彭契六，朱春玲

(廣西國(guó)際壯醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科，南寧 530201)

G蛋白偶聯(lián)受體(G protein coupled receptor，GPCR)是一類(lèi)具有7個(gè)跨膜螺旋結(jié)構(gòu)的跨膜蛋白，是真核生物中最大的信號(hào)受體家族，具有強(qiáng)大的調(diào)控功能，可調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)外多種生命活動(dòng)，如細(xì)胞生物學(xué)的一般特征(代謝、生長(zhǎng)、死亡、遷移)以及細(xì)胞特異性反應(yīng)(肌肉收縮/松弛、腺/上皮分泌、神經(jīng)元活性的改變等)[1]。GPCR的發(fā)現(xiàn)及深入研究不僅為探索細(xì)胞生物學(xué)提供了新見(jiàn)解，還為許多疾病的治療提供了新思路，因此其靶向藥物應(yīng)運(yùn)而生。目前，臨床藥物中34%以上是以GPCR為靶點(diǎn)[2]，廣泛應(yīng)用于心血管疾病、神經(jīng)元疾病、糖尿病等疾病的治療[3-5]。以GPCR為靶點(diǎn)的抗腫瘤藥物較少，而GPCR在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中有重要作用。其中，GPCR48[又稱LGR(leucine-rich repeat containing G-protein coupled receptor)4]是GPCR家族的主要成員，研究發(fā)現(xiàn)其異常表達(dá)與前列腺癌、結(jié)腸癌、胃癌等多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及患者預(yù)后等密切相關(guān)[6-8]?，F(xiàn)就GPCR48與腫瘤發(fā)生發(fā)展關(guān)系的研究進(jìn)展予以綜述，以期為腫瘤的預(yù)防及靶向治療提供新思路。

1 GPCR48概述

GPCR48是GPCR家族LGR亞組的成員，是具有7個(gè)跨膜蛋白和17個(gè)富含亮氨酸重復(fù)序列的大分子蛋白。其基因定位于第11號(hào)染色體長(zhǎng)臂，由18個(gè)外顯子組成，分子量約為104 000[9]。GPCR48在人體的各個(gè)組織均廣泛表達(dá)，且在皮膚的表皮和毛囊、胰島細(xì)胞以及男性和女性生殖器官的上皮細(xì)胞中表達(dá)水平最高[10]。Rspo(R-spondin)是GPCR48的配體，兩者結(jié)合可刺激Wnt信號(hào)通路，而β聯(lián)蛋白(β-catenin)作為Wnt信號(hào)通路的中心下游效應(yīng)物，不僅在細(xì)胞的生長(zhǎng)和發(fā)育調(diào)節(jié)中起關(guān)鍵作用，還可調(diào)節(jié)黑色素瘤的轉(zhuǎn)移[11]。此外，腫瘤壞死因子超家族成員11 也是GPCR48的配體，其與GPCR48結(jié)合，可激活Gq和糖原合成酶激酶-3β信號(hào)通路，從而參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的分裂、增殖、分化及腫瘤的發(fā)生和發(fā)展等過(guò)程[12]。有研究表明，通過(guò)基因敲除技術(shù)敲除GPCR48基因的小鼠具有較高的死亡率，且GPCR48基因敲除小鼠的膽囊、眼睛、小腸、腎及其他多個(gè)器官均存在不同缺陷，可見(jiàn)GPCR48在多種器官的形成過(guò)程中起重要作用[13]。同時(shí)，GPCR48還參與了多種病理形成和治療過(guò)程，如子宮內(nèi)膜容受性的形成、肥胖形成、骨質(zhì)疏松治療[14]。近年來(lái)，有關(guān)GPCR48 在腫瘤生物學(xué)中的研究逐年增多，現(xiàn)已證實(shí)GPCR48在多種腫瘤中高表達(dá)，并在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起關(guān)鍵作用。

2 GPCR48與腫瘤的關(guān)系

2.1GPCR48與前列腺癌 近年來(lái)，大多數(shù)亞洲國(guó)家的前列腺癌發(fā)病率和死亡率均呈上升趨勢(shì)[15]。很多學(xué)者認(rèn)為，前列腺癌的發(fā)生發(fā)展與GPCR48相關(guān)。Liang等[6]分別通過(guò)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染和慢病毒介導(dǎo)短發(fā)夾RNA的方式在前列腺癌細(xì)胞中過(guò)表達(dá)和沉默GPCR48，結(jié)果發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)GPCR48可促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)，而沉默GPCR48表達(dá)可以癌抑制前列腺癌細(xì)胞增殖。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，GPCR48的過(guò)表達(dá)與磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase，PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B，PKB/Akt)信號(hào)通路的關(guān)鍵效應(yīng)分子Akt的上調(diào)有關(guān)，提示GPCR48可能通過(guò)PI3K/Akt信號(hào)通路調(diào)節(jié)前列腺癌細(xì)胞和腫瘤生長(zhǎng)。Luo等[16]在對(duì)前列腺癌細(xì)胞系以及實(shí)驗(yàn)構(gòu)建的一種新型轉(zhuǎn)基因小鼠前列腺癌模型的研究中發(fā)現(xiàn)，GPCR48可通過(guò)促進(jìn)前列腺癌上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化調(diào)節(jié)腫瘤轉(zhuǎn)移，表明GPCR48在調(diào)節(jié)前列腺癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移方面發(fā)揮關(guān)鍵作用。此外，雖然高劑量分次電離輻射結(jié)合新輔助療法和長(zhǎng)期雄激素剝奪療法已在前列腺癌的治療中取得了顯著進(jìn)步[17]，但是疾病復(fù)發(fā)和副作用的出現(xiàn)仍是前列腺癌靶向治療面臨的一大難題。因此，探索前列腺癌放療的新靶點(diǎn)尤為重要。Liang等[18]研究發(fā)現(xiàn)，GPCR48可以增加前列腺癌細(xì)胞的放療敏感性，其可能是前列腺癌細(xì)胞放射敏感性的重要調(diào)節(jié)因子和新靶點(diǎn)。但GPCR48調(diào)節(jié)前列腺癌發(fā)生發(fā)展的機(jī)制尚不明確，仍需進(jìn)一步探索。

2.2GPCR48與結(jié)直腸癌 結(jié)直腸癌是一種常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤。近年來(lái)，隨著人們生活水平的不斷提高，結(jié)直腸癌在我國(guó)的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，發(fā)病率居我國(guó)惡性腫瘤的第3位[19]。為了研究GPCR48在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用，Gao等[7]采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)方法檢測(cè)結(jié)腸癌和正常結(jié)腸組織中GPCR48信使RNA的表達(dá)水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在正常結(jié)腸組織中GPCR48信使RNA表達(dá)水平較低，而在結(jié)腸癌中表達(dá)明顯上調(diào)，且GPCR48高表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。Wu等[13]研究發(fā)現(xiàn)，GPCR48表達(dá)與結(jié)直腸癌患者術(shù)后預(yù)后不良相關(guān)；進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，GPCR48通過(guò)PI3K/Akt和促分裂原活化的蛋白激酶/胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2通路調(diào)節(jié)糖原合成酶激酶-3β的磷酸化來(lái)激活結(jié)直腸癌中的β-catenin信號(hào)，促進(jìn)結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移。Zhi等[20]在對(duì)結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)分子機(jī)制研究中發(fā)現(xiàn)，circLgr4是結(jié)直腸腫瘤和結(jié)直腸腫瘤干細(xì)胞中高表達(dá)的一種環(huán)狀RNA，其可與GPCR48相互作用并激活GPCR48，進(jìn)而促進(jìn)Wnt/β-catenin信號(hào)激活靶向調(diào)控結(jié)腸直腸癌干細(xì)胞的增殖和結(jié)腸直腸腫瘤的發(fā)生，該研究為進(jìn)一步探索結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制提供了新視角。結(jié)直腸癌的侵襲轉(zhuǎn)移是其高死亡率的主要原因之一，因此尋找腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)的生物標(biāo)志物和干預(yù)靶點(diǎn)對(duì)結(jié)直腸癌的診斷及治療有重要意義。上述研究表明，GPCR48可能是預(yù)測(cè)結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移或不良預(yù)后的潛在標(biāo)志物和未來(lái)治療靶點(diǎn)。

2.3GPCR48與胃癌 胃癌是發(fā)病率和死亡率較高的常見(jiàn)癌癥之一，但其發(fā)病機(jī)制仍未闡明。胃癌的發(fā)生發(fā)展非常復(fù)雜，涉及癌蛋白的激活和腫瘤抑制因子的失活，GPCR家族在調(diào)節(jié)胃癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起至關(guān)重要的作用。Steffen等[8]研究發(fā)現(xiàn)，GPCR48在胃癌組織中的表達(dá)水平明顯高于相應(yīng)的非腫瘤黏膜組織；免疫組織化學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，GPCR48的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。朱健康等[21]通過(guò)對(duì)Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期胃癌患者的血清GPCR48表達(dá)進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，GPCR48的表達(dá)水平在胃癌的分期診斷中具有一定的診斷價(jià)值；進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，GPCR48是胃癌發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。另一項(xiàng)探討GPCR48表達(dá)與胃癌患者預(yù)后關(guān)系的研究也證明，胃癌細(xì)胞GPCR48的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，但并未發(fā)現(xiàn)GPCR48的表達(dá)水平對(duì)胃癌患者的生存產(chǎn)生影響[22]?？梢?jiàn)，GPCR48參與了胃癌的生物學(xué)過(guò)程，但其是否可以作為胃癌患者診斷、預(yù)后或治療的靶點(diǎn)仍需進(jìn)一步研究。

2.4GPCR48與非小細(xì)胞肺癌 作為世界上最常見(jiàn)的腫瘤類(lèi)型，肺癌在所有癌癥中死亡率最高，其中75%～80%的肺癌病例屬于非小細(xì)胞肺癌[23]。盡管手術(shù)、放療、化療等治療措施已廣泛應(yīng)用于非小細(xì)胞肺癌的治療，但效果仍不理想，患者5年以上生存率<20%[24-25]。近年的研究表明，基于RNA測(cè)序數(shù)據(jù)的免疫相關(guān)預(yù)后模型可以準(zhǔn)確預(yù)測(cè)癌癥患者的生存率[26]。Li等[27]通過(guò)分析癌癥基因組圖譜、免疫學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)和免疫報(bào)告以及順?lè)醋影┌Y數(shù)據(jù)庫(kù)的相關(guān)數(shù)據(jù)，篩選并驗(yàn)證了GPCR48、血小板反應(yīng)蛋白1、白細(xì)胞介素-33等15個(gè)免疫相關(guān)基因可作為預(yù)測(cè)非小細(xì)胞肺癌患者總生存率的獨(dú)立預(yù)后因素，并以此為基礎(chǔ)建立了免疫相關(guān)基因的Cox預(yù)測(cè)模型，用于預(yù)測(cè)非小細(xì)胞肺癌患者的預(yù)后。Sun等[28]基于癌癥基因組圖譜數(shù)據(jù)庫(kù)非小細(xì)胞肺癌樣本的免疫基因轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)和臨床數(shù)據(jù)的研究也發(fā)現(xiàn)，GPCR48、S100鈣結(jié)合蛋白A16、血管位蛋白樣4等6個(gè)基因是非小細(xì)胞肺癌的高危免疫基因。以上研究表明，GPCR48在非小細(xì)胞肺癌中起重要作用，并有可能成為有潛力的肺癌預(yù)后預(yù)測(cè)因子。

2.5GPCR48與頭頸部鱗狀細(xì)胞癌 頭頸部鱗狀細(xì)胞癌是發(fā)生于頭部和頸部的鱗狀細(xì)胞癌，是一種常見(jiàn)、多發(fā)和侵襲性的上皮癌。其在全球常見(jiàn)惡性腫瘤中居第6位，死亡率占所有惡性腫瘤的1%～2%[29]。晚期頭頸部鱗狀細(xì)胞癌易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移，而轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致頭頸部鱗狀細(xì)胞癌患者預(yù)后差及病死率高的主要原因。因此，深入了解其發(fā)病的分子機(jī)制對(duì)頭頸部鱗狀細(xì)胞癌的有效治療至關(guān)重要。近年有研究顯示，Rspo2-GPCR48系統(tǒng)可通過(guò)增強(qiáng)癌細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲及誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化和干細(xì)胞樣特性參與舌鱗狀細(xì)胞癌進(jìn)程[30]。同時(shí)，該研究還在舌鱗狀細(xì)胞癌發(fā)病的分子機(jī)制方面取得了重要進(jìn)展，證明Rspo2-GPCR48通過(guò)激活Wnt/β-catenin通路促進(jìn)舌鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展。目前的研究為鱗狀細(xì)胞癌提供了一種新的可能的靶向治療方法，但仍需要進(jìn)一步探索相關(guān)機(jī)制并結(jié)合臨床數(shù)據(jù)，實(shí)現(xiàn)從體外實(shí)驗(yàn)到臨床應(yīng)用的轉(zhuǎn)化。

2.6GPCR48與其他腫瘤 除上述幾種腫瘤外，GPCR48與其他腫瘤的發(fā)生發(fā)展也有密切聯(lián)系。有學(xué)者采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)、蛋白印跡技術(shù)和免疫組織化學(xué)技術(shù)分析肝癌組織和癌旁組織中GPCR48信使RNA和蛋白表達(dá)水平與肝癌轉(zhuǎn)移和預(yù)后的相關(guān)性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)GPCR48在肝癌組織中的表達(dá)水平高于癌旁組織，且GPCR48與肝癌的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移和預(yù)后相關(guān)[31]。Yue等[32]的研究證明，乳腺癌癌組織中的GPCR48表達(dá)水平明顯高于正常乳腺組織，且其表達(dá)水平與預(yù)后有關(guān)，同時(shí)該研究還證實(shí)了GPCR48是Wnt/β-catenin信號(hào)介導(dǎo)的乳腺癌腫瘤發(fā)生、轉(zhuǎn)移和腫瘤干細(xì)胞維持的主要控制器。Zeng等[33]采用免疫組織化學(xué)及實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)的方法檢測(cè)漿液性卵巢癌癌組織和癌旁組織中GPCR48的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)GPCR48在癌組織中的表達(dá)水平明顯高于癌旁組織，且其表達(dá)與漿液性卵巢癌患者的生存率相關(guān)，為漿液性卵巢癌的診斷及治療提供了重要臨床價(jià)值。Hou等[34]采用免疫印跡和免疫熒光分析方法檢測(cè)葡萄膜黑色素瘤細(xì)胞中GPCR48的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)GPCR48在葡萄膜黑色素瘤細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)，而miR-34a可負(fù)調(diào)控GPCR48，從而抑制葡萄膜黑色素瘤細(xì)胞的遷移和侵襲?？梢?jiàn)，GPCR48的高表達(dá)在人體多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用，對(duì)GPCR48表達(dá)機(jī)制的深入研究對(duì)腫瘤的早期診斷、治療及預(yù)后等均具有重要意義。

3 GPCR48相關(guān)分子機(jī)制

Wnt/β-catenin信號(hào)通路在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用，而GPCR48可與配體Rspo結(jié)合進(jìn)而介導(dǎo)Wnt/β-catenin信號(hào)通路調(diào)控腫瘤的發(fā)生發(fā)展，這種調(diào)控機(jī)制在結(jié)直腸癌、舌鱗狀上皮細(xì)胞癌和乳腺癌等癌癥中得到證實(shí)[13,30,32]。有研究顯示，GPCR48可通過(guò)調(diào)節(jié)效應(yīng)分子Akt的表達(dá)，從而介導(dǎo)PI3K/Akt信號(hào)通路影響前列腺癌的發(fā)生發(fā)展[6]。另一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，沉默GPCR48基因表達(dá)會(huì)對(duì)皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞的蛋白激酶C信號(hào)通路產(chǎn)生影響，從而調(diào)節(jié)皮膚鱗狀細(xì)胞癌癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移[35]。目前，針對(duì)GPCR48上游通路調(diào)控機(jī)制的研究較少。近年來(lái)，有研究發(fā)現(xiàn)非編碼小RNA分子對(duì)GPCR48起重要的調(diào)控作用，這為GPCR48上游調(diào)控機(jī)制的研究提供了新思路。如在對(duì)葡萄膜黑色素瘤的研究中，學(xué)者發(fā)現(xiàn)miR-34a可負(fù)調(diào)控GPCR48，從而抑制葡萄膜黑色素瘤細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展[34]。此外，有研究發(fā)現(xiàn)，環(huán)狀RNA circLgr4也可以通過(guò)調(diào)控GPCR48來(lái)影響結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展[20]。可見(jiàn)，GPCR48可能與多種信號(hào)調(diào)節(jié)通路相關(guān)。因此，進(jìn)一步的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)對(duì)于完善GPCR48的分子調(diào)控機(jī)制很有必要，且對(duì)今后腫瘤的診斷、治療及預(yù)后也具有重要意義。

4 GPCR48與腫瘤的防治

免疫檢查點(diǎn)阻斷抗癌療法在腫瘤的治療上有很好的療效，而GPCR48的過(guò)表達(dá)可促進(jìn)腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞極化，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對(duì)免疫檢查點(diǎn)阻斷抗癌療法產(chǎn)生耐藥性。Tan等[36]對(duì)實(shí)驗(yàn)建立的小鼠肺癌模型和小鼠黑色素瘤模型給予GPCR48 ECD和Rspo1抗體來(lái)阻斷Rspo1-GPCR48信號(hào)，結(jié)果顯示這些小鼠克服了對(duì)程序性細(xì)胞死亡受體1阻斷抗癌療法治療的耐藥性，提高了程序性細(xì)胞死亡受體1免疫治療肺癌和黑色素瘤的療效，表明Rspo1-GPCR48在宿主抗腫瘤免疫中起重要作用，是腫瘤免疫治療的潛在治療靶點(diǎn)。

急性髓細(xì)胞性白血病是一種高度異質(zhì)性和侵襲性的惡性腫瘤，而骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的持續(xù)自我更新能力是某些急性髓細(xì)胞性白血病治療失敗和復(fù)發(fā)的主要原因。Rspo3-GPCR48對(duì)急性髓細(xì)胞性白血病的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞自我更新至關(guān)重要，可作為治療靶點(diǎn)，且研究證實(shí)Rspo3-GPCR48途徑可以被臨床級(jí)抗SPO3抗體(OMP-131R10/rosmantuzumab)有效阻斷，該抗體在不損害健康干細(xì)胞室的情況下可消除急性髓細(xì)胞性白血病患者的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的持續(xù)自我更新能力，從而為特異性靶向骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞提供治療機(jī)會(huì)[37]。

5 小 結(jié)

GPCR48在前列腺癌、結(jié)直腸癌、胃癌、非小細(xì)胞肺癌等腫瘤的癌組織中高表達(dá)，且通過(guò)抑制GPCR48的表達(dá)，可有效地抑制腫瘤的發(fā)生、發(fā)展；同時(shí)抑制GPCR48的表達(dá)可與目前的腫瘤治療方案產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)，從而提高腫瘤治療的效果，這為GPCR48作為腫瘤的診斷標(biāo)志物及潛在治療靶點(diǎn)提供了更多證據(jù)。然而，目前GPCR48在臨床上的應(yīng)用仍然非常少。盡管GPCR48被證實(shí)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著密切聯(lián)系，但仍面臨很多問(wèn)題，如GPCR48的具體調(diào)節(jié)機(jī)制尚未完全明確，如何使GPCR48作為無(wú)創(chuàng)的腫瘤標(biāo)志物，GPCR48靶向治療的安全性和可行性問(wèn)題，以及如何用于臨床還需大量臨床研究驗(yàn)證。相信隨著對(duì)GPCR48研究的深入，未來(lái)GPCR48將具有良好的應(yīng)用前景。