韓海燕 ，蒲道俊 ，吳紅洋 ，余春梅 ，范能全 △

（1. 重慶市食品藥品檢驗檢測研究院，重慶 401121； 2. 西南藥業(yè)股份有限公司，重慶 400038）

一次性使用輸液器與藥液直接注入人體，在給患者治療的同時也存在風(fēng)險，輸液器材質(zhì)中的有害物質(zhì)可能遷移到藥液中，對人體產(chǎn)生不良反應(yīng)［1－4］。輸液器合成加工過程中需加入抗氧劑，以抑制或延緩氧化過程［5－7］，這些抗氧劑超出一定限量將對人體肝、脾、肺等器官造成傷害［8］。部分抗氧劑易發(fā)生降解，產(chǎn)物仍有較大毒性［9］。近年來，報道抗氧劑與藥品包裝材料相容性的研究很多［10－18］，但與輸液器的相容性研究極少。本研究中以鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液模擬臨床輸注，采用高效液相色譜法（HPLC）法測定輸液器聚氯乙烯（PVC）和熱塑性彈性體（TPE）中7 種抗氧劑的遷移量?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1260Ⅱ型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；KQ－500DE 型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，功率為500 W，頻率為40 kHz）；VG3 S25型旋渦混勻器（德國IKA 公司）；一次性輸液器［A 公司，PVC（批號為 20190304），TPE（批號為 20190620）］。

1.2 試藥

抗氧劑 1310 對照品（批號為 1－TTK－115－1，含量為 97% ），抗氧劑 1010 對照品（批號為 5－LXM－44－1，含量為98%），抗氧劑1076 對照品（批號為5－LXM －45－1，含量為 97% ），均購自 Toronto Research Chemicals；抗氧劑 2，4－二叔丁基苯酚（2，4－DTBP）對照品（批號為 G880823，含量為 99.5% ），抗氧劑 2，6 －二叔丁基對甲酚（BHT）對照品（批號為G133110，含量為 99.52% ），抗氧劑 168 對照品（批號為 172881，含量為 98.5% ），均購自 Dr.Ehrenstorfer；抗氧劑 330 對照品（European Directorate for the Quality of Medicines，批號為P2155010，含量為 100% ）；乙醇（色譜純，F(xiàn)isher Chemical，批號為170063）；甲醇（色譜純，河北百靈威超精細材料有限公司，批號為LCC0S96）；冰醋酸（分析純，重慶川東化工＜集團＞有限公司，批號為20200601）；鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液（B 公司，規(guī)格為每支 0.4 g ∶250 mL，批號分別為 1811081，1811101，1811121）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：Agilent 5 TC －C18（2）柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相：0.1%乙酸（A）－ 甲醇（B）溶液，梯度洗脫（程序見表 1）；流速：1.0 mL ／min；檢測器：二極管陣列檢測器（DAD）；檢測波長：228 nm；柱溫：35 ℃；進樣量：20 μL?？瞻兹軇ㄒ掖迹?、對照品溶液、供試品溶液、供試品加標溶液在此色譜條件下的色譜圖見圖1。結(jié)果空白溶劑色譜圖中未出現(xiàn)對照品溶液色譜圖中目標物質(zhì)的峰，供試品加標溶液色譜圖中目標物質(zhì)的峰與其他峰無干擾。

圖1 系統(tǒng)適用性試驗高效液相色譜圖1.antioxidant 1310 2. antioxidant 2，4 － DTBP 3.antioxidant BHT 4. antioxidant 1010 5.antioxidant 330 6.antioxidant 1076 7.antioxidant 168A.Blank solvent B.Reference solution C. Test solution D.Test spiked sample solutionFig.1 HPLC chromatograms of the system suitability test

表1 流動相梯度洗脫程序（%）Tab.1 The elution program of the mobile phase（%）

2.2 溶液制備

取樣品，模擬輸液過程，量取通過輸液器的樣品5 mL，置分液漏斗中，加二氯甲烷5 mL 萃取，收集二氯甲烷層，再加二氯甲烷5 mL 重復(fù)萃取1 次，合并2 次萃取的二氯甲烷層，用氮氣吹至干，用乙醇定容至1 mL，渦旋振蕩 1 min，0.45 μm 濾膜濾過，上機測試。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察與檢測限確定：取抗氧劑1310，1010，1076，330，168，BHT，2，4 － DTBP 對照品各50 mg，精密稱定，置同一100 mL 容量瓶中，加乙醇超聲溶解并定容，搖勻，作為對照品貯備液；逐級稀釋得各目標物質(zhì)質(zhì)量濃度分別為 0.5，1.0，2.0，5.0，10.0，15.0，20.0 μg ／mL 的標準工作溶液；按 2.1 項下色譜條件進樣測定，以峰面積（Y）為縱坐標、標準工作溶液質(zhì)量濃度（X，μg／mL）為橫坐標進行線性回歸。線性回歸方程見表2。將標準工作溶液用乙醇逐級稀釋，并進樣測定，以信噪比（ S／ N）為3 時的質(zhì)量濃度為各目標物質(zhì)的檢測限。結(jié)果見表2。

表2 方法學(xué)考察結(jié)果Tab.2 Results of the methodological investigation

精密度試驗：精密吸取上述對照品貯備液適量，按2.1 項下色譜條件進樣測定6 次，記錄色譜圖。結(jié)果見表2，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：精密吸取上述對照品溶液適量，分別放置 0，2，6，12，24，48 h 時按 2.1 項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結(jié)果見表2，表明對照品溶液放置48 h 穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗：按2.2 項下方法制備供試品溶液，加入質(zhì)量濃度為200μg／mL 的標準工作溶液50μL，按 2.1 項下色譜條件平行測定6 次。結(jié)果見表2，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗：按2.2 項下方法制備供試品溶液，分別加入質(zhì)量濃度為200 μg／mL 的標準工作溶液10，50，100 μL，得質(zhì)量濃度分別為 2，5，10 μg ／ mL 的溶液3 份，并進樣測定，計算回收率。結(jié)果見表2。

耐用性試驗：微調(diào)色譜條件中流動相的流速和柱溫，結(jié)果改變參數(shù)后，抗氧劑 1310，330，1010，1076，168，BHT，2，4－DTBP 均能良好分離，表明方法耐用性良好。

2.4 材料與遷移試驗

按風(fēng)險從嚴控制的研究思路，選擇較劇烈的條件作為考察條件，設(shè)計遷移試驗。將鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液于 40 ℃條件下放置 0，60，90，120 min，模擬臨床使用的滴注方法，一般藥物靜脈滴注的速率為30 ～60 滴／分，1 mL 液體滴數(shù)一般為15 滴，輸液時間（分）＝［液體總量（mL）× 15 滴 ］÷ 每分鐘滴數(shù)［19］，計算得本規(guī)格品種的靜脈滴注時間為 62.5 ～ 125.0 min。本試驗控制滴注速率為40 滴／分，制得樣品溶液。按2.2 項下方法配制供試品溶液，按2.1 項下色譜條件進樣測定。結(jié)果3 批（批號分別為 1811081，1811101，1811121）樣品在不同材質(zhì)（PVC 和 TPE）輸液器中，抗氧劑 2，4 － DTBP和 BHT 在 0，60，90，120 min 時的遷移量均未超過0.04 μg ／mL，抗氧劑 1310，330，1010，1076，168 均未檢測到。7 種抗氧劑分析閾值與定量限見表3。

表3 7 種抗氧劑分析閾值與方法定量限檢測結(jié)果Tab.3 Analytical threshold and limit of quantitation of seven antioxidants

3 討論

3.1 溶劑選擇

抗氧劑 1310，BHT，2，4－DTBP 易溶于極性溶劑（甲醇、乙醇）中，抗氧劑 1010，330，1076，168 易溶于中等極性或非極性溶劑中。綜合考慮，本研究中7 種物質(zhì)流動相的極性，通過試驗進一步確定7 種物質(zhì)在乙醇中均有一定溶解度，且無目標物質(zhì)的干擾峰，故最終選擇乙醇為溶劑。

3.2 流動相選擇及梯度洗脫程序優(yōu)化

曾以四氫呋喃－乙腈為流動相，出峰較快，效率高，但考慮到溶劑揮發(fā)對人體健康有影響，故選用甲醇水溶液為流動相，發(fā)現(xiàn)抗氧劑1310 的峰形拖尾嚴重，其他目標物質(zhì)的峰形良好；分析拖尾分子的結(jié)構(gòu)，改變流動相pH 值，將水改為0.1%乙酸溶液后，抗氧劑1310 的峰形不再拖尾，其他目標物質(zhì)峰形也未受影響?？紤]到藥品中輔料和主藥峰的影響，將0.1%乙酸的比例提高，使目標峰后移，排除干擾。根據(jù)各抗氧劑的極性，進一步調(diào)節(jié)流動相梯度，獲得最佳分離度。最終確定為2.1 項下的流動相及梯度洗脫程序。

3.3 檢測波長選擇

比較 DAD 檢測器的全波段吸收值，分別選擇276 nm 和228 nm 作為檢測波長。綜合比較7 種抗氧劑的檢測限、定量限及干擾峰影響情況，選擇靈敏度高、無干擾的檢測波長228 nm。

3.4 遷移測試結(jié)果及安全性評價

取鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液適量，于30 ℃條件下放置 0，60，90，120 min，并模擬臨床使用的滴注方法，結(jié)果藥品與輸液器接觸后發(fā)生了部分遷移，小于定量限安全閾值的有抗氧劑2，4－DTBP 和 BHT，其他5 種抗氧劑均未檢出。不會給藥品帶來安全風(fēng)險。

3.5 方法評價

該方法操作簡便，結(jié)果準確，適用性較強，靈敏度高，穩(wěn)定性和重復(fù)性均較好，可用于同時測定輸液器抗氧劑在注射液中的遷移量，為進一步評價其安全性提供參考。