灌洗液、血液及肺組織中都檢測到了持續(xù)的抗原特異性CD8+T細(xì)胞反應(yīng)。之后用熱滅活類鼻疽伯克氏菌疫苗驗(yàn)證CLDC的佐劑作用，將佐劑疫苗和疫苗分別鼻內(nèi)給藥小鼠，攻毒后40 d，疫苗組5/9存活，佐劑疫苗組9/9存活；攻毒后60 d，疫苗組0/9存活，佐劑疫苗組5/9存活。目前脂質(zhì)體類黏膜免疫佐劑待解決的問題，主要包括脂酶敏感、包封效率低、抗原泄漏以及低pH環(huán)境下穩(wěn)定性較差（影響經(jīng)胃腸道途徑接種的有效性）等[8,20]。

1.3 古菌體古菌體，即古細(xì)菌極化脂質(zhì)體，為異戊二烯鏈（通過醚鍵連接至甘油主鏈）的支鏈5碳重復(fù)序列[20]。這些顆粒在溶液中形成單層、雙層或混合物，具體取決于其中古細(xì)菌酚（雙層區(qū)域）和卡他古醇（單層區(qū)域）的脂質(zhì)組成[21]。這些納米粒子的獨(dú)特結(jié)構(gòu)賦予其多種優(yōu)勢，如耐氧化，磷脂酶抗性、膽汁鹽抗性、溫度變化穩(wěn)定及低pH穩(wěn)定[20]。Li等[22]使用Cy5.5聯(lián)合OVA口服接種小鼠，分別使用脂質(zhì)體佐劑或古菌體佐劑包封Cy5.5-OVA抗原，所用古菌體由嗜酸熱硫化葉菌純化而得。結(jié)果顯示，相較于脂質(zhì)體佐劑，古菌體佐劑能夠顯著延長抗原在體內(nèi)存在時(shí)間，古菌體佐劑還具備誘導(dǎo)更強(qiáng)的體液免疫反應(yīng)和細(xì)胞免疫反應(yīng)的能力。在Patel等[23]的研究中，以土拉弗朗西斯菌提取物為抗原，分別以古菌體、霍亂毒素作為佐劑免疫小鼠。結(jié)果顯示土拉弗朗西斯菌提取物與古菌體佐劑共免疫組能夠產(chǎn)生強(qiáng)力的特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)和體液免疫反應(yīng)。在鼻腔攻毒試驗(yàn)中，土拉弗朗西斯菌提取物與古菌體佐劑共免疫組比其他組的保護(hù)效果都好。這些研究證明了古菌體的功效及其在黏膜疫苗中的應(yīng)用，還需進(jìn)一步的研究闡明其增強(qiáng)體內(nèi)免疫反應(yīng)的分子機(jī)制，以及評(píng)估古菌體對(duì)于動(dòng)物的毒性和免疫原性。

1.4 納米凝膠納米凝膠通常由合成聚合物或生物聚合物組成。納米凝膠的直徑不一，能夠?qū)⑦m應(yīng)的抗原包被于載體系統(tǒng)中。Nochi等[24]開發(fā)了由陽離子型膽固醇基支鏈淀粉組成的納米凝膠。將肉毒梭狀芽胞桿菌的無毒亞基包被于納米凝膠佐劑鼻內(nèi)給藥小鼠，誘導(dǎo)了血清中強(qiáng)特異性IgG和分泌型IgA的抗體應(yīng)答。另外，鼻內(nèi)給藥疫苗并未導(dǎo)致疫苗于嗅球或大腦中積累，而且該疫苗能夠誘導(dǎo)針對(duì)破傷風(fēng)類毒素的強(qiáng)烈特異性全身和黏膜免疫應(yīng)答。有研究者使用納米凝膠載體系統(tǒng)開發(fā)了肺炎鏈球菌候選疫苗，通過鼻內(nèi)給藥和肺炎鏈球菌攻毒試驗(yàn)，在鼠模型上評(píng)估疫苗的保護(hù)效果。納米凝膠佐劑疫苗對(duì)致死劑量肺炎鏈球菌的攻擊具有保護(hù)作用，并在小鼠上、下呼吸道中減少了細(xì)菌的定植和侵入，同時(shí)，也檢測到了免疫組小鼠血清中廣泛的特異性IgG，鼻和支氣管分泌物中的IgA[25]。目前來說，對(duì)于納米凝膠研究證明了該技術(shù)作為黏膜免疫佐劑的良好前景，而制劑配方和給藥劑量等重要參數(shù)是該技術(shù)的突破點(diǎn)，同時(shí)還需要更多的研究來評(píng)估納米凝膠在人體中的功效和安全性。

1.5 納米乳劑納米乳劑載體系統(tǒng)近年來在黏膜疫苗領(lǐng)域引起了極大的關(guān)注，納米乳劑可以認(rèn)為是水包油乳劑的納米級(jí)形態(tài)，將恰當(dāng)?shù)妮d體有機(jī)物經(jīng)過特殊工藝乳化后形成納米級(jí)微粒，再被水相分子所包裹，制成口服乳劑。Das等[26]開發(fā)了水包油納米乳劑流感候選疫苗，給動(dòng)物鼻內(nèi)接種并評(píng)估其免疫原性和保護(hù)效力。在免疫小鼠中檢測到了廣泛的免疫原性，即流感病毒特異性IgG和IgA，以及高滴度的血凝抑制反應(yīng)。攻毒后，免疫小鼠肺和鼻甲中的病毒載量均少于對(duì)照組。目前納米乳劑的免疫機(jī)制研究還不是很深入。Bielinska等[27]鼻內(nèi)接種水包油納米乳劑W805EC能夠激活先天性免疫，并通過TLR2和TLR4途徑激活NF-κB通路。這種激活機(jī)制又不同于傳統(tǒng)TLR激動(dòng)劑，該納米乳佐劑還能夠激活MHCⅡ，CD80和CD86共刺激分子，從而促進(jìn)樹突狀細(xì)胞激活。在一項(xiàng)臨床Ⅰ期研究中，對(duì)199名健康成人志愿者鼻內(nèi)給藥后評(píng)估了納米乳劑黏膜佐劑與流感抗原結(jié)合的安全性和免疫原性，在受試個(gè)體中未觀察到任何不良反應(yīng)。此外，鼻內(nèi)給藥后也檢測到良好的全身免疫和黏膜免疫效果（鼻洗液IgA）[28]。目前來看納米乳劑安全有效，具備良好的應(yīng)用前景，但該載體系統(tǒng)的穩(wěn)定性、劑量、顆粒大小還需要更多的研究完善。

2 免疫刺激型佐劑

2.1 LT/CT大腸桿菌熱不穩(wěn)定腸毒素（heat—labde entemtoxin, LT）和霍亂毒素（cholera toxin,CT）被報(bào)道作為疫苗佐劑有著增強(qiáng)免疫反應(yīng)的作用[29-31]。這些毒素高度相似，都能夠核糖基化Gs蛋白，促進(jìn)腺苷環(huán)化，產(chǎn)生cAMP9。一般來說，野生型的LT/CT等毒素直接作為佐劑應(yīng)用是有毒性的，需要進(jìn)行特定的改造[32-33]。Mutsch等[34]報(bào)道，LT作為佐劑的黏膜免疫流感疫苗可能引起受者患貝爾氏麻痹。2009年，Lewis等[35]報(bào)道稱在結(jié)核菌素佐劑人免疫缺陷病毒黏膜免疫途徑疫苗Ⅰ期臨床安全及有效性驗(yàn)證中，25名受試者中2名出現(xiàn)了貝爾氏麻痹。而目前的解剖學(xué)研究也無法徹底排除此類佐劑疫苗黏膜免疫與LT衍生物之間的相關(guān)性，新一代的LT和CT佐劑通過位點(diǎn)指向性同源重組等方式進(jìn)行基因改造[36]，而大多數(shù)突變體嘗試轉(zhuǎn)移走毒性的同時(shí)或多或少影響到突變體促進(jìn)免疫反應(yīng)的效果。

LTK63被報(bào)道在動(dòng)物體內(nèi)能夠具有佐劑活性而不展現(xiàn)出酶學(xué)活性和毒性[37]。2008年，Brynjolfsson等[38]報(bào)道鼻內(nèi)接種LTK63作為佐劑的腦膜炎球菌（MenC-CRM197）疫苗相比于未添加佐劑組，佐劑疫苗組的新生小鼠產(chǎn)生了更高水平的IgG，并且佐劑疫苗組小鼠血清殺菌效果也有顯著提高。此外，研究者還發(fā)現(xiàn)相較于皮下注射方式，該佐劑疫苗通過鼻內(nèi)接種所獲得的血清殺菌效果更為出色。2011年，Barrette等[39]發(fā)現(xiàn)使用LT63和LTR72（LTR72保留了最低限度的必要酶活性）作為佐劑與口蹄疫病毒TCA肽抗原對(duì)豬進(jìn)行黏膜免疫，豬所產(chǎn)生的血清中抗TCA IgG和IgA水平均顯著高于鋁佐劑疫苗組。在CT作為免疫佐劑的研究中，由于CT對(duì)于人毒性較大，因此首先就是將CT活躍功能位點(diǎn)進(jìn)行突變以降低毒性。Nedrud等[40]利用CT衍生物CTA1-DD作為佐劑與幽門螺旋菌亞單位疫苗鼻內(nèi)給藥小鼠，之后進(jìn)行攻毒，佐劑免疫組取得了良好的免疫效果。Elisason等[41]將非毒性皂素片段插入免疫刺激復(fù)合物片段（immunostimulating complex, ISCOMS）再與CTA1-DD整合，制備成安全有效的黏膜免疫佐劑載體，再將流感病毒M2基質(zhì)蛋白中的M2e肽段插入該載體中構(gòu)建成為DNA疫苗。經(jīng)黏膜免疫一定天數(shù)后攻毒，結(jié)果顯示CTA1-3Me-DD/ISCOMS免疫小鼠組有100%的流感病毒保護(hù)率，劑量依賴性的顯著提升T細(xì)胞和B細(xì)胞反應(yīng)，免疫反應(yīng)效果強(qiáng)于ISCOM或CTA1-DD單獨(dú)免疫組?？梢灶A(yù)見未來將會(huì)有更多的類LT或CT黏膜免疫佐劑被開發(fā)出來，關(guān)鍵點(diǎn)在于產(chǎn)生強(qiáng)力免疫反應(yīng)的同時(shí)限制或移除毒性作用。

2.2 模式識(shí)別配體（pattern recognition ligand, PRL）在免疫應(yīng)答的過程中，抗原遞呈細(xì)胞（如DC）依靠自身表面的模式識(shí)別受體結(jié)合外來病原體，激活相應(yīng)信號(hào)通路，表達(dá)細(xì)胞因子進(jìn)一步激發(fā)相應(yīng)的免疫反應(yīng)（圖2）[13,42]。哺乳動(dòng)物的模式識(shí)別受體包括Toll樣受體（Toll-like receptors, TLRs）、C型凝集素受體（C-type lectin receptors, CLRs）、NOD樣受體（NOD-like receptors, NLRs）、RIG-I樣受體（RIGI-like receptors, RLRs）和AIM2樣受體（AIM2-like receptors, ALRs）等[42-43]。這些模式識(shí)別受體能夠結(jié)合外源病原體上的特異性分子，即為模式識(shí)別配體（pattern recognition ligands，簡稱PRL）。

圖2 模式識(shí)別受體與配體結(jié)合后引起信號(hào)通路的激活[13]Fig.2 Binding of TLR and TRL causes signal pathway activation[13]

近年來TLR配體因其能夠結(jié)合受體激發(fā)先天性免疫和持續(xù)的適應(yīng)性免疫受到了廣泛的關(guān)注，篩選恰當(dāng)?shù)腡RL作為疫苗佐劑是近年來的研究熱點(diǎn)。部分PRL能夠激活刺激多個(gè)TLR進(jìn)而引起多種細(xì)胞因子上調(diào)并促進(jìn)免疫細(xì)胞的分化成熟。Domingos等[44]使用CpG-ODN（TLR9激動(dòng)劑）或poly-(I:C)（TLR3激動(dòng)劑）作為佐劑與HPV E6/E7治療性疫苗通過系統(tǒng)黏膜和生殖道黏膜免疫途徑接種小鼠，引起了特異性的細(xì)胞免疫反應(yīng)，體現(xiàn)了該佐劑促進(jìn)免疫反應(yīng)的效果和作為黏膜免疫佐劑的潛力。2014年，Hjelm等[14]使用諾瓦克病毒VLR與一系列TLR激動(dòng)劑（TLR3、5、7、7/8和9）通過鼻腔和口腔途徑接種動(dòng)物，在免疫動(dòng)物的呼吸系統(tǒng)、腸道系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)中都產(chǎn)生了特異性的功能抗體。Buffa等[45]使用一系列TLR配體和殼聚糖作為黏膜免疫佐劑在小鼠上進(jìn)行試驗(yàn)，經(jīng)舌下腺、鼻腔、陰道黏膜以及腸道外的途徑分別進(jìn)行免疫，結(jié)果因免疫途徑不同而異。經(jīng)舌下腺黏膜途徑免疫的TLR4激動(dòng)劑抑制了系統(tǒng)性免疫反應(yīng)，而經(jīng)鼻腔和陰道黏膜途徑免疫的TLR4激動(dòng)劑增強(qiáng)了小鼠的免疫反應(yīng)。此外，TLR9激動(dòng)劑經(jīng)舌下腺黏膜和鼻腔黏膜增強(qiáng)了免疫反應(yīng)，而對(duì)于非黏膜途徑免疫無影響。而陸晨陽等[46]以CpG-ODN為佐劑對(duì)鴨坦布蘇弱毒活疫苗無明顯的免疫增強(qiáng)效果，并且滯后了抗體產(chǎn)生時(shí)間。目前還未有用于人佐劑的TLR激動(dòng)劑相關(guān)研究，而以上臨床前研究對(duì)于TLR配體作為黏膜免疫佐劑有著重要的參考價(jià)值，所激發(fā)的特定免疫反應(yīng)類型、免疫方式、免疫劑量將是TLR配體作為佐劑需要著重考慮的。

2.3 FLT3配體FLT3是屬于酪氨酸激酶受體家族的細(xì)胞因子受體。FLT3配體在許多人類組織上均有表達(dá)，骨髓中也會(huì)產(chǎn)生FLT3配體。目前，F(xiàn)LT3配體在疫苗臨床和臨床前研究中均有使用，Evans等[47]將重組人FLT3配體作為乙型肝炎疫苗佐劑接種健康成年人，結(jié)果顯示佐劑疫苗組中單細(xì)胞及WBCs數(shù)量均有增長，但乙肝抗體水平并沒有顯著變化。2011年，F(xiàn)ukuyama等[48]使用表達(dá)FLT3配體和CpG-ODN的重組質(zhì)粒作為肺炎鏈球菌疫苗佐劑通過鼻內(nèi)給藥小鼠，能特異性夠激發(fā)黏膜免疫反應(yīng)，分泌大量保護(hù)性IgA。

2.4 細(xì)胞因子細(xì)胞因子由多種免疫細(xì)胞分泌產(chǎn)生，種類多樣，功能多元，能夠刺激靶細(xì)胞產(chǎn)生相應(yīng)的免疫反應(yīng)。參與黏膜免疫的細(xì)胞因子能夠提高局部的淋巴殺傷性T細(xì)胞反應(yīng)（cytotoxic T lymphocyte,CTL）以及特異性的IgA和IgG的水平。有臨床前研究使用IL-1、IL-2、IFN-γ以及GM-CSF作為佐劑均取得了不錯(cuò)的結(jié)果。值得關(guān)注的是IL-1家族細(xì)胞因子，Kayamuro等[49]將IL-1α、IL-1β、IL-18和IL-23作為重組流感病毒H抗原疫苗佐劑鼻內(nèi)給藥小鼠，能顯著提升小鼠鼻腔IgA和抗rHA IgG，并且佐劑疫苗組在攻毒試驗(yàn)中存活率要顯著高于無佐劑疫苗組小鼠。2002年，Bradney等[50]報(bào)道，IL-1α、IL-12和IL-18作為佐劑與HIV包膜合成肽疫苗鼻內(nèi)給藥BALB/c小鼠，相較于疫苗單免組，佐劑疫苗組產(chǎn)生了更高水平的血清IgG，排泄物IgA和IgG1。2014年，Khan等[10]以IL-12和IL-23作為流感疫苗的佐劑黏膜接種小鼠，產(chǎn)生了病毒特異性的鼻腔IgA，并且在攻毒后佐劑疫苗組病毒載量顯著低于疫苗單免組。

值得注意的是，鼻腔和胃腸道作為黏膜免疫最常用的靶器官，需要比傳統(tǒng)的皮下免疫方式在運(yùn)輸佐劑載體、成本以及整體安全性等方面有更多的考量。Huber等[51-52]報(bào)道，人IL-12作為佐劑的臨床試驗(yàn)被撤回，因發(fā)現(xiàn)其對(duì)于部分免疫個(gè)體有一定毒性，注射IL-12可能會(huì)增加IFN-γ的分泌，這會(huì)進(jìn)一步加劇IL-12的毒性反應(yīng)[53]。2008年，van Herpen等[54-55]報(bào)道，在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌患者中使用重組IL-12能有效活化局部淋巴系統(tǒng)并誘導(dǎo)產(chǎn)生自然殺傷性細(xì)胞針對(duì)癌細(xì)胞的殺傷作用。因而將細(xì)胞因子應(yīng)用于黏膜免疫佐劑的過程中，需要謹(jǐn)慎精確地控制好免疫反應(yīng)的類型及強(qiáng)度，盡量減少免疫反應(yīng)過激等影響。

3 展望

黏膜免疫途徑的特點(diǎn)是抗原免疫原性較弱，因此需要開發(fā)適于黏膜免疫的佐劑來提升抗原產(chǎn)生的免疫應(yīng)答。在現(xiàn)代疫苗制劑產(chǎn)業(yè)中，佐劑被認(rèn)為是先天性免疫和適應(yīng)性免疫之間的橋梁。一種優(yōu)秀的佐劑能夠通過增加特定細(xì)胞因子的產(chǎn)生、誘導(dǎo)產(chǎn)生抗體、免疫類型轉(zhuǎn)換、免疫組織表面?zhèn)鬟f或更易被抗原遞呈細(xì)胞攝取來提升疫苗的免疫效果。如前文介紹，近年來有多種納米粒子和免疫刺激分子作為黏膜疫苗佐劑應(yīng)用的研究和臨床試驗(yàn)，其中部分佐劑因能激發(fā)良好的免疫應(yīng)答而被看好，但將其從研究轉(zhuǎn)化為應(yīng)用最大的障礙在于專家和管理部門對(duì)于此類佐劑復(fù)雜性、不穩(wěn)定性和毒性的擔(dān)憂。同時(shí)，黏膜途徑免疫還存在其他問題，比如性別差異導(dǎo)致的不同，男性和女性泌尿生殖道的體液免疫反應(yīng)的獨(dú)特性可能會(huì)影響佐劑的效力；鼻內(nèi)免疫可能會(huì)因疫苗本身成分和個(gè)體差異導(dǎo)致嗅覺神經(jīng)或鼻上皮損傷；胃腸道中極端條件對(duì)于口服或頰含藥物及其佐劑的穩(wěn)定性也是巨大的考驗(yàn)。雖然近年來納米粒子技術(shù)已經(jīng)取得了長足的進(jìn)步以應(yīng)對(duì)上述挑戰(zhàn)，但該技術(shù)還需根據(jù)具體情況和應(yīng)用途徑對(duì)于組分的配方、載體系統(tǒng)、給藥劑量、測試及應(yīng)用的動(dòng)物類型等方面進(jìn)一步開展研究評(píng)估。