何潔 梁霜 張國俊 趙致 李忠

摘要：【目的】明確貴州省施秉縣太子參葉斑病的病原種類，并探究6種殺菌劑對病原菌的室內(nèi)抑制活性，以期為太子參葉斑病田間藥劑防治提供參考。【方法】利用組織分離法對具有典型葉斑病癥狀的太子參病葉進(jìn)行病原菌分離純化，依據(jù)柯赫氏法則進(jìn)行驗證，結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察及多基因（ITS、tef1、LSU、SSU、GAPDH和rpb2）系統(tǒng)發(fā)育分析對病原菌進(jìn)行鑒定;采用菌絲生長速率法測定6種常見殺菌劑（35%氟菌·戊唑醇懸浮劑、43%氟菌·肟菌酯懸浮劑、75%肟菌·戊唑醇水分散粒劑、60%唑醚代森聯(lián)水分散粒劑、37%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑和30%苯甲丙環(huán)唑乳油）對病原菌的室內(nèi)毒力?！窘Y(jié)果】引起貴州省施秉縣太子參葉斑病的病原菌為細(xì)極鏈格孢（Alteraria tenuissima），菌株編號為TZSYB1。室內(nèi)毒力測定結(jié)果表明，供試6種殺菌劑對菌株TZSYB1菌絲生長均有一定的抑制作用，其中30%苯甲丙環(huán)唑乳油的抑制活性最強，對病原菌的抑制中濃度（EC50）為10.81 μg/mL;其次為37%苯醚甲環(huán)唑水分散粒和43%氟菌·肟菌酯懸浮劑，EC50分別為21.31和27.31 μg/mL?！窘Y(jié)論】引起貴州省施秉縣太子參葉斑病的病原菌為細(xì)極鏈格孢，可選用30%苯甲丙環(huán)唑乳油、37%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑和43%氟菌·肟菌酯懸浮劑進(jìn)一步開展田間防治試驗。

關(guān)鍵詞： 太子參;葉斑病;病原鑒定;細(xì)極鏈格孢;藥劑篩選

中圖分類號： S435.675 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號：2095-1191（2021）08-2124-09

Pathogen identification and screening of fungicides against Pseudostellaria heterophylla （Miq.） Pax leaf spot

HE Jie1， LIANG Shuang1， ZHANG Guo-jun1， ZHAO Zhi2， LI Zhong1， 2*

（1College of Agriculture， Guizhou University， Guiyang ?550025， China; 2Key Laboratory of Propagation

and Cultivation on Medicinal Plants in Guizhou Province， Guiyang ?550025， China）

Abstract：【Objective】In order to identify the pathogen species of Pseudostellaria heterophylla（Miq.） Pax leaf spot in Shibing， Guizhou， and to explore the indoor inhibitory activity of six fungicides against the pathogen， so as to provide reference for field fungicide control. 【Method】The pathogen were isolated and purified from diseased leaves wit typical leaf spot systems by tissue isolation method， and the pathogen were verified according to Kochs rule. Combined with morphological observation and phylogenetic tree based on ITS，tef1， LSU， SSU， GAPDH and rpb2 genes， the pathogenwere identified， and the indoor toxicity of six common fungicides（35% tebuconazole·tebuconazole SC， 43% fluorobacterium·oximeryl ester SC，75% oximex·tebuconazole WG， 60% azolethenyl WG， 37% difenoconazole WG and 30% benzopropiconazole EC） to the pathogen was determined by mycelial growth rate method. 【Results】Alteraria tenuissima was the pathogen causing the leaf spot disease of P. heterophylla in Shibing， Guizhou， and the strain number was TZSYB1. The results of indoor toxicity test showed that the six fungicides had certain inhibitory effect on the mycelial growth of TZSYB1. Among them， 30% propiconazole EC had the strongest inhibitory activity with Moderate inhibitory concentration（EC50） of 10.81 μg/mL， followed by 37% difenoconazole WG， and EC50 was 21.31 μg/mL， then was 43% fluorobactam·oxime ester SC， which EC50 was 27.31% μg/mL. 【Conclusion】The pathogen of P. heterophylla leaf spot in Shibing， Guizhou is A. tenuissima. 30% propiconazole EC， ?37% difenoconazole WG and 43% fluorobacilli·oxime ester SC can be selected for further field control.

Key words： Pseudostellaria heterophylla（Miq.） Pax; leaf spot disease; pathogen identification; Alteraria tenuissima; fungicide screening

Foundation item： Guizhou Science and Technology Support Plan Project（QKHZC〔2017〕2828， QKHZC〔2020〕4Y096）

0 引言

【研究意義】太子參[Pseudotellaria heterophylla（Miq.） Pax]又名孩兒參、童參、異葉假繁縷等，為石竹科孩兒參屬多年生草本植物，以干燥塊根入藥，藥性甘、微苦，具有益氣健脾、生津潤肺的功效（肖培根等，2002），在臨床上應(yīng)用已有100多年的歷史（Hu et al.，2019），一般用于治療糖尿病、免疫調(diào)節(jié)、保護(hù)心肌、抗氧化等（沈祥春等，2008;Wang et al.，2013）。20世紀(jì)70年代太子參主要以野生為主，但隨著市場需求量不斷增加，野生資源極度匱乏，近年來山東、福建、安徽和貴州等省已開始大面積人工栽培（陳婷等，2019;宋葉等，2019）。據(jù)統(tǒng)計，貴州省黔東南州太子參栽培面積達(dá)1.39萬ha，主要集中在施秉縣和黃平縣（康傳志等，2016），隨著人工種植面積逐年擴大，貴州省太子參病害越發(fā)嚴(yán)重，目前已報道的有葉斑病、根腐病、白絹病、紫紋羽病、病毒病、霜霉病和灰霉病等（陰華海，2015），其中太子參葉斑病的發(fā)生極為普遍，發(fā)病初期表現(xiàn)為中央淺白色、邊緣淡黃色的水漬狀病斑;隨后葉斑緩慢擴大成圓形灰白色小枯斑，周圍黃暈;隨著病斑擴大，長出黑色小點，排列成輪紋狀;發(fā)病后期病斑顏色逐漸變?yōu)闇\褐色或深褐色，幾個小病斑合成不規(guī)則大斑，致使整張葉片干枯、腐爛，導(dǎo)致整株枯死并造成大面積傳染（袁小坦，2006）。經(jīng)調(diào)查，施秉縣太子參葉斑病發(fā)生嚴(yán)重時田間病株率達(dá)80%以上，產(chǎn)量損失50%以上（龍光泉等，2013），嚴(yán)重影響太子參的品質(zhì)和產(chǎn)量，給種植戶造成較大的經(jīng)濟(jì)損失。因此，明確太子參葉斑病病原種類并開展病害室內(nèi)藥劑篩選，對太子參葉斑病田間防治具有重要意義。【前人研究進(jìn)展】目前已報道的太子參葉斑病病原菌有莖點霉屬真菌（Phoma sp.）（王宗華等，1997）、葉點霉屬真菌（Phyllosticta commonsii）（溫學(xué)森等，2003）、球殼孢目殼針孢屬真菌（Septoria sp.）（徐宏輝，2007）和殼二孢屬真菌（Ascochyta versabilis）（李樹江等，2018），傳統(tǒng)真菌主要基于營養(yǎng)體和子實體的形態(tài)特征進(jìn)行鑒定，但營養(yǎng)體的形成常受到培養(yǎng)條件的影響而產(chǎn)生較大差異，僅基于形態(tài)學(xué)已不能明確病原真菌的分類地位，因此大多傾向于使用DNA序列來進(jìn)行界定，并且意識到單個基因鑒定的局限性，目前多采用多個基因聯(lián)合鑒定的方法對病原真菌進(jìn)行鑒定（周游，2015），如王夢奇等（2019）利用ITS、ACT、tub2、rpb2、TEF和LSU 6個基因序列對大豆莖點霉屬葉斑病病原菌進(jìn)行準(zhǔn)確鑒定。目前對于太子參葉斑病病害防治主要以化學(xué)藥劑防治為主，據(jù)報道用于防治由殼針孢屬真菌引發(fā)的太子參葉斑病的藥劑有代森鋅、60%多菌靈和70%甲基托布津等（溫學(xué)森等，2003），在太子參葉斑病發(fā)病期進(jìn)行葉面噴施能有效降低葉斑病的發(fā)生;用于防治由P. commonsii引起的太子參葉斑病藥劑有70%代森錳鋅、70%甲基硫菌靈和50%多菌靈等，其600和800倍液對菌絲的抑菌率均為100%（邵昌余等，2016）;對于太子參葉斑病新紀(jì)錄種A. versabilis，李樹江等（2018）選用5種藥劑對該病原菌進(jìn)行室內(nèi)毒力測定，結(jié)果表明，70%甲基硫菌靈可濕性粉劑2000倍、37%苯醚甲環(huán)唑可濕性粉劑2000倍和40%氟硅唑乳油2000倍對該病原菌的抑制率均高于90%?！颈狙芯壳腥朦c】本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，引起貴州省施秉縣太子參葉斑病的病原菌與現(xiàn)有報道存在差異，需進(jìn)一步開展鑒定及防治藥劑篩選工作。【擬解決的關(guān)鍵問題】采用組織分離法對太子參葉斑病病原菌進(jìn)行分離純化，通過柯赫氏法則進(jìn)行驗證，結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察及多基因系統(tǒng)發(fā)育分析對病原菌進(jìn)行鑒定，并測定病原菌對6種殺菌劑的室內(nèi)毒力，以期為太子參葉斑病田間病害識別及藥劑防治提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 試驗材料

1. 1. 1 病樣采集 2018年5月從貴州省黔東南州施秉縣太子參種植基地采集具有典型葉斑病癥狀的病葉，帶回實驗室于4 ℃冰箱冷藏備用。

1. 1. 2 培養(yǎng)基 馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）培養(yǎng)基：去皮馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂15～20 g，蒸餾水補足至1000 mL。

1. 1. 3 供試藥劑 35%氟菌·戊唑醇（露娜潤）懸浮劑、43%氟菌·肟菌酯（露娜森）懸浮劑和75%肟菌·戊唑醇（拿敵穩(wěn)）水分散粒劑（拜耳股份公司）;60%唑醚代森聯(lián)水分散粒劑（巴斯夫歐洲公司）;37%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑（武漢楚強生物科技有限公司）;30%苯甲丙環(huán)唑乳油（東莞市瑞德豐生物科技有限公司）。

1. 2 試驗方法

1. 2. 1 病原菌分離純化 采用組織分離法（方中達(dá)，2007）分離病原菌。在太子參葉片病健交界處用無菌接種刀切取5 mm×5 mm的組織塊，在75%酒精中浸泡10 s后于0.1%酸性升汞溶液中浸泡3 min，無菌水沖洗3次后用無菌吸水紙吸干，將其擺放于PDA培養(yǎng)基平板上，每個平板放置3～5個組織塊，置于28 ℃、相對濕度70%、光周期12 h/12 h的培養(yǎng)箱內(nèi)恒溫培養(yǎng)3～5 d，挑取無污染的邊緣菌絲至另一PDA培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)7～10 d，將獲得的純培養(yǎng)菌株于4 ℃斜面保存?zhèn)溆谩?/p>

1. 2. 2 致病性測定 按柯赫氏法則進(jìn)行致病性測定。選取健康太子參葉片，以無菌水沖洗后用無菌濾紙擦干。采用刺傷接種和無傷接種2種方法接種病原菌：用直徑為5 mm的無菌打孔器在培養(yǎng)7 d左右的葉斑病病原菌菌落邊緣打取菌餅，用滅菌針在太子參葉片上刺傷2個點，每點接種1塊菌餅，以相同方法接種菌餅于未刺傷的太子參葉片上，以接種瓊脂塊為對照，每處理3個重復(fù)，置于28 ℃、相對濕度70%、光周期12 h/12 h的培養(yǎng)箱內(nèi)恒溫培養(yǎng)，觀察并記錄發(fā)病情況（宋莉莎等，2019）。待葉片有明顯發(fā)病特征時，再次從該葉片上利用組織分離法分離純化病原菌，觀察與原病原菌的菌落形態(tài)是否一致。

1. 2. 3 病原菌形態(tài)學(xué)鑒定 將純化菌株接種于PDA培養(yǎng)基上，置于28 ℃、相對濕度70%、光周期12 h/12 h的培養(yǎng)箱內(nèi)恒溫培5 d左右，觀察記錄菌落菌絲顏色及形態(tài)。待長出孢子后用無菌接種針挑取菌絲制備玻片，在光學(xué)顯微鏡下觀察產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)、孢子形態(tài)等，測量孢子大小并拍照記錄。

1. 2. 4 病原菌分子生物學(xué)鑒定 將病原菌菌株接種于PDA培養(yǎng)基上，28 ℃恒溫培養(yǎng)7 d左右，用無菌接種刀刮取菌絲體于1.5 cm無菌離心管中，采用真菌DNA提取試劑盒（Biomiga Fungal gDNA Kit）提取基因組DNA。采用真菌rDNA-ITS通用引物（ITS4：5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3'，V9G：5'-TTACGTCCCTGCCCTTTGTA-3'）、LSU引物（LR5：5'-TTAAAAAGCTCGTAGTTGAAC-3'，LSU1Fd：5'-GRATCAGGTAGGRATACCCG-3'）、SSU引物（NS1：5'-GTAGTCATATGCTTGTCTC-3'，NS4：5'-CTTCC GTCAATTCCTTTAAG-3'）、TEF1引物（EF1-728F：5'-CATCGAGAAGTTCGAGAAGG-3'，EF1-986R：5'-TACTTGAAGGAACCCTTAC-3'）、RPB2引物（RPB2-5F2：5'-GGGGWGAYCAGAAGAA-3'，RPB2-7CR：5'-CCCATRGCTTGTYYRCCCAT-3'）和GAPDH引物（gpd1：5'-CAACGGCTTCGGTCGCATTG-3'，gpd2：5'-GCCAAGCAGTTGGTTGTGC-3'）對菌株進(jìn)行PCR擴增[引物均由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。PCR體系25.0 μL：2×Taq PCR Mix 12.5 μL，DNA模板1.0 μL，上、下游引物各1.0 μL，ddH2O 9.5 μL。ITS、SSU和LSU引物的擴增程序：95 ℃預(yù)變性5 min;95 ℃ 30 s，52 ℃ 45 s，72 ℃ 90 s，進(jìn)行35個循環(huán);72 ℃延伸10 min。TEF1引物的擴增程序：94 ℃預(yù)變性5 min;94 ℃ 45 s，56 ℃ 45 s，72 ℃ 45 s，進(jìn)行35個循環(huán);72 ℃延伸10 min。RPB2引物的擴增程序：95 ℃預(yù)變性3 min;95 ℃ 30 s，55 ℃30 s，72 ℃ 60 s，進(jìn)行35個循環(huán);72 ℃延伸10 min。GAPDH引物的擴增程序：94 ℃預(yù)變性2 min;96 ℃ 60 s，58 ℃ 60 s，72 ℃ 60 s，進(jìn)行35個循環(huán);72 ℃延伸10 min。反應(yīng)結(jié)束后進(jìn)行1.2%瓊脂糖凝膠電泳檢驗，將條帶清晰的PCR產(chǎn)物送至生工生物工程（上海）股份有限公司測序。將測序所得的核苷酸序列在GenBank中進(jìn)行同源性比對，并下載相應(yīng)的模式菌株基因序列，基于最大簡約法利用PAUP 4.0構(gòu)建多基因系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹（任靜等，2016）。

1. 2. 5 病原菌對藥物敏感性測定 采用菌絲生長速率法測定病原菌對6種供試藥劑的敏感性。將純化后的病原菌接種于PDA培養(yǎng)基，28 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5～7 d。用直徑5 mm的無菌打孔器打取菌餅置于含藥培養(yǎng)基上，每皿接種1塊菌餅，于28 ℃、相對濕度70%、光周期12 h/12 h的培養(yǎng)箱內(nèi)恒溫培養(yǎng)，以含等量無菌水的PDA培養(yǎng)基為對照（CK）。供試藥劑分別設(shè)5個濃度，每個濃度3個重復(fù)。各藥劑濃度設(shè)置：35%氟菌·戊唑醇懸浮劑設(shè)4000、8000、16000、32000和64000倍液;30%苯甲丙環(huán)唑乳油和43%氟菌·肟菌酯懸浮劑分別設(shè)6000、12000、24000、48000和96000倍液;37%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑設(shè)2000、4000、8000、16000和32000倍液;60%唑醚代森聯(lián)水分散粒劑設(shè)500、1000、2000、4000和8000倍液;75%肟菌·戊唑醇水分散粒劑設(shè)3000、6000、12000、24000和48000倍液。待對照組的菌絲長滿平板時，用十字交叉法測量菌落直徑，計算抑制率。抑制率（%）=（對照菌落直徑-處理菌落直徑）/對照菌落直徑×100。

1. 3 統(tǒng)計分析

利用Excel 2010、DPS 7.0和SPASS 16.0對試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析，以最小二乘法求出毒力回歸方程Y=aX+b，計算供試藥劑對病原菌的抑制中濃度（EC50）和回歸方程決定系數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2. 1 發(fā)病癥狀

太子參感病初期，葉片感病部位呈現(xiàn)中央白色、邊緣淺黃色的黃暈斑，水漬狀，隨著感病時間延長病斑逐漸擴大形成黃褐色的枯斑，感病后期病斑呈輪紋狀（圖1-C），上著生黑色小點，為其分生孢子器（圖1-A和圖1-B），嚴(yán)重時導(dǎo)致整株葉片枯死。

2. 2 病原菌分離結(jié)果

對采集的病樣運用組織分離法進(jìn)行分離，共分離出10株形態(tài)不一的菌株，分別標(biāo)號為TZSYB1～ TZSYB10。

2. 3 病原菌致病性測定結(jié)果

對各菌株進(jìn)行致病性測定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，接種菌株TZSYB1后太子參葉片有明顯的發(fā)病癥狀，致病力較強，接種其他菌株太子參葉片不發(fā)病或發(fā)病不明顯。進(jìn)行刺傷接種菌株TZSYB1處理，接種3 d后太子參葉片開始發(fā)病，呈現(xiàn)近圓形的淺黃色病斑，水漬狀;接種7 d時病斑逐漸擴大，顏色逐漸加深，呈深褐色（圖2-A1和圖2-A2）;發(fā)病10 d后病部呈現(xiàn)邊緣淺黃色、中央深褐色的輪紋狀病斑，與田間發(fā)病癥狀相似（圖2-B1和圖2-B2）;在相同條件下未刺傷接種病原菌處理，接種10 d后太子參葉片上呈現(xiàn)小塊淡褐色的病斑（圖2-C1和圖2-C2）;對照葉片未發(fā)?。▓D2-D1和圖2-D2）。從發(fā)病葉片再分離純化得到的病原菌與接種的病原菌相同，證實該菌為太子參葉斑病的致病菌，且致病力較強。

2. 4 病原菌的形態(tài)學(xué)鑒定

在PDA培養(yǎng)基上初期菌落灰白色，后期顏色逐漸加深，變?yōu)樯詈稚虍a(chǎn)紅色色素，氣生菌絲茂盛（圖3-A和圖3-B）;培養(yǎng)7 d后菌絲長滿全皿;培養(yǎng)15～30 d后在顯微鏡下觀察病原菌的分生孢子形態(tài)多樣，呈倒梨形、棍棒形、卵形或近橢圓形，大小為13.11～47.95 μm×7.13～12.14 μm，具1～6個橫膈膜和0～4個縱隔膜，隔膜處略縊縮，有的分生孢子具有短柱狀喙（圖3-C～圖3-E）。分生孢子梗單生或簇生，長短不一，頂生分生孢子，有隔膜，前期無色，后期逐漸變?yōu)樯詈稚▓D3-F和圖3-G）。

2. 5 病原菌分子生物學(xué)鑒定結(jié)果

擴增病原菌菌株TZSYB1的ITS、tef1、LSU、SSU、GAPDH和rpb2等6個基因并測序，將獲得的序列在NCBI進(jìn)行BLAST比對，下載同源性較高的序列和模式菌株進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化分析（圖4），以蔥葉枯葡柄霉（Stemphylium botryosum）為外群，目標(biāo)菌株TZSYB1與Alteraria tenuissima聚為一支，菌株號為CBS 918.86，同源性為97%。結(jié)合形態(tài)特征和分子生物學(xué)分析結(jié)果，將導(dǎo)致貴州省施秉縣太子參葉斑病的致病菌鑒定為細(xì)極鏈格孢（A. tenuissima）。

2. 6 病原菌對藥物敏感性測定結(jié)果

室內(nèi)藥劑篩選結(jié)果（表1）表明，供試6種藥劑稀釋系列濃度后對病原菌菌絲生長均有一定的抑制作用，其中30%苯甲丙環(huán)唑乳油稀釋6000倍液處理的抑制率最高，為80.38%，顯著高于其他處理（P<0.05，下同）。室內(nèi)毒力結(jié)果（表2）表明，30%苯甲丙環(huán)唑乳油的EC50為10.81 μg/mL，顯著低于其他5種藥劑，表明病原菌對該藥劑最敏感，其次為37%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑、43%氟菌·肟菌酯懸浮劑和35%氟菌·戊唑醇懸浮劑，EC50分別為21.31、27.31和36.10 μg/mL，75%肟菌·戊唑醇水分散粒劑和60%唑醚代森聯(lián)水分散粒劑的抑制作用較差，病原菌對其敏感性相對較低，EC50分別為84.96和531.21 μg/mL。

3 討論

目前已報道的鏈格孢屬真菌有500多種，其中95%寄生在不同的植物上，具有寄主范圍廣、傳播途徑多、侵染力強和危害程度大等特點（曾向萍等，2018）。該屬真菌主要侵染植物葉片引起經(jīng)濟(jì)作物、糧食作物和果蔬作物等發(fā)生黑斑病和葉斑病，如多種蔬菜葉斑?。ㄍ醅摤摚?016;吳瓊等，2018）、月季黑斑?。T寶珍和李培謙，2019）、玉米小斑?。沙傻?，2019）、葡萄葉斑?。ㄍ醪氏嫉龋?019）、菊花黑斑病（葉琪明等，2019）、三葉木通葉斑?。◤堝P等，2019）、茶樹葉斑病（周園園等，2019）、櫻桃葉斑?。▌⑶蔚?，2020）和獼猴桃褐斑?。▍稳锘ǖ龋?020）等。此外，Woody和Chu（1992）研究發(fā)現(xiàn)，鏈格孢屬真菌能產(chǎn)生10多種不同的真菌毒素，如鏈格孢酚、鏈格吡喃酮和鏈格孢酸等，對哺乳動物和人類均有害。因此，學(xué)界對鏈格孢屬真菌病害的研究十分重視，由其引發(fā)的新病害也時有報道，如Vicent等（2016）首次報道在西班牙由鏈格孢屬真菌引起的石榴黑心病。本研究對貴州省施秉縣太子參葉斑病的病原物進(jìn)行了分離純化、致病性測定、形態(tài)及ITS鑒定等工作，基于單基因并不能明確鏈格孢的具體分類地位，參考Woudenberg等（2015）的研究結(jié)果，SSU、LSU、ITS、gapdh、rpb2、tef1、Alt a 1、endoPG和OPA10-2等9種基因片段可用于區(qū)分鏈格孢屬內(nèi)不同種，因此本研究選用LSU、TEF1、SSU、GAPDH和RPB2等5個引物序列進(jìn)行PCR擴增，通過多基因系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹分析表明菌株TZSYB1與細(xì)極鏈格孢同源性最高，與前人報道的太子參葉斑病病原菌有所不同，但在田間采集病害樣本時發(fā)現(xiàn)，該病原菌引起的太子參葉斑病的發(fā)病特征與已報道的由其他病原引起的太子參葉斑病發(fā)病癥狀相似，可能是由不同病原菌引發(fā)的同一種病害，推測可能是不同病原菌在不同種植地區(qū)、不同環(huán)境因素及種植條件下的適應(yīng)情況不一樣，使得各地區(qū)的優(yōu)勢菌株不同。

關(guān)于細(xì)極鏈格孢引起病害的防治，梅桂蘭（2017）研究發(fā)現(xiàn)，多抗霉素1500倍液和43%戊唑醇5000倍液對棗黑斑病病原菌細(xì)極鏈格孢均有較好的防治效果，田間防效分別為91.2%和89.5%;張錚等（2019）研究結(jié)果表明，戊唑醇、代森錳鋅和異菌脲可用于防治由細(xì)極鏈格孢引發(fā)的三葉木通葉斑病;范文忠等（2020）研究表明，10%苯醚甲環(huán)唑可濕性粉劑、30%氟菌唑可濕性粉劑和125 g/L氟環(huán)唑懸浮劑對水蠟葉斑病病原菌菌絲的敏感性較高，EC50分別為14.36、37.91和29.86 μg/mL。本試驗在前人研究的基礎(chǔ)上選擇30%苯甲丙環(huán)唑乳油、60%唑醚代森聯(lián)水分散粒劑、37%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑和拜爾公司推出的3種新型高效殺菌劑35%氟菌·戊唑醇懸浮劑、43%氟菌·肟菌酯懸浮劑和75%肟菌·戊唑醇水分散粒劑，探究其對鏈格孢菌的室內(nèi)抑菌效果，結(jié)果表明6種藥劑對細(xì)極鏈格孢的菌絲生長均有抑制作用，各藥劑最佳稀釋倍數(shù)下抑制率均在60.00%以上，其中30%苯甲丙環(huán)唑乳油6000倍液的抑制率最高，達(dá)80.38%;室內(nèi)毒力測定結(jié)果表明，病原菌對30%苯甲丙環(huán)唑乳油及37%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑的敏感性最高，EC50分別為10.81和21.31 μg/mL，其次為43%氟菌·肟菌酯懸浮劑、35%氟菌·戊唑醇懸浮劑和75%肟菌·戊唑醇水分散粒劑，因此，可選用30%苯甲丙環(huán)唑乳油、37%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑和43%氟菌·肟菌酯懸浮劑進(jìn)一步開展田間防治試驗。近幾年來，太子參葉斑病發(fā)病率在貴州省中藥材種植區(qū)呈逐年增加趨勢，經(jīng)田間調(diào)查總結(jié)可能的原因：一是由于種植年限的增加，使得病原物長期積累，病害極易發(fā)生;二是田間病株未及時清除，導(dǎo)致大面積傳染發(fā)病;三是由于高溫高濕天氣適宜病原菌的生長，進(jìn)而加重了病害的發(fā)生。因此，在防治過程中應(yīng)將農(nóng)業(yè)防治與藥劑防治相結(jié)合，適時輪作、及時清理田間病株、輪換用藥等手段均能有效降低葉斑病的發(fā)生率。

4 結(jié)論

引起貴州省施秉縣太子參葉斑病的病原菌為細(xì)極鏈格孢，可選用30%苯甲丙環(huán)唑乳油、37%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑和43%氟菌·肟菌酯懸浮劑進(jìn)一步開展田間防治試驗。

參考文獻(xiàn)：

陳婷，黃斌，楊超，舒童，周斌，田芳. 2019. 太子參現(xiàn)代研究進(jìn)展[J]. 山東化工，48（16）：69-70. [Chen T，Huang B，Yang C，Shu T，Zhou B，Tian F. 2019. Research status of Pseudostellariae radix[J]. Shandong Chemical Industry，48（16）： 69-70.] doi：10.19319/j.cnki.issn.1008-021x. 2019.16.030.

范文忠，王振，顧園園，姜仁婧，孫達(dá)，黎浩然. 2020. 水蠟葉斑病病原菌鑒定及對藥劑的敏感性[J]. 農(nóng)藥，59（1）： 60-64. [Fan W Z，Wang Z，Gu Y Y，Jiang R J，Sun D，Li H R. 2020. Pathogen identification of Ligustrum obtusifo-lium leaf spot and fungicides susceptibilityI[J]. Agroche-micals，59（1）：60-64.] doi：10.16820/j.cnki.1006-0413. 2020.01.017.

方中達(dá). 2007. 植病研究方法[M]. 第3版. 北京： 中國農(nóng)業(yè)出版社. [Fang Z D. 2007. Research methods of plant disea-ses[M]. The 3rd Edition. Beijing：China Agriculture Press.]

馮寶珍，李培謙. 2019. 月季黑斑病病原菌鑒定及室內(nèi)藥劑初步篩選[J]. 植物保護(hù)學(xué)報，46（5）： 1147-1154. [Feng B Z，Li P Q. 2019. Identification of the pathogen causing black spot of Chinese rose and fungicide screening for the disease control[J]. Acta Phytophylacica Sinica，46（5）：1147-1154.] doi：10.13802/j.cnki.zwbhxb.2019.2018 149.

康傳志，周濤，江維克，郭蘭萍，張小波，肖承鴻，趙丹. 2016. 貴州栽培太子參質(zhì)量評價及生長區(qū)劃[J]. 中國中藥雜志，41（13）： 2391-2396. [Kang C Z，Zhou T，Jiang W K，Guo L P，Zhang X B，Xiao C H，Zhao D. 2016. Quality evaluation and growing regionalization of Pseudostellaria heterophylla in Guizhou[J]. China Journal of Chinese Materia Medica，41（13）：2391-2396.] doi：10.4268/cjcmm20 161304.

李樹江，周雪林，楊友聯(lián). 2018. 太子參葉斑病病原菌鑒定及防治藥劑篩選[J]. 植物保護(hù)，44（3）：182-185. [Li S J，Zhou X L，Yang Y L. 2018. Pathogen identification of leaf spot on Pseudostellaria heterophylla and screening of fungicides for its control[J]. Plant Protection，44（3）：182-185.] doi：10.16688/j.zwbh.2017284.

劉俏，寧楠楠，馬永強，郭青云. 2020. 青海省櫻桃葉斑病病原菌的分離與鑒定[J]. 植物保護(hù)，46（2）：48-55. [Liu Q，Ning N N，Ma Y Q，Guo Q Y. 2020. Isolation and identification of the pathogen causing leaf spot on cherry in Qinghai Province[J]. Plant Protection，46（2）：48-55.] doi： 10.16688/j.zwbh.2019567.

龍光泉，馬登慧，夏忠敏，邵昌余. 2013. 施秉縣太子參主要病蟲害的發(fā)生規(guī)律與防治對策[J]. 耕作與栽培，（2）：46. [Long G Q，Ma D H，Xia Z M，Shao C Y. 2013.Pseudostellaria heterophylla main disease occurrence regulation and control countermeasure in Shibing County[J]. Culture with Planting，（2）：46.] doi：10.13605/j.cnki.52-1065/ s.2013.02.010.

呂蕊花，林樅，白崇旭，方亞妮，馮昭，史琳娜，呂瑞華，張喜榮. 2020. 獼猴桃貯藏中常見病原菌的分離鑒定及抗菌中藥的篩選[J]. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，49（10）：78-84. [Lü R H，Lin C，Bai C X，F(xiàn)ang Y N，F(xiàn)eng Z，Shi L N，Lü R H，Zhang X R. 2020. Isolation，identification of common fungi during kiwifruit storage and Screening of antifungal chinese medicine[J]. Journal of Henan Agricultural Scien-ces，49（10）：78-84.] doi：10.15933/j.cnki.1004-3268.2020. 10.011.

梅桂蘭. 2017. 阿克蘇棗黑斑病的病原分析與藥劑防治效果研究[J]. 湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，56（10）： 1863-1865. [Mei G L. 2017. Pathogen analysis and chemical control effects research of Aksu Ziziphus jujuba black spot disease[J]. Hubei Agricultural Science，56（10）：1863-1865.] doi：10. 14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.10.016.

蒙成，梁慶平，黃艷花，吳地，蔣益敏，吳烈. 2019. 玉米小斑病抗病鑒定接種體培養(yǎng)技術(shù)探討[J]. 南方農(nóng)業(yè)學(xué)報，[Meng C，Liang Q P，Huang Y H，Wu D，Jiang Y M，Wu L. 2019. Inoculation culture technique for identification of resistance to southern corn leaf blight[J]. Journal of Sou-thern Agriculture，50（5）：1001-1006.] doi：10.3969/j.issn. 2095-1191.2019.05.12.

任靜，曾桂萍，趙致，李忠. 2016. 生于蓼科植物上的小帽殼孢屬一新種[J]. 菌物學(xué)報，35（9）：1056-1060. [Ren J，Zeng G P，Zhao Z，Li Z. 2016. A new species of Pilidiella on the polygonaceae[J]. Mycosystema，35（9）： 1056-1060.] doi：10.13346/j.mycosystema.160054.

邵昌余，李大慶，馬登慧. 2016.太子參葉斑病防治藥劑篩選試驗初探[J]. 耕作與栽培，（4）：29-30. [Shao C Y，Li D Q，Ma D H. 2016. Preliminary study on screening pesticide of prevention and control of Radix pseudostellariae leaf spot[J]. Tillage and Cultivation，（4）：29-30.] doi：10. 13605/j.cnki.52-1065/s.2016.04.012.

沈祥春，彭佼，喻斌，段金廒，錢之玉. 2008. 太子參對急性心肌梗死心力衰竭大鼠心肌重構(gòu)的作用[J]. 貴陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報，33（6）：600-603. [Shen X C，Peng J，Yu B，Duan J A，Qian Z Y. 2008. Effects of Radix pseudostellariae on cardiac remodeling in rats with chronic heart failure induced by acute cardiac infarction and its mechanism[J]. Journal of Guiyang Medical College，33（6）：600-603.] doi：10.3969/j.issn.1000-2707.2008.06.009.

宋莉莎，曾桂萍，任靜，司世飛，趙致，李忠. 2019. 貴州省白及葉褐斑病病原菌鑒定及其生物學(xué)特性[J]. 植物保護(hù)學(xué)報，46（2）： 337-344. [Song L S，Zeng G P，Ren J，Si S F，Zhao Z，Li Z. 2019. Identification and biological charac-teristics of the pathogen causing leaf brown spot of Chinese ground orchid Bletilla striata in Guizhou Province[J]. Journal of Plant Protection，46（2）： 337-344.] doi：10.13802/j.cnki.zwbhxb.2019.2017201.

宋葉，林東，梅全喜，楊德貴. 2019. 太子參化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J]. 中國藥師，22（8）： 1506-1510. [Song Y，Lin D，Mei Q X，Yang D G. 2019. Study advances in chemical constituents and pharmacological activities of Radix pseudostellariae[J]. Chinese Pharmacist，22（8）： 1506-1510.] doi：10.3969/j.issn.1008-049X.2019.08.034.

王彩霞，李興紅，魏艷敏，燕繼曄，王勇，張瑋. 2019. 引起葡萄葉斑病的鏈格孢種類的初步鑒定[J]. 植物保護(hù)學(xué)報，46（1）： 175-183. [Wang C X，Li X H，Wei Y M，Yan J H，Wang Y，Zhang W. 2019. Identification of Alternaria species causing leaf spots in grapes[J]. Acta Phytophylacica Sinica，46（1）：175-183.] doi：10.13802/j.cnki.zwbhxb. 2019.2017166.

王夢奇，白慶榮，王大川，楊麗娜. 2019. 吉林省大豆莖點霉葉斑病病原鑒定[J]. 大豆科學(xué)，38（3）：428-433. [Wang M Q，Bai Q R，Wang D C，Yang L N. 2019. Pathogen identification of soybean leaf spot caused by Boeremia exi-gua var.exigua in Jilin Province[J]. Soybean Science，38（3）：428-433.] doi：10.11861/j.issn.1000-9841.2019.03. 0428.

王瑩瑩. 2016. 中國蔬菜鏈格孢葉斑病病原菌鑒定及多樣性研究[D]. 沈陽：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué). [Wang Y Y. 2016. Identification and variety of leaf spot caused by Alternaria on vegetables in China[D]. Shenyang Agricultural University.]

王宗華，唐景章，吳石金，巫靖輝，張居念，王寶華. 1997. 福建柘榮太子參發(fā)生一種嚴(yán)重的新病害[J]. 植物病理學(xué)報，（2）：81. [Wang Z H，Tang J Z，Wu S J，Wu J H，Zhang J N，Wang B H. 1997. A new disease of Pseudostellaria heterophylla in Zherong，F(xiàn)ujian[J]. Acta Phytopathologica Sinica，（2）：81.]

溫學(xué)森，霍德蘭，趙華英. 2003. 太子參常見病害及其防治[J]. 中藥材，26（4）： 243-245. [Wen X S，Huo D L，Zhao H Y. 2003. Common diseases of Pseudostellaria heterophylla and the control[J]. Journal of Chinese Medicinal Materials，26（4）： 243-245.] doi：10.13863/j.issn1001-4454.2003.04.004.

吳瓊，梁巧蘭，張娜. 2018. 番茄主要病害病原菌培養(yǎng)條件及室內(nèi)藥劑篩選[J]. 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，53（5）：79-86. [Wu Q，Liang Q L，Zhang N. 2018. Cultural conditions of pathogens of main tomato diseases and fungicides screening in laboratory[J]. Journal of Gansu Agricultural University，53（5）：79-86.] doi：10.13432/j.cnki.jgsau.2018. 05.011.

肖培根，李大鵬，楊世林. 2002. 新編中藥志（第一卷）[M]. 北京： 化學(xué)工業(yè)出版社：191-193. [Xiao P G，Li D P，Yang S L. 2002. A new edition of the annals of traditional Chinese medicine（Volume I）[M]. Beijing： Chemical Industry Press：191-193.]

徐宏輝. 2007. 太子參葉斑病發(fā)生規(guī)律及防治措施[J]. 植物醫(yī)生，20（2）： 27-28. [Xu H H. 2007. Occurrence and control of leaf spot of Pseudostellaria heterophylla[J]. Plant Doctor，20（2）： 27-28.] doi：10.3969/j.issn.1007-1067.2007. 02.017.

葉琪明，郭方其，吳超，丁曉瑜，徐楊. 2019. 浙江省菊花病害種類及危害特征與分布調(diào)查[J]. 江西農(nóng)業(yè)學(xué)報，31（3）：82-86. [Ye Q M，Guo F Q，Wu C，Ding X Y，Xu Y. 2019. Survey on kinds，harm characteristics and distribution of chrysanthemum（Chrysanthemum moriforlium） diseases in Zhejiang[J]. Acta Agriculturae Jiangxi，31（3）：82-86.] doi： 10.19386/j.cnki.jxnyxb.2019.03.15.

陰華海. 2015. 太子參病蟲害發(fā)生特點及防治措施[J]. 北京農(nóng)業(yè)，（26）： 52-53.[Yin H H. 2015. Occurrence characteristics and control measures of diseases and insect pests of Pseudostellaria heterophylla[J]. Beijing Agriculture，（26）：52-53.] doi：10.3969/j.issn.1000-6966.2015.26.026.

袁小坦. 2006. 太子參兩大病害的綜合防治方法[J]. 福建農(nóng)業(yè)，（2）：24. [Yuan X T. 2006. Integrated control of two major diseases of Pseudostellaria heterophylla[J]. Fujian Agriculture，（2）： 24.]

曾向萍，符美英，何舒，吳鳳芝，王三勇，陳慧，王會芳. 2018. 大麻葉斑病病原菌鑒定[J]. 分子植物育種，16（21）：7094-7098. [Zeng X P，F(xiàn)u M Y，He S，Wu F Z，Wang S Y，Chen H，Wang H F. 2018. Identification of the pathogen causing leaf spot disease on Cannabis sativa[J]. Molecular Plant Breeding，16（21）：7094-7098.] doi：10.13271/j.mpb.016.007094.

張錚，劉昱鋒，楊晴，張佳文. 2019. 三葉木通葉斑病防治藥劑的室內(nèi)篩選[J]. 陜西師范大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），47（3）：91-94. [Zhang Z，Liu Y F，Yang Q，Zhang J W. 2019. Laboratory screening of drug for Akebia trifoliate leaf spot prevention[J]. Journal of Shaanxi Normal University（Natural Science Edition），47（3）：91-94.] doi：10. 15983/j.cnki.jsnu.2019.03.333.

周游. 2015. 獼猴桃軟腐病病原學(xué)研究[D]. 成都：四川農(nóng)業(yè)大學(xué). [Zhou Y. 2015. Study on etiology of kiwifruit soft rot disease[D]. Chengdu： Sichuan Agricultural University.]

周園園，吳治然，貢長怡，韋朝領(lǐng)，張立新. 2019. 茶樹鏈格孢葉斑病的病原鑒定[J]. 植物保護(hù)，45（6）： 145-148. [Zhou Y Y，Wu Z R，Gong C Y，Wei C L，Zhang L X. 2019. Identification of Alternaria alternata causing leaf spot disease of Camellia sinensis[J]. Plant Protection，45（6）： 145-148.] doi：10.16688/j.zwbh.2018458.

Hu D J，Shakerian F，Zhao J，Li S P. 2019. Chemistry，pharmacology and analysis of Pseudostellaria heterophylla： A mini-review[J]. Chinese Medicine，14. doi： 10.1186/s13020-019-0243-z.

Vicent A，Mira J L，Bartual J，Beltrán V，Taberner V，Palou L. 2016. First Report of black heart of Pomegranate caused by Alternaria alternata in Spain[J]. Plant Disease，100（9）：1952. doi： 10.1094/PDIS-03-16-0265-PDN.

Wang Z，Liao S G ?He Y，Li J ，Zhong R F，He X，Liu Y，Xiao T T，Lan Y Y，Long Q D，Wang Y L. 2013. Protective effects of fractions from Pseudostellaria heterophylla against cobalt chloride-induced hypoxic injury in H9c2 cell[J]. Journal of Ethnopharmacology，147（2）：540-545. doi： 10.1016/j.jep.2013.03.053.

Woody M A，Chu F S. 1992. Toxicology of Alternaria mycotoxinsin//Chelkowsky J，ViscontiA. Alternaria biology，plant disea and metabolites[M]. Amsterdam： Elsevier Science Publishers：409-434.

Woudenberg J H C，Seidl M F Groenewald J Z，de Vries M，Stielow J B，Thomma B P H J，Crous P W. 2015. Alternaria section Alternaria： Species，formae speciales or pathotypes？ [J]. Studies in Mycology，82：1-21.

（責(zé)任編輯 麻小燕）

收稿日期：2020-09-25

基金項目：貴州省科技支撐計劃項目（黔科合支撐〔2017〕2828，黔科合支撐〔2020〕4Y096）

通訊作者：李忠（1971-），https：//orcid.org/0000-0002-9072-953，博士，教授，主要從事植物病害安全防治技術(shù)研究工作，E-mail：54618046@qq.com

第一作者：何潔（1995-），https：//orcid.org/0000-0002-1703-689X，研究方向為植物病理學(xué)，E-mail：2766724200@qq.com