張文慧，肖依文,2，梁偉中，汪 涯，高波良，朱 篤,2*

1江西科技師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 江西省生物加工過程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南昌 330013；2江西師范大學(xué) 江西省亞熱帶植物資源保護(hù)與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南昌 330022

植物內(nèi)生菌(edophytes)是指一類生活在健康植物組織體內(nèi)但不引起植物感染病害的微生物，其不僅能促進(jìn)植物的耐鹽、耐旱、耐寒、抗蟲等抗逆性，而且蘊(yùn)含豐富的次生代謝產(chǎn)物合成基因簇，已成為結(jié)構(gòu)多樣性天然產(chǎn)物篩選的重要來源[1,2]。東鄉(xiāng)野生稻(OryzarufipogonGriff.)是僅殘存于江西省東鄉(xiāng)縣、世界分布最北的野生稻，由于其長期處于野生狀態(tài)，經(jīng)歷了自然選擇，具有良好的抗逆性、抗病蟲害、耐寒、耐旱、高產(chǎn)等優(yōu)良性狀[3,4]。本課題組前期對東鄉(xiāng)野生稻內(nèi)生真菌多樣性進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，發(fā)現(xiàn)其不僅蘊(yùn)含豐富的植物內(nèi)生真菌，而且PKS基因檢測和植物病原抑制活性篩選結(jié)果顯示其中含有較豐富的活性次級代謝產(chǎn)物，十分有必要進(jìn)一步開展研究[5]。

本研究以前期從東鄉(xiāng)野生稻中分離得到的一株內(nèi)生球毛殼菌S108(ChaetomiumglobosumS108)為對象，對其進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，初步發(fā)現(xiàn)其發(fā)酵液對腫瘤細(xì)胞具有一定的抑制活性。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，球毛殼菌素(chaetoglobosin)是球毛殼菌抑制腫瘤細(xì)胞的主要物質(zhì)[6]。為了進(jìn)一步探究S108發(fā)酵液中具腫瘤抑制活性的化合物，我們對其次生代謝產(chǎn)物進(jìn)行了分離純化，對分離所得的化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，并進(jìn)行黑色素瘤抑制活性試驗(yàn)，以期發(fā)現(xiàn)具有潛在活性的化合物，這對于豐富球毛殼菌次生代謝產(chǎn)物及其功能多樣性具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 材料、儀器與試劑

1.1.1 菌株材料

內(nèi)生菌S108分離樣品采集自江西省東鄉(xiāng)縣崗上積鎮(zhèn)(N28°14′，E116°36′)野外健康的東鄉(xiāng)野生稻的莖部，現(xiàn)保存于江西省生物加工過程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。ITS-rRNA序列比對結(jié)果顯示，該菌株與球毛殼菌C.globosum序列同源性高達(dá)99%(accession number：KF558876)，因而將其歸屬為C.globosum。

1.1.2 培養(yǎng)基

土豆葡萄糖瓊脂(PDA)培養(yǎng)基(g/L)：200 g土豆、葡萄糖20 g、瓊脂20 g，121 ℃滅菌25 min。土豆葡萄糖肉湯(PDB)培養(yǎng)基(g/L)：200 g土豆，葡萄糖20 g，121 ℃滅菌25 min。大米培養(yǎng)基：大米80 g，蒸餾水120 mL，121 ℃滅菌25 min。

1.1.3 主要儀器與試劑

Bruker AV-400和AV-600核磁共振波譜儀(德國Bruker公司)；AB5600+QTOF高分辨液質(zhì)聯(lián)用儀(美國SCIEX公司)；PURIFLASH450中壓層析系統(tǒng)(法國Interchim公司)；Waters 1525 型超高效液相(美國Waters公司)；Waters 2489 型半制備液相(美國Waters公司)；Spectramax M2酶標(biāo)儀(美國分子儀器公司)；分析型色譜柱ODS-C18(250 mm×4.6 mm，日本YMC公司)；制備型色譜柱ODS-C18(250 mm×10 mm，日本YMC公司)；正相色譜硅膠(青島海洋化工廠)；葡聚糖凝膠Sephadex LH-20(美國Amersham公司)；色譜級純甲醇、乙腈(德國Merck公司)；分析純甲醇、乙酸乙酯、乙腈、石油醚、二氯甲烷、無水乙醇、75%乙醇(天津市永大化學(xué)試劑開發(fā)中心)；色譜純甲醇、乙腈(德國Merck公司)；小鼠黑色素瘤細(xì)胞B16(武漢普諾賽生命科技有限公司)；威羅菲尼(vemurafenib，上海阿拉丁生化科技股份有限公司)。

1.2 真菌活化及培養(yǎng)

將菌株S108接種至PDA培養(yǎng)基中培養(yǎng)4天使其活化(28 ℃)，待菌落長滿平板后，挑取一小塊培養(yǎng)基接入到含有100 mL種子培養(yǎng)基(PDB)的250 mL三角瓶中培養(yǎng)5天后得到種子培養(yǎng)液(28 ℃，160 rpm)，把種子培養(yǎng)液接種到40瓶大米發(fā)酵培養(yǎng)基中，每瓶接種量為5 mL，靜置培養(yǎng)40天(28 ℃)。

1.3 提取與分離

菌株S108培養(yǎng)40天后，收集發(fā)酵產(chǎn)物加入80%乙醇超聲波輔助提取4次，收集提取液將其減壓濃縮至3 L便于下一步的提取，再用乙酸乙酯萃取4次后收集萃取液減壓濃縮獲得5.2 g乙酸乙酯相提取液浸膏。浸膏使用200～300正相硅膠進(jìn)行分離，流動相為石油醚∶乙酸乙酯(5∶1→1∶1)，TLC指示合并得到組分A～E。B組分(石油醚∶乙酸乙酯=4∶1)用正相硅膠柱(石油醚∶乙酸乙酯=30∶1→2∶1)洗脫得到亞組份B1～B4，其中B2組分用制備液相(乙腈∶水=95∶5)純化得到化合物1(2 mg，tR=10 min)，B4組分用制備液相(乙腈∶水=8∶2)純化得到化合物2(1.2 mg，tR=14 min)。組分C(石油醚∶乙酸乙酯=3∶1)經(jīng)正相硅膠柱洗脫(石油醚∶乙酸乙酯=10∶1→6∶1)得到亞組分C1～C3，C3組分經(jīng)制備液相(乙腈∶水=6∶1)純化分別得到化合物3(1.8 mg，tR=7 min)，化合物4(1.2 mg，tR=18 min)和化合物5(2 mg，tR=22 mim)。組分D(石油醚∶乙酸乙酯=1∶1)經(jīng)正相硅膠柱洗脫(石油醚∶乙酸乙酯=5∶1→4∶1)得到亞組分D1～D5，D2組分用制備液相(乙腈∶水=3∶7)純化得到化合物6(1.8 mg，tR=8 min)，D5組分用制備液相(乙腈∶水=3∶7)純化得到化合物7(2.2 mg，tR=13 min)。

1.4 黑色素瘤B16細(xì)胞活力試驗(yàn)

黑色素瘤細(xì)胞抑制活性實(shí)驗(yàn)參考文獻(xiàn)方法[7]。首先，將對數(shù)生長期的小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞按照密度為4×104/mL的細(xì)胞懸液均勻地接種到96孔板中，100 μL/孔，5%CO2、37 ℃孵育24 h使細(xì)胞穩(wěn)定生長。待測化合物1～7用DMSO稀釋至1 mg/mL，后用含有10%胎牛血清(FBS)的培養(yǎng)基稀釋成不同的濃度(2.5、5、10 μM)后加入96孔板中，各濃度平行試驗(yàn)6次。陽性對照加入威羅菲尼，空白對照組加入培養(yǎng)基，同時再設(shè)置一組對照組加入0.2%的DMSO，在培養(yǎng)24 h和48 h后，再分別加入CCK-8試劑(10 μL/孔)，于培養(yǎng)箱中孵育4 h后，用酶標(biāo)儀于450 nm處測其OD值，根據(jù)公式：細(xì)胞抑制率=(對照組平均OD值-實(shí)驗(yàn)組平均OD值)/(對照組平均OD值-空白組平均OD值)×100%，計(jì)算細(xì)胞抑制率。

2 結(jié)果和分析

2.1 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1白色粉末,溶于甲醇；分子式為C24H38O4；HR-ESI-MS：m/z391.271 8 [M+H]+，m/z413.252 8 [M +Na]+；1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.73(2H，dd，J=7.4，2.4 Hz，H-3，H-6′′)，7.64(2H，m，H-4′′，H-5′′)，4.23(4H，d，J=4.2 Hz，2×OCH2)，1.73～1.68(1H，m，H-2，H-2′)，1.45(2H，dd，J=12.7，6.6 Hz，H-3)，1.42～1.38(2H，m，H-4，H-4′)，1.36(4H，d，J=3.9 Hz，H-5，H-5′，H-7，H-7′)，0.96～0.97(6H，m，H-6，H-6′，H-8，H-8′)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：67.7(C-1，C-1′)，38.8(C-2，C-2′)，30.2(C-3，C-3′)，28.8(C-4，C-4′)，22.7(C-5，C-5′)，10.0(C-6，C-6′)，23.6(C-7，C-7′)，13.0(C-8，C-8′)，132.2(C-1′′，C-2′′)，128.5(C-3′′，C-6′′)，131.0(C-4′′，C-5′′)，168.0(C=O)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道一致，故鑒定該化合物為dioctyl phthalate(結(jié)構(gòu)見圖1)。

圖1 化合物1～7的化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig.1 The chemical structures of compounds 1-7

化合物2淡黃油狀,溶于氯仿；分子式為C10H10O4；HR-ESI-MS：m/z195.065 8 [M+H]+，m/z217.046 6 [M+Na]+；1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：6.25(1H，d，J=2.2 Hz，H-3)，6.21～6.16(1H，m，H-9)，4.65(1H，ddd，J=9.5，6.2，5.4 Hz，H-5)，2.94～2.68(2H，m，H-8)，1.48(3H，d，J=6.3 Hz，H-10)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：170.3(C-1)，164.6(C-3)，164.0(C-5)，141.6(C-2)，106.9(C-4)，101.4(C-6)，100.4(C-7)，75.7(C-9)，34.6(C-8)，20.4(C-10)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道一致，故鑒定該化合物為6-hydroxymellein。

化合物3黃色粉末,溶于氯仿；分子式為C23H27O6Cl；HR-ESI-MS：m/z435.156 9 [M+H]+，m/z457.138 7 [M+Na]+；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：7.28(1H，s，H-1)，6.55(1H，s，H-4)，2.98(1H，d，J=10.0 Hz，H-8)，6.06(1H，d，J=15.5 Hz，H-9)，6.52(1H，dd，J=15.5，6.5 Hz，H-10)，2.26(1H，m，H-11)，1.43(2H，m，H-12)，0.91(3H，t，J=7.5 Hz，H-13)，1.40(3H，s，7-Me)，1.08(3H，d，J=6.5 Hz，11-Me)，3.08(1H，d，J=10.0 Hz，H-1′)，1.90(1H，dq，J=10.2，6.5 Hz，H-3′)，4.30(1H，dq，J=10.2，6.2 Hz，H-4′)，1.41(3H，d，J=6.2 Hz，H-5′)，1.13(3H，d，J=6.5 Hz，3′-Me)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：145.6(C-1)，157.7(C-3)，105.0(C-4)，140.5(C-4a)，110.1(C-5)，189.2(C-6)，84.0(C-7)，50.5(C-8)，114.3(8a)，120.2(C-9)，146.9(C-10)，38.9(C-11)，29.2(C-12)，11.7(C-13)，23.3(C-7-Me)，19.4(C-11-Me)，58.2(C-1′)，104.2(C-2′)，44.9(C-3′)，76.9(C-4′)，18.6(C-5′)，8.8(C-3′-Me)，170.5(C-1′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道一致，故鑒定該化合物為chaetomugilin D。

化合物4黃色粉末，溶于丙酮;分子式為C23H27O6Cl。HR-ESI-MS：m/z435.156 1 [M+H]+，m/z457.138 2 [M+Na]+；1H NMR(600 MHz，(CD3)2CO)δ：7.40(1H，s，H-1)，6.55(1H，s，H-4)，2.98(1H，d，J=10.1 Hz，H-8)，6.03(1H，d，J=15.8 Hz，H-9)，6.48(1H，dd，J=15.8，8.2 Hz，H-10)，2.26(1H，m，H-11)，1.42(2H，m，H-12)，0.90(3H，t，J=7.4 Hz，H-13)，1.49(3H，s，7-Me)，1.08(3H，d，J=6.7 Hz，11-Me)，3.03(1H，d，J=10.1 Hz，H-1′)，1.90(1H，dq，J=10.0，6.9 Hz，H-3′)，4.21(1H，dq，J=10.0，6.4 Hz，H-4′)，1.38(3H，d，J=6.4 Hz，H-5′)，1.07(3H，d，J=6.9 Hz，3′-Me)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：145.6(C-1)，157.7(C-3)，105.0(C-4)，140.4(C-4a)，110.1(C-5)，189.2(C-6)，84.0(C-7)，50.6(C-8)，114.3(8a)，120.2(C-9)，146.9(C-10)，38.9(C-11)，29.2(C-12)，11.7(C-13)，23.2(C-7-Me)，19.4(C-11-Me)，170.6(C-1′)，58.3(C-2′)，104.2(C-3′)，44.9(C-4′)，76.9(C-5′)，18.7(C-6′)，8.8(4′-Me)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道一致，故鑒定該化合物為chaetomugilin S。

化合物5黃色粉末，溶于丙酮;分子式為C23H25O6Cl。HR-ESI-MS：m/z433.140 1 [M+H]+，m/z455.122 3 [M+Na]+；1H NMR(600 MHz，(CD3)2CO)δ：7.27(1H，s，H-1)，6.55(1H，s，H-4)，2.98(1H，d，J=10.1 Hz，H-8)，6.06(1H，d，J=15.8 Hz，H-9)，6.52(1H，dd，J=15.8，8.2 Hz，H-10)，2.26(1H，m，H-11)，1.42(2H，m，H-12)，0.90(3H，t，J=7.4 Hz，H-13)，1.41(3H，s，7-Me)，1.08(3H，d，J=6.7 Hz，11-Me)，3.03(1H，d，J=10.1 Hz，H-1′)，1.90(1H，dq，J=10.0，6.9 Hz，H-3′)，4.30(1H，dq，J=10.0，6.4 Hz，H-4′)，1.41(3H，d，J=6.4 Hz，H-5′)，1.13(3H，d，J=6.9 Hz，3′-Me)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：201.2(C-3′)，183.4(C-6)，167.9(C-1′)，162.7(C-8)，157.1(C-3)，151.5(C-1)，148.0(C-10)，139.7(C-4a)，125.1(C-2′)，119.8(C-9)，110.4(C-8a)，108.9(C-5)，105.4(C-4)，87.6(C-7)，70.9(C-5′)，51.0(C-4′)，39.0(C-11)，29.1(C-12)，26.2(CH3-C7)，21.4(CH3-C4′)，19.3(CH3-C11)，13.5(C-6′)，11.7(C-13)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道一致，故鑒定該化合物為chaetoviridin A。

化合物6黃色粉末，溶于丙酮;分子式為C32H36O5N2。HR-ESI-MS：m/z551.251 3 [M+Na]+；1H NMR(600 MHz，(CD3)2CO)δ：6.27(1H，s，NH-2)，3.87(1H，m，H-3)，3.13(1H，dd，J=8.6，3.7 Hz，H-4)，1.89(1H，m，H-5)，2.83(1H，d，J=3.9 Hz，H-7)，2.23(1H，m，H-8)，2.86(1H，dd，J=8.0，4.2 Hz，Ha-10)，2.54(1H，dd，J=15.0，7.9 Hz，Hb-10)，1.15(3H，d，J=6.5 Hz，H-11)，1.27(3H，s，H-12)，6.17(1H，dd，J=10.0，15.0 Hz，H-13)，5.11(1H，m，H-14)，2.20(1H，m，Ha-15)，1.80(1H，m，Hb-15)，2.41(1H，m，H-16)，5.49(1H，d，J=9.1 Hz，H-17)，5.09(1H，s，H-19)，6.57(1H，d，J=16.7 Hz，H-21)，7.62(1H，d，J=16.7 Hz，H-22)，1.10(3H，d，J=5.6 Hz，Me-16)，1.39(3H，s，Me-18)，3.71(1H，d，J=2.7 Hz，OH-19)，8.13(1H，s，NH-1′)，6.85(1H，s，H-2′)，7.39(1H，d，J=7.2 Hz，H-4′)，7.14(1H，t，J=7.5 Hz，H-5′)，7.19(1H，t，J=7.5 Hz，H-6′)，7.29(1H，d，J=7.4 Hz，H-7′)；13C NMR(150 MHz，(CD3)2CO)δ：201.0(C-20)，197.8(C-23)，172.8(C-1)，138.9(C-17)，136.7(C-1′a)，135.7(C-21)，132.7(C-22)，132.6(C-14)，132.2(C-18)，128.9(C-13)，127.8(C-3′a)，124.2(C-5′)，121.2(C-2′)，118.9(C-6′)，118.5(C-4′)，111.4(C-7′)，109.7(C-3′)，63.2(C-9)，62.0(C-7)，57.2(C-6)，52.2(C-3)，48.3(C-8)，46.7(C-4)，41.3(C-15)，36.4(C-5)，33.2(C-10)，32.0(C-16)，20.4(CH3-C16)，12.3(CH3-11)，9.8(CH3-C18)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報(bào)道一致，故鑒定該化合物為chaetoglobosin A。

化合物7淡黃色粉末，溶于丙酮;分子式為C15H18O6。HR-ESI-MS：m/z293.090 4 [M-H]-；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：12.20(1H，s)，6.59(1H，d，J=2.3 Hz，H-4′)，6.43(1H，d，J=2.4 Hz，H-2′)，4.93(1H，d，J=2.9 Hz，H-4)，4.02(1H，dd，J=11.6，8.3 Hz，H-5)，3.86(3H，s，H-8)，3.79(1H，dd，J=11.6，8.6 Hz，H-5)，3.08～3.02(1H，m，H-2)，3.00(1H，d，J=3.1 Hz，H-3)，2.08(1H，d，J=11.8 Hz，H-7)，1.97(1H，dd，J=11.9，4.2 Hz，H-7)，1.56(3H，s，H-9)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：202.9(C-1)，166.6(C-1′)，165.2(C-3′)，140.3(C-6′)，110.0(C-2′)，108.6(C-4′)，106.4(C-5′)，101.7(C-6)，76.9(C-4)，62.9(C-5)，55.8(C-8)，44.9(C-3)，39.9(C-2)，39.1(C-7)，23.8(C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報(bào)道一致，故鑒定該化合物為6-O-demethyl-5-deoxyfusarubin。

2.2 黑色素瘤B16細(xì)胞活力試驗(yàn)

將分離純化后獲得的7個單體化合物進(jìn)行黑色素瘤B16細(xì)胞活力影響試驗(yàn)，結(jié)果顯示，當(dāng)各化合物濃度均為5 μmol/L時，僅有化合物2對黑色素瘤B16細(xì)胞有一定的抑制活性，其余化合物未見明顯抑制腫瘤細(xì)胞增殖作用。如表1所示，當(dāng)化合物2的濃度為2.5 μmol/L時，與對照組相比黑色素瘤B16細(xì)胞存活率有明顯下降，且隨濃度的增加，對B16細(xì)胞殺傷能力隨之增強(qiáng)，在藥物濃度達(dá)到10 μmol/L時，細(xì)胞死亡最多，其IC50值為2.24 μmol/L，與陽性對照威羅菲尼(vemurafenib)相比，化合物2顯示出良好的抑制效果；在作用48 h后，仍有良好的抑制作用，且隨濃度的增大B16細(xì)胞存活率有明顯的降低，其IC50值為2.28 μmol/L。

表1 化合物2對黑色素瘤B16細(xì)胞的抑制率(n=6)Table 1 Inhibition rate of compound 2 on melanoma B16 cells (n=6)

3 討論

C.globosum為毛殼菌科、毛殼菌屬真菌，自1973年Sekita從C.globosum中分離到球毛殼菌素A和B以來，已從球毛殼菌屬中發(fā)現(xiàn)了400多個結(jié)構(gòu)新穎的活性次級代謝產(chǎn)物，這些化合物主要包括球毛殼菌素類、嗜氮酮類、萜類、酯類、黃酮類、異香豆素類等[15]，其中球毛殼菌素類與嗜氮酮類化合物占絕大多數(shù)，而異香豆素類等其他化合物則較少被分離，僅Yan等[16]從銀杏來源的球毛殼菌中分離到異香豆素類化合物prochaetoviridin A。本研究從S108中分離得到chaetomugilin D(3)、chaetomugilin S(4)、chaetoviridins A(5)等3個嗜氮酮類化合物以及該菌中常見的生物堿類化合物球毛殼素A(6)，同時從中分離到異香豆素類化合物6-hydroxymellein(2)及萘醌類化合物6-O-demethyl-5-deoxyfusarubin(7)，化合物2和7均為首次從毛殼菌屬真菌中分離得到。6-Hydroxymellein(2)是一種常見的生物合成中間體，微生物以其為前體可以合成眾多的結(jié)構(gòu)類似物[17]，這表明S108基因組中可能含有相關(guān)的聚酮合成酶(PKS)基因簇，開展S108的次級代謝產(chǎn)物的進(jìn)一步挖掘，有望從中分離出新結(jié)構(gòu)、新活性的化合物。

本研究從球毛殼菌C.globosumS108中分離純化得到的7個化合物，其生物活性已有較多報(bào)道，chaetomugilin D(3)、chaetomugilin S(4)、chaetoviridins A(5)等嗜氮酮類化合物，其中化合物3、4可有效抑制幼苗的生長，如Wang等[18]從一株銀杏來源的球毛殼菌中分離得到的化合物3、4對幼苗生長有明顯的抑制作用，與廣譜除草劑草甘膦相比其IC50更低，因此有待被開發(fā)為天然環(huán)保型除草劑?；衔?顯示出良好的抗真菌活性，對核盤病菌有良好抑制作用，其防治效果與廣譜殺菌劑多菌靈效果相當(dāng)[16]。球毛殼素A(6)亦顯示了較好的抗癌活性，如Knudsen等[19]研究發(fā)現(xiàn)從青霉菌中分離到的化合物6可作為治療慢性淋巴白血病(CLL)的潛在藥物，在模擬淋巴組織的培養(yǎng)條件下，也表現(xiàn)出顯著的誘導(dǎo)CLL細(xì)胞凋亡作用。目前，有關(guān)6-O-demethyl-5-deoxyfusarubin(7)活性未有報(bào)道，但其類似物鐮紅菌素具有抑制血液腫瘤細(xì)胞系的增殖并增加細(xì)胞凋亡的作用[20]。本研究以黑色素瘤B16細(xì)胞為對象，開展化合物抑制腫瘤細(xì)胞的評價，結(jié)果表明，除化合物2外，其他6種化合物均對黑色素瘤B16細(xì)胞沒有抑制作用。

迄今，6-hydroxymellein(2)僅從紅樹的內(nèi)生真菌褐瘤菌(Daldiniaeschscholtzii)和土曲霉(Aspergillusterreus)中分離得到，發(fā)現(xiàn)其對擬南芥花粉發(fā)育有抑制作用[9,21]。此外，Yang等[22]發(fā)現(xiàn)化合物2對于人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231和人胰腺癌細(xì)胞PANC-1無抑制作用，對非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞A549和人肝癌細(xì)胞BEL-7402僅有微弱的抑制活性，其IC50分別為170.6 mg/L和315.0 mg/L。本研究首次發(fā)現(xiàn)6-hydroxymellein(2)對黑色素瘤B16細(xì)胞有良好的抑制活性，IC50為2.24 μmol/L。黑色素瘤作為臨床上常見的皮膚惡性腫瘤，病惡性程度高、易轉(zhuǎn)移，發(fā)病率有逐年增加趨勢[23]，因此6-hydroxymellein(2)新活性的發(fā)現(xiàn)有助于黑色素瘤治療藥物的研發(fā)，同時為治療黑色素瘤藥物開發(fā)提供了新思路。