嚴(yán)海濤 紀(jì)雙慧 韓勇

（1，山東省莒縣畜牧獸醫(yī)管理服務(wù)中心 276500；2，山東省莒縣畜牧獸醫(yī)管理服務(wù)中心小店畜牧獸醫(yī)站 276500；3，山東省日照市畜牧獸醫(yī)管理服務(wù)中心 276800）

豬瘟(Classical Swine Fever，CSF) 又稱豬霍亂，是一種以豬為唯一宿主的急性、熱性、高度接觸傳染性疾病[1-3]。豬瘟病毒(CSFV) 為致病病原體，是單股正鏈RNA 病毒，外形呈球形，核衣殼為非螺旋形十二面體對稱，具有包膜，屬于黃病毒科瘟病毒屬[4，5]。豬瘟發(fā)病率和致死性較高，具有高度傳染性，不同年齡、性別、品種的豬和野豬都易感，一年四季均可發(fā)生，是目前危害中國養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的主要疫病之一。為做好豬瘟防控，及時(shí)了解豬瘟免疫后的效果和感染狀況，本試驗(yàn)抽檢了14 個(gè)場點(diǎn)樣品，采用ELISA 和熒光RT-PCR 試驗(yàn)方法，檢測豬瘟抗體水平和疫病狀況，了解日照市豬瘟疫病狀況。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)地點(diǎn)、方法

本試驗(yàn)于2020 年11 月15～20 日在日照市畜牧獸醫(yī)管理服務(wù)中心獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，采取豬瘟ELISA 試驗(yàn)和豬瘟熒光RT-PCR 方法。

1.2 抽樣方法和樣品數(shù)量

血清學(xué)抽樣根據(jù)全市養(yǎng)殖情況，按照預(yù)期免疫合格率為90%、置信水平95%、可接受誤差16%等計(jì)算采樣情況，每次隨機(jī)監(jiān)測場點(diǎn)14 個(gè)；每個(gè)場點(diǎn)按照群內(nèi)免疫合格率90%，置信水平95%、可接受誤差10%，每個(gè)場點(diǎn)采集樣品數(shù)30 份。病原學(xué)對全市所有屠宰場和無害化處理場進(jìn)行抽樣，每個(gè)場點(diǎn)按照群內(nèi)陽性率10%，置信水平95%，每個(gè)場點(diǎn)隨機(jī)抽樣30 份。

血清學(xué)樣品主要采集血清，病原學(xué)樣品屠宰場采集豬淋巴結(jié)，無害化處理場采集耳尖組織。根據(jù)上面抽樣方法，對14家場點(diǎn)進(jìn)行抽樣檢測，共采集血清360 份，組織150 份（見表1）。

表1 豬瘟抽樣統(tǒng)計(jì)表（單位：個(gè)、份）

1.3 檢測試劑

豬瘟ELISA 試劑盒購自北京金諾百泰生物技術(shù)有限公司，批號(hào)為20201117。核酸提取試劑盒購自西安天隆公司，豬瘟病原采用本實(shí)驗(yàn)室建立的熒光RT-PCR 方法進(jìn)行檢測。

1.4 儀器設(shè)備

酶標(biāo)儀為美國Thermo 公司生產(chǎn)，型號(hào)GO。全自動(dòng)洗板機(jī)為美國Molecular Devices 公司生產(chǎn)，型號(hào)為AquaMax。熒光PCR 儀為美國ABI 公司生產(chǎn)，型號(hào)為7500。核酸提取儀為西安天隆公司生產(chǎn)，型號(hào)為960。

1.5 操作程序

豬瘟ELISA 試驗(yàn)按照GB/T16551-2008 操作，核酸提取按照西安天隆公司試劑盒說明書，由儀器進(jìn)行自動(dòng)提取，豬瘟病毒熒光RT-PCR 按照本實(shí)驗(yàn)室建立的方法進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 豬瘟抗體檢測結(jié)果

血清檢測360 份，免疫合格287 份，抗體總體合格率79.7%（見表2）。

表2 豬瘟抗體檢測統(tǒng)計(jì)表（單位：個(gè)、份）

2.2 豬瘟病原檢測結(jié)果

病原學(xué)檢測樣品150 份，其中淋巴結(jié)90 份，豬耳尖組織60 份，檢測結(jié)果均為陰性。

3 討論與分析

3.1 抽檢全市14 家場點(diǎn)

從檢測結(jié)果來看，日照市豬瘟總體免疫合格率為79.7%，達(dá)到保護(hù)水平，病原學(xué)檢測結(jié)果均為陰性，顯示該地豬瘟防控效果較好，重大動(dòng)物疫病風(fēng)險(xiǎn)較低。但個(gè)別散養(yǎng)戶豬瘟抗體水平較低，是防控的薄弱環(huán)節(jié)，豬瘟發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)依然存在。

3.2 疫苗免疫效果

檢測發(fā)現(xiàn)，種豬場抗體水平最高，規(guī)模豬場次之，屠宰場和養(yǎng)殖戶抗體水平較低，這與養(yǎng)殖場戶防疫意識(shí)有很大關(guān)系。通過養(yǎng)殖戶了解到，有個(gè)別群體的免疫效果一般，不同個(gè)體即使是相同的免疫程序，所產(chǎn)生的免疫效果也不一樣，主要與群體先天狀況和養(yǎng)殖場環(huán)境、飼養(yǎng)管理水平有關(guān)。豬瘟抗體檢測在預(yù)防和控制豬瘟中具有很大的作用，規(guī)模場應(yīng)建立豬瘟免疫監(jiān)測，并按制度定期進(jìn)行?？贵w不僅反應(yīng)豬群的抗體水平，指導(dǎo)豬場進(jìn)科學(xué)合理的免疫，還能檢查免疫效果，避免因疫苗質(zhì)量等問題導(dǎo)致免疫失敗[6]。檢測發(fā)現(xiàn)，日照市豬瘟病原多年檢測均為陰性，分析與我國豬瘟疫苗免疫效果良好有很大關(guān)系。建議規(guī)模場加強(qiáng)生物安全防護(hù)，制定科學(xué)的凈化程序，推進(jìn)豬瘟監(jiān)測和凈化力度。

3.3 做好豬瘟凈化工作

本試驗(yàn)室對豬瘟凈化關(guān)鍵技術(shù)進(jìn)行了研究，建立了豬瘟病原熒光PCR 快速檢測方法，并將這一技術(shù)應(yīng)用于豬場凈化，取得了較好的效果。

3.4 加強(qiáng)生物安全體系建設(shè)

單靠疫苗免疫來防控豬瘟有一定的困難。豬瘟防控的關(guān)鍵措施是要加強(qiáng)生物安全體系建設(shè)，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，定期進(jìn)行消毒，選擇敏感消毒藥，制定科學(xué)的消毒程序。對病豬進(jìn)行嚴(yán)格的隔離和淘汰，做好死亡生豬無害化處理。