王榆平 思美麗 孫小霞 郭玉琳

全世界女性癌癥中發(fā)病率居于第6位的是子宮內(nèi)膜癌，其中美國和歐洲等發(fā)達(dá)國家和地區(qū)的發(fā)病率最高。許多國家子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率逐年增加，并且子宮內(nèi)膜癌的5年生存率逐漸下降，目前還沒有完善的子宮內(nèi)膜癌篩查項(xiàng)目[1-3]。子宮內(nèi)膜癌患者早期無明顯癥狀，目前缺乏早期診斷特異性生物標(biāo)記物。所以探討新的生物標(biāo)記物對(duì)子宮內(nèi)膜癌早發(fā)現(xiàn)、早診斷和評(píng)估預(yù)后尤為重要。

造血前B細(xì)胞白血病轉(zhuǎn)錄因子相互作用蛋白(Hematopoietic pre-B-cell leukemia transcription factor interacting protein，HPIP)最初是通過cDNA文庫進(jìn)行酵母雙雜交篩選的，HPIP蛋白是一個(gè)近年來新發(fā)現(xiàn)的致癌基因，在人類許多惡性腫瘤中是重要的分子生物標(biāo)志物，例如肺小細(xì)胞癌[4]、卵巢癌[5-6]、宮頸癌[7]、結(jié)直腸癌[8]、胃癌[9]、頭頸部鱗癌[10]等。然而HPIP蛋白在子宮正常內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜非典型增生組織和子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及臨床研究仍較少。因此本研究檢測(cè)HPIP在子宮正常內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜非典型增生組織和子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)情況，分析HPIP在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)程度與其臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)標(biāo)本

收集2013年1月—2015年1月在榆林市第二醫(yī)院因子宮肌瘤行子宮切除的子宮正常內(nèi)膜組織樣本26例；因異常子宮出血行診刮病理證實(shí)子宮內(nèi)膜非典型增生組織樣本30例；診斷為子宮內(nèi)膜癌的病理組織樣本122例。所有診斷為子宮內(nèi)膜癌的患者術(shù)前都沒有接受過任何放化療治療，均第一次入院接受了手術(shù)治療，術(shù)后根據(jù)病理情況給予放療和化療治療。

122例病例均完成隨訪，隨訪時(shí)間從患者手術(shù)時(shí)間開始截止到2020年1月。無病生存期(Disease free survival，DFS)是從患者手術(shù)時(shí)間至疾病復(fù)發(fā)時(shí)間；總生存期(Overall survival，OS)是從患者手術(shù)時(shí)間至死亡或隨訪截止時(shí)間。手術(shù)病理分期和組織學(xué)分級(jí)采用2009年國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(Federation International of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO)分期標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。患者的臨床特征和病理特征包括診斷年齡、組織學(xué)分級(jí)、病理類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血清學(xué)CA125和FIGO分期。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

抗PBXIP1抗體(ab84752)購自Abcam公司；PV-6001山羊抗兔IgG/HRP聚合物和二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色劑購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶(Strepavidin peroxidase，SP)免疫組化染色法檢測(cè)HPIP在子宮正常內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜非典型增生組織和子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)情況，簡要步驟如下：石蠟病理組織切片、脫蠟水化、洗片、阻斷內(nèi)源性過氧化物酶抗原修復(fù)、滴加一抗(稀釋比例1∶200)完全覆蓋組織，陰性對(duì)照滴加蒸餾水、滴加二抗(稀釋比例1∶1)、DAB顯色、蘇木素復(fù)染、脫水干燥、中性樹膠封片、烤干。

1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

全部染色組織切片由兩位病理科主任醫(yī)生在雙盲法下獨(dú)立判斷。使用染色強(qiáng)度如下[6]：0(無染色)；1(弱染色)；2(中度染色)；3(強(qiáng)染色)。染色百分比評(píng)分如下：0(≤5%陽性細(xì)胞)；1(6%～25%陽性細(xì)胞)；2(26%～50%陽性細(xì)胞)；3(51%～75%陽性細(xì)胞)；4(>75%陽性細(xì)胞)。評(píng)分為兩者分?jǐn)?shù)相乘，對(duì)于HPIP的表達(dá)評(píng)分，采取評(píng)分0～2分為陰性，3～12分為陽性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

運(yùn)用SPSS 26.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，子宮內(nèi)膜癌患者的HPIP蛋白表達(dá)與臨床病理資料的關(guān)系采用卡方檢驗(yàn)和連續(xù)校正卡方檢驗(yàn)。應(yīng)用Kaplan-Meier法和Log-rank檢驗(yàn)分析子宮內(nèi)膜癌患者HPIP蛋白表達(dá)情況及臨床病理資料與DFS和OS的關(guān)聯(lián)性預(yù)后，預(yù)后影響因素分析使用Cox回歸分析，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HPIP在子宮正常內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜非典型增生組織和子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)情況

免疫組化實(shí)驗(yàn)顯示HPIP在子宮正常內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜非典型增生組織和子宮內(nèi)膜癌組織的表達(dá)位于細(xì)胞漿中，呈棕黃色(圖1)。子宮正常內(nèi)膜組織中HPIP的陽性表達(dá)率為11.54%(3/26)，子宮內(nèi)膜非典型增生組織中HPIP的陽性表達(dá)率為16.67%(5/30)，子宮內(nèi)膜癌組織中HPIP的陽性表達(dá)率為63.11%(77/122)，HPIP在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)顯著高于子宮正常內(nèi)膜組織和子宮內(nèi)膜非典型增生組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=37.500，P<0.001)。

圖1 HPIP在子宮正常內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜非典型增生組織和子宮內(nèi)膜癌組織中的免疫組化結(jié)果Figure 1 The expression of HPIP in normal endometrial, endometrial atypical hyperlasia and endometrial cancer tissuesNote：A and B.The low expression of HPIP in normal endometrial tissues(200× & 400×)；C and D.The low expression of HPIP in endometrial atypical hyperplasia tissues(200× & 400×)；E and F.The high expression of HPIP in endometrial cancer tissues(200× & 400×).

2.2 HPIP在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

HPIP蛋白在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)與其患者的年齡、血清學(xué)CA125、病理類型無關(guān)(P>0.05)，而與FIGO分期、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，復(fù)發(fā)有關(guān)(P<0.05)(表1)。

表1 HPIP在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

2.3 子宮內(nèi)膜癌患者臨床病理特征及HPIP的表達(dá)與DFS和OS的關(guān)系

應(yīng)用Kaplan-Meier單因素生存分析顯示患者FIGO分期、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、HPIP的表達(dá)高低與患者的DFS和OS有關(guān)(P<0.001)(表2，圖2)。

2.4 子宮內(nèi)膜癌患者DFS和OS的影響因素分析

多因素Cox回歸分析結(jié)果示FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、HPIP的表達(dá)是子宮內(nèi)膜癌患者FDS和OS的獨(dú)立影響因素(P<0.05)(表3)。

表3 子宮內(nèi)膜癌患者DFS和OS的影響因素分析

3 討論

迄今為止，有研究已經(jīng)證實(shí)HPIP蛋白與癌細(xì)胞的增殖、遷移、浸潤和轉(zhuǎn)移有顯著關(guān)系[11-12]。通過抑制凋亡和細(xì)胞周期進(jìn)程的活化，伴隨細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期調(diào)節(jié)的表達(dá)變化來促進(jìn)細(xì)胞生長[13]。HPIP可以促進(jìn)癌細(xì)胞的遷移、浸潤和卵巢癌細(xì)胞的上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transition，EMT)，并在這些細(xì)胞中通過磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K)/蛋白激酶B(Protein kinase B，AKT)途徑激活誘導(dǎo)細(xì)胞的EMT[5]。研究還發(fā)現(xiàn)HPIP與有絲分裂紡錘體有關(guān)，它的消耗導(dǎo)致形成多個(gè)有絲分裂紡錘體和染色體異常，導(dǎo)致缺陷胞質(zhì)的分裂，并延遲有絲分裂的結(jié)束，HPIP在G2/M過渡過程中主要維持細(xì)胞周期蛋白B1的時(shí)間穩(wěn)定性從而控制有絲分裂和細(xì)胞分裂[12]。

雌激素受體相互作用的蛋白HPIP可能通過絲裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase，MAPK)和AKT信號(hào)通路激活增加雌激素反應(yīng)性基因的表達(dá)[14]。阻斷HPIP的表達(dá)可以顯著降低人類肝癌細(xì)胞系錨著依賴性和增殖，HPIP蛋白通過激活肝癌細(xì)胞中的G2/M點(diǎn)，來調(diào)節(jié)癌細(xì)胞增殖，敲除HPIP蛋白能抑制癌細(xì)胞的生長，證明其可能成為肝癌基因治療的有效靶點(diǎn)[15]。有研究表明，通過miR-148A微小靶向降低HPIP的表達(dá)，能降低肝癌細(xì)胞的生長、浸潤和轉(zhuǎn)移[16-17]。研究證實(shí)通過抑制HPIP調(diào)節(jié)的PI3K/AKT信號(hào)通路從而抑制頭頸部鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞的增殖和侵襲[10]。Wang等[18]研究顯示HPIP蛋白的敲除顯著抑制甲狀腺癌細(xì)胞的EMT、增殖、遷移，HPIP蛋白的敲除也降低了裸鼠的甲狀腺瘤的生長。

本研究探討HPIP蛋白在子宮正常內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜非典型增生組織和子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)情況與其臨床病理資料之間的關(guān)系。免疫組化方法結(jié)果顯示，HPIP蛋白在子宮正常內(nèi)膜組織和子宮內(nèi)膜非典型增生組織中的表達(dá)顯著低于子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)。HPIP在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)與其患者FIGO分期、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。但是HPIP的表達(dá)與患者的年齡、病理類型、血清學(xué)CA125無關(guān)。本研究采用Kaplan-Meier生存曲線分析示子宮內(nèi)膜癌患者中HPIP高表達(dá)比HPIP低表達(dá)有較差的DFS和OS。這些結(jié)果證實(shí)HPIP能促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌疾病的進(jìn)展，HPIP很可能成為子宮內(nèi)膜癌治療的潛在靶基因。

綜上所述，HPIP在子宮內(nèi)膜癌中高表達(dá)，并與臨床病理特征及預(yù)后密切相關(guān)。HPIP可能促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展，成為治療子宮內(nèi)膜癌的潛在靶點(diǎn)。由于本研究患者的病例數(shù)量少，并且患者的預(yù)后隨訪時(shí)間較短。因此，需要一個(gè)大的樣本量來設(shè)計(jì)，研究HPIP蛋白對(duì)子宮內(nèi)膜患者的診斷及預(yù)后的影響及在子宮內(nèi)膜癌中促進(jìn)癌癥發(fā)展機(jī)制。