(1.新疆兵團(tuán)第七師胡楊河市畜牧獸醫(yī)站，新疆 奎屯 833200；2.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830000；3.新疆天潤牧業(yè)股份有限公司，新疆 烏魯木齊 830000)

0 引言

隨著奶牛養(yǎng)殖集約化、規(guī)?；l(fā)展，有效預(yù)防奶牛疾病變得愈發(fā)重要。困擾規(guī)?；龅膬纱蠹膊。籂倥８篂a和奶牛乳房炎，都與環(huán)境有密切聯(lián)系，外界環(huán)境中病原微生物隨時會入侵動物機(jī)體，一些被感染的牛群也會污染周圍環(huán)境。同時，規(guī)?；膛鲲曫B(yǎng)密度較大，牛群接觸頻繁，使病原菌傳播更快速。選擇適合有效的消毒劑，制定合理的消毒程序，能夠有效阻止疫病發(fā)生和傳播。本研究針對奎屯墾區(qū)大型規(guī)模奶牛養(yǎng)殖場，在春季奶牛乳房炎和犢牛腹瀉的高發(fā)期進(jìn)行采樣，挑選出牛場中具有代表性的病原微生物，用不同的消毒劑進(jìn)行處理，以探求適合奶牛場的消毒劑。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 培養(yǎng)基

營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基(生產(chǎn)批號：201112)、M-H瓊脂平皿(生產(chǎn)批N21GK001)、血瓊脂平板(生產(chǎn)批號：T21GT003)、麥康凱瓊脂平板(生產(chǎn)批號：N21GK001)、營養(yǎng)瓊脂平板(生產(chǎn)批號：N20GK006)，以上均選購自南通凱恒生物技術(shù)開發(fā)有限公司。

1.1.2 消毒劑

選擇了5種常用消毒劑，用來篩選抑菌效果，具體如表1所示。

1.1.3 儀器設(shè)備

超純水儀(KZ-CK-50L)，上?？浦苇h(huán)保設(shè)備有限公司；電子天平 (FA1204)、高壓滅菌鍋(DGS-280C+)，力辰科技有限公司；高速離心機(jī)(TG16G)，河南北弘實(shí)業(yè)有限公司，凈化工作臺(SW-CJ-2FD)，蘇州凈化設(shè)備公司。

表1 5種常用消毒劑

1.2 方法

1.2.1 樣品的采集

樣品采集于新疆奎屯墾區(qū)2個規(guī)模牛場。共采集環(huán)境樣品41個，分別取自消毒通道、犢牛舍、擠奶廳、運(yùn)動場等場所。使用無菌棉簽采集相關(guān)場所的環(huán)境樣品后分別放置裝有無菌生理鹽水的10 mL離心管中并且做好標(biāo)記。將標(biāo)記的樣品密封在無菌袋中，放在帶冰袋的泡沫盒中，并保存在-20℃?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 細(xì)菌培養(yǎng)及分離純化

取100 μL樣品上清液放入營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)12 h，用接種環(huán)蘸取菌液在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、血瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基中劃線培養(yǎng)12 h，觀察培養(yǎng)基中的細(xì)菌菌落，挑取差異較大的進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢，觀察出不同細(xì)菌后繼續(xù)進(jìn)行分離純化，最后用接種環(huán)蘸取純化的細(xì)菌菌落接種在營養(yǎng)肉湯中進(jìn)行增菌。

1.2.3 藥敏制片的制備

用打孔機(jī)將定性濾紙打成6 mm直徑的圓形小紙片。將圓紙片放入清潔干燥的青霉素空瓶中，瓶口以單層牛皮紙包扎。經(jīng)121℃，15～20 min高壓消毒后，放在37℃溫箱中數(shù)天，使其完全干燥。在上述紙片的青霉素瓶內(nèi)加入按照說明書稀釋過的消毒劑0.25 mL，并翻動紙片，使各紙片充分浸透藥液，同時在瓶口上記錄藥物名稱，放37℃溫箱內(nèi)過夜，干燥后即密蓋。

1.2.4 消毒劑敏感性試驗(yàn)

將培養(yǎng)的細(xì)菌溶液用無菌鹽水稀釋至濃度為0.5麥?zhǔn)媳葷釢舛?，?00 μL細(xì)菌溶液吸到M-H藥物敏平板上，用涂布器涂均勻，靜置 1 min。將5張制備好的含不同消毒劑的藥敏制片均勻地貼在不同的藥敏平板上，放在37℃的培養(yǎng)箱中18～24 h，然后根據(jù)測量抑菌環(huán)的直徑判斷消毒劑的敏感度。標(biāo)準(zhǔn)判定參考表2。

表2 消毒劑敏感性 單位：mm

2 結(jié)果與分析

2.1 致病菌分離結(jié)果

從養(yǎng)殖場采集的樣品中分離出具有代表性的致病菌為化膿隱秘桿菌、大腸桿菌、葡萄球菌、腸球菌等。

2.2 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

從養(yǎng)殖場樣品中分離出的致病菌通過K-B藥物敏感性試驗(yàn)，根據(jù)測量抑菌環(huán)的直徑判斷消毒劑的敏感度。結(jié)果表明，所測得的幾種致病菌主要對新潔爾滅、葵甲溴銨碘、戊二醛較為敏感。其中對甲酚皂耐藥的細(xì)菌最多，葡萄球菌對聚維酮碘中敏，具體如表3所示。

表3 消毒劑藥敏試驗(yàn)結(jié)果 單位：mm

3 討論

牛場中最理想的消毒劑應(yīng)該具有對人和牛都安全無害、副作用低、殺菌能力強(qiáng)、殺菌普廣等優(yōu)點(diǎn)[1]。消毒劑分為很多種，按成分可以將消毒劑分為酚類、醇類、醛類、鹵素類、酸類、堿類、氧化劑類及季銨鹽類[2]。復(fù)方甲酚皂屬于酚類消毒劑，主要?dú)⒕煞譃榧追覽3]，在本次試驗(yàn)分離出的4種病原菌中，復(fù)方甲酚皂，只有化膿隱秘桿菌對其敏感，其他病原菌都顯示耐藥，這與之前該牧場大量使用復(fù)方甲酚皂未及時更換消毒液有關(guān)。新潔爾滅屬于季銨鹽類消毒劑，在本次實(shí)驗(yàn)中所有致病菌都對其比較敏感，且在吳俊容的研究中新潔爾滅在有機(jī)物存在時仍舊具有良好的抑菌效果，比較適合牛場使用[4]。聚維酮碘和葵甲溴銨碘屬于含碘類消毒劑，但此類消毒劑性質(zhì)不穩(wěn)定，有機(jī)物、pH值及溫度都對其效果影響較大[5]。在本次試驗(yàn)中除了葡萄球菌對聚維酮碘是中敏以外，其他病原菌都對其敏感，說明此類消毒劑對該牧場的病原菌殺滅效果較好。戊二醛屬于醛類消毒劑，在此次實(shí)驗(yàn)中所有病原菌對其都較為敏感，但此類消毒劑成本較高，氣味較大。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)中4種病原菌都敏感的消毒劑有：新潔爾滅、葵甲溴銨碘、戊二醛。實(shí)驗(yàn)結(jié)果對前期這2個牧場飼養(yǎng)環(huán)境的消毒工作具有較強(qiáng)的指導(dǎo)意義[6]。建議牧場采用這3種消毒劑，進(jìn)行替換使用，避免長時間使用一種消毒劑造成耐藥性，以達(dá)到最佳消毒效果。