李戈輝， 吳 瑋， 邸銘洋， 王長(zhǎng)城， 楊桂朋， 丁海兵**

(1. 中國(guó)海洋大學(xué)海洋化學(xué)理論與工程技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 山東 青島 266100；2. 中國(guó)海洋大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院， 山東 青島 266100； 3. 迪申生物技術(shù)(上海有限公司)， 上海 201201)

電泳[1]是帶電粒子在電場(chǎng)作用下向電性相反的電極移動(dòng)的過(guò)程。電泳過(guò)程中，粒子所帶電荷數(shù)、分子大小、形狀等各不相同，從而在電場(chǎng)中有不同的移動(dòng)速度而分離。聚丙烯酰胺電泳膠簡(jiǎn)稱PAGE(Polyacrylamide gel electrophoresis)，以聚丙烯酰胺凝膠作為支持介質(zhì)，利用分子篩效應(yīng)分離蛋白質(zhì)和寡核苷酸。電泳過(guò)程中的蛋白質(zhì)遷移率與分子量、形狀、電荷量均相關(guān)[2]。Shapiro于1967年提出SDS-PAGE(Sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis)法，可僅憑分子量不同分離蛋白質(zhì)[3]。1970年，Laemmli完善了不連續(xù)電泳技術(shù)，用于分離大分子蛋白。不連續(xù)緩沖體系由電泳緩沖液、堆積膠、分離膠組成。蛋白質(zhì)樣品在堆積膠中經(jīng)過(guò)大孔徑凝膠的堆積效應(yīng)被濃縮在一個(gè)狹窄的區(qū)帶，形成相同的分離起點(diǎn)；蛋白質(zhì)進(jìn)入分離膠后，較小孔徑凝膠的分子篩效應(yīng)將它們分離開(kāi)[4]。經(jīng)過(guò)多年發(fā)展，SDS-PAGE具備了分辨率高、重復(fù)性較好、靈敏度高、上樣量少等特點(diǎn)，成為廣泛應(yīng)用的蛋白質(zhì)分離方法[2]。

目前實(shí)驗(yàn)室常用的Laemmli法配制的SDS-PAGE膠雖然優(yōu)點(diǎn)突出，但存在保質(zhì)期短、耐受電壓較低、電泳時(shí)間長(zhǎng)等問(wèn)題。一些生命科學(xué)公司研發(fā)了預(yù)制膠產(chǎn)品，在保持Laemmli膠良好分離性能的基礎(chǔ)上，縮短了電泳時(shí)間，延長(zhǎng)了電泳膠的保質(zhì)期。例如Bio-Rad公司的一種蛋白質(zhì)凝膠適用電壓為200～300 V，電泳時(shí)間在30 min左右，在2～8 ℃時(shí)保質(zhì)期為12個(gè)月；EZBiolab的預(yù)制膠適用電壓為150 V，電泳時(shí)間在40～50 min，4 ℃時(shí)可保存18個(gè)月。但目前市場(chǎng)上流行的預(yù)制膠價(jià)格較高，電泳時(shí)間仍然較長(zhǎng)，且使用時(shí)受限于與之相匹配的電泳系統(tǒng)。制備一種兼?zhèn)銵aemmli膠分離性能和易制備特性，且擁有商業(yè)預(yù)制膠較長(zhǎng)保質(zhì)期優(yōu)點(diǎn)的電泳膠十分必要。到目前為止，這方面的主要進(jìn)展是邸銘洋等用三異丙醇胺代替Laemmli膠中的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸鹽(Tris-HCl)作為緩沖物質(zhì)，制備了聚丙烯酰胺濃度為7.5%的電泳膠[5]。初步研究表明，這種電泳膠對(duì)蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)有良好的分離效果并具有較長(zhǎng)的保質(zhì)期。

本研究在探究影響電泳膠的保質(zhì)期關(guān)鍵因素的基礎(chǔ)上，以三異丙醇胺和三乙醇胺代替Tris-HCl作為緩沖物質(zhì)，制備了含有不同濃度聚丙烯酰胺的兩種新型電泳膠。對(duì)它們性能的全面研究表明，這兩種新型電泳膠均保持了Laemmli膠良好的蛋白質(zhì)分離性能，適用電壓和耐受的最高電壓均高于目前市場(chǎng)上流行的商業(yè)電泳膠，電泳速度更快，保質(zhì)期更長(zhǎng)，具備良好的應(yīng)用前景。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

儀器 pH計(jì)(PB-10，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)；電泳儀(BG-Power 600K，北京百晶生物技術(shù)有限公司)；垂直槽制膠支架、垂直電泳槽(VE-180，上海天能科技有限公司)；分析天平(CP214，奧豪斯儀器(上海)有限公司)；電子天平(TD20002A，余姚市金諾天平儀器有限公司)；光照培養(yǎng)箱(GXZ-250A，寧波江南儀器廠)；真空封口機(jī)(DZ-280/2SE，東莞市金橋科技電器制造有限公司)；超聲波清洗機(jī)(SB-5200，寧波新芝生物科技股份有限公司)。

試劑 三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽(Tris-HCl，99.9%)、十二烷基硫酸鈉(SDS，99.9%)、鹽酸(優(yōu)級(jí)純)、冰醋酸(分析純)、甲醇(分析純)(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；N,N-亞甲基二丙烯酰胺單體(Bis，99%)、過(guò)硫酸銨(APS，98%)、?；撬?99%)、三乙醇胺(97%)、三異丙醇胺(99.5%)、乙醇酸(99%)、甘氨酸(98.5%)(Sigma-Aldrich有限公司)；丙烯酰胺單體(Acr，99.9%)、N,N,N(,N(-四甲基乙二胺(TEMED，98%)，考馬斯亮藍(lán)R250(Decentbio公司)；預(yù)染色蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)和未染色蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)(BBI生命科學(xué)有限公司)；預(yù)制電泳膠(Bio-Rad公司，分離膠濃度分別為7.5%、10%、12%、15%)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 電泳膠的制備 制備分離膠濃度為7.5%、10%、12%、15%的Laemmli膠、新型I、新型II電泳膠若干塊，用于檢驗(yàn)其最大耐受電壓和保質(zhì)期。電泳膠配方如表1、2所示。通常濃度為3%～5%的堆積膠對(duì)蛋白質(zhì)有明顯的濃縮作用[6]，本研究配制堆積膠濃度為4%。制備電泳膠時(shí)，APS和TEMED最后加入，其他溶液需要先充分混合均勻并排氣，否則影響電泳膠凝固速度。灌入分離膠后用Milli-Q水液封，以減少空氣對(duì)APS產(chǎn)生自由基反應(yīng)的不利影響，加速凝固過(guò)程。待分離膠凝固完全，沖洗殘留試劑，灌入堆積膠，插入梳子。堆積膠凝固后，若當(dāng)天進(jìn)行電泳，則將梳子取出并沖洗加樣孔，備用。在檢驗(yàn)電泳膠保質(zhì)期實(shí)驗(yàn)中，電泳膠梳子保留，放入塑料封口袋中，填充適量電泳緩沖液，用真空封口機(jī)抽氣并密封，置于恒溫培養(yǎng)箱中。

表1 4%堆積膠配方(總體積10 mL)

續(xù)表1

1.2.2 電泳膠最大耐受電壓測(cè)定 電泳緩沖液含有25 mmol/L Tris，192 mmol/L 甘氨酸，0.1% SDS。將電泳膠安裝在電泳槽內(nèi)，電泳槽注入緩沖液，使電泳膠的上端和下端浸入其中，取5 μL預(yù)染色蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)或未染色蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)注入上樣孔。電泳開(kāi)始時(shí)，采用較低電壓使蛋白質(zhì)在堆積膠中濃縮成狹窄的區(qū)帶。增大電壓使蛋白質(zhì)進(jìn)入分離膠。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)標(biāo)準(zhǔn)的指示劑前沿接近電泳膠底部時(shí)，電泳結(jié)束。測(cè)量蛋白質(zhì)條帶到指示劑的長(zhǎng)度，以及兩膠界面到指示劑的長(zhǎng)度，由二者比值計(jì)算相對(duì)遷移率m。

未染色蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)經(jīng)15～20 min染色、4～6 h脫色后測(cè)量計(jì)算m(染色液為0.25%的考馬斯亮藍(lán)R250溶液，溶劑為水、甲醇、冰醋酸按照約5∶5∶1體積比混合；脫色液成分為水、甲醇、冰醋酸按照約6∶3∶1體積比混合)[7]。

當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)分子量在15～200 kD時(shí)，蛋白質(zhì)的分子量的對(duì)數(shù)與相對(duì)遷移率的關(guān)系符合下式：

lgMW=km+b。

式中：MW為蛋白質(zhì)相對(duì)分子量，在15～200 kD之間時(shí)，MW與相對(duì)遷移率m呈線性關(guān)系；k為斜率；b為截距，該方法測(cè)定蛋白質(zhì)分子量的相對(duì)誤差為±10%[8]。根據(jù)蛋白質(zhì)分子量對(duì)遷移率曲線擬合度R2的數(shù)值，結(jié)合電泳條帶圖像，以判斷蛋白質(zhì)的分離效果。測(cè)試不同濃度Laemmli膠、新型I和新型II電泳膠以及預(yù)制膠的最大耐受電壓(即能維持mvs. lgMW曲線擬合度不低于0.990 0的電壓)，并在最大電壓下對(duì)比各電泳膠對(duì)蛋白質(zhì)的分離情況。

1.2.3 電泳膠的加速壽命實(shí)驗(yàn) 加速壽命實(shí)驗(yàn)用以檢驗(yàn)的Laemmli膠、新型I、新型II電泳膠以及預(yù)制膠的保質(zhì)期。將Laemmli膠、新型I、新型II電泳膠和Bio-Rad預(yù)制膠置于恒溫培養(yǎng)箱中(分離膠濃度均為10%)，調(diào)節(jié)至37 ℃恒溫保存。在第6、9、12、15天分別將膠取出進(jìn)行電泳，檢驗(yàn)其對(duì)蛋白質(zhì)的分離效果。若電泳膠出現(xiàn)氣泡、漏膠或變形，則不進(jìn)行電泳，視作該電泳膠已經(jīng)達(dá)到最長(zhǎng)保質(zhì)期。

1.2.4 電泳膠變質(zhì)過(guò)程中表觀活化能的估算 電泳膠變質(zhì)是復(fù)雜的反應(yīng)。依據(jù)阿倫尼烏斯公式，結(jié)合不同保存溫度條件下電泳膠的保質(zhì)期，可計(jì)算幾種電泳膠變質(zhì)過(guò)程中的表觀活化能?；罨芊从郴瘜W(xué)反應(yīng)速度，在本研究中可作為比較幾種電泳膠的變質(zhì)速度的一種依據(jù)。重復(fù)1.2.3中步驟，但將電泳膠保存溫度設(shè)置為45 ℃，檢驗(yàn)它們?cè)谠摐囟认碌谋Ｙ|(zhì)期。跟據(jù)電泳膠在37和45 ℃的保質(zhì)期，計(jì)算電泳膠的表觀活化能，從而能夠從理論上計(jì)算電泳膠在一般儲(chǔ)存條件(4 ℃)下的變質(zhì)時(shí)間。

表2 x%分離膠配方(總體積10 mL)Table 2 Formulation of x% separation gel(Total volume 10 mL)

表觀活化能計(jì)算方法如下：

式中：k是溫度為T時(shí)的反應(yīng)速率常數(shù)；R是氣體摩爾常數(shù)；A是指前因子；Ea為表觀活化能。

A是與T無(wú)關(guān)的常數(shù)，兩邊求微分：

當(dāng)溫度分別為T1和T2時(shí)，反應(yīng)速率常數(shù)分別為k1和k2，則：

兩式相減得：

(1)

設(shè)溫度為T1時(shí)的反應(yīng)速率為k1，反應(yīng)時(shí)間為t1；溫度T2的反應(yīng)速率為k2，反應(yīng)時(shí)間為t2。假設(shè)幾種電泳膠變質(zhì)的反應(yīng)程度基本相同，則

t1k1=t2k2。

(2)

將實(shí)驗(yàn)溫度、相應(yīng)的保質(zhì)期代入(a) (b)式，聯(lián)立得到表觀活化能Ea的估算值。

2 結(jié)果與討論

2.1 電泳膠凝固時(shí)間

在室溫下(25 ℃)，制備的各類電泳膠凝固時(shí)間如表3所示。新型I電泳膠所需的凝固時(shí)間最短，Laemmli膠所需時(shí)間最長(zhǎng)。新型I、新型II電泳膠相對(duì)于Laemmli膠凝固速度更快，主要與?；撬岬募尤肓坑嘘P(guān)。在一定范圍內(nèi)，?；撬釢舛仍礁?，電泳膠凝固速度越快[5]。此外，經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，未排氣的新型電泳膠混合液難以凝固。

表3 電泳膠凝固時(shí)間(體積10 mL，濃度10%)

2.2 電泳膠的最大耐受電壓和分離性能

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同濃度的Bio-Rad預(yù)制膠、新型I、新型II電泳膠的最大耐受電壓均在350 V左右，各類電泳膠在一般工作電壓和最大耐受電壓下的電泳耗時(shí)如表4所示。Laemmli膠最大耐受電壓約為240 V，不宜在350 V電壓條件下電泳。

表4 不同電壓下電泳耗時(shí)(10%分離膠)

在最大耐受電壓350 V下的各類電泳膠的電泳時(shí)間如表5所示，電泳圖像如圖1所示。表5中擬合度R2為2～3次電泳結(jié)果的平均值。圖1中，各條帶分子量(kDa)從上到下依次為：130，100，70(橙色)，50，35，25，20，15。

((a),(d),(g),(j)為7.5%、10%、12%、15%的Bio-Rad預(yù)制膠；(b),(e),(h),(k) 為7.5%、10%、12%、15%的新型Ⅰ電泳膠；(c),(f),(i),(l) 為7.5%、10%、12%、15%的新型II電泳膠。(a),(d),(g),(j): 7.5%, 10%, 12%, 15% Bio-Rad Gel;(b),(e),(h),(k):7.5%, 10%, 12%, 15% New electrophoresis gel I; (c),(f),(i),(l): 7.5%, 10%, 12%, 15% New electrophoresis gel II.)

表5 標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合度及電泳用時(shí)

在350 V電壓下，預(yù)染色標(biāo)準(zhǔn)蛋白的電泳時(shí)間隨分離膠濃度升高而增加。在同等濃度分離膠中，標(biāo)準(zhǔn)蛋白在新型I電泳膠中電泳速度最快，在預(yù)制膠中次之，在新型II電泳膠中電泳速度最慢。電泳過(guò)程中蛋白質(zhì)的遷移速度與緩沖體系、支持介質(zhì)性質(zhì)等密切相關(guān)，由于新型I、II新型電泳膠中分別以三異丙醇胺和三乙醇胺作為緩沖組分，相同條件下兩種電泳膠的電泳時(shí)間差異顯著。

表5、圖1結(jié)果表明，350 V電壓條件下，不同濃度新型I和新型II電泳膠均能獲得清晰的分離條帶，標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合度良好，其中新型I電泳膠R2波動(dòng)范圍最小，Bio-Rad預(yù)制膠的擬合度波動(dòng)范圍最大。比較幾種電泳膠的R2平均值，新型I電泳膠的平均分離性能最佳。分離膠濃度較高時(shí)(15%)，Bio-Rad預(yù)制膠、新型II電泳膠的部分蛋白質(zhì)條帶出現(xiàn)模糊、擴(kuò)散的現(xiàn)象，可能是電泳耗時(shí)較長(zhǎng)，產(chǎn)生熱量較多，電泳系統(tǒng)溫度升高導(dǎo)致電泳膠分離能力下降。根據(jù)mvs. lgMW曲線方程，計(jì)算出的蛋白質(zhì)分子量，與已知的標(biāo)準(zhǔn)分子量對(duì)比的結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)測(cè)得的分子量在Bio-Rad預(yù)制膠、新型I電泳膠、新型II電泳膠中的相對(duì)誤差分別為0.45%、0.26%、0.36%，新型I電泳膠測(cè)定蛋白質(zhì)分子量時(shí)的相對(duì)誤差最小。新型I、新型II電泳膠和Bio-Rda預(yù)制膠中的未染色蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)的遷移率曲線與上述結(jié)果相近，兩種新型電泳膠染色、脫色效果良好，條帶清晰。

2.3 電泳膠保質(zhì)期的確定

將在37 ℃恒溫保存的Laemmli膠、新型I、新型II電泳膠和Bio-Rad預(yù)制膠在第6、9、12天取出進(jìn)行電泳，電泳圖片如圖2所示。各類電泳膠保質(zhì)期如表6所示。在37 ℃條件下加速壽命實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，第6天Laemmli膠對(duì)蛋白質(zhì)的分離能力明顯下降，蛋白質(zhì)條帶出現(xiàn)模糊、擴(kuò)散和變形，并且存在拖尾現(xiàn)象。6天之后的Laemmli膠出現(xiàn)氣泡和漏膠現(xiàn)象，不宜進(jìn)行電泳。

表6 電泳膠加速壽命實(shí)驗(yàn)保質(zhì)期與表觀活化能

第6天時(shí)兩種新型電泳膠分離蛋白質(zhì)的條帶均比較清晰，且標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合度均優(yōu)于Laemmli膠，新型I電泳膠的線性關(guān)系最好。Bio-Rad預(yù)制膠標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合度較好，但蛋白質(zhì)條帶出現(xiàn)擴(kuò)散現(xiàn)象。第9天新型I、新型II電泳膠的標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合度仍在0.980 0以上，所得蛋白質(zhì)條帶較清晰；而Bio-Rad預(yù)制膠中所得的蛋白質(zhì)條帶出現(xiàn)明顯的模糊擴(kuò)散現(xiàn)象，對(duì)蛋白質(zhì)分離效果明顯降低。第12天新型I、新型II電泳膠中所得的蛋白質(zhì)條帶出現(xiàn)輕微擴(kuò)散和拖尾，標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合度略有下降，分離能力仍然較好。新型I電泳膠標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合度更高。兩種新型電泳膠均未出現(xiàn)變形、氣泡，表明它們性質(zhì)穩(wěn)定，能在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)保持蛋白質(zhì)分離性能，保質(zhì)期顯著優(yōu)于Bio-Rad公司的預(yù)制膠。Bio-Rad預(yù)制膠在保存第9天后出現(xiàn)變形和氣泡，而新型I、新型II電泳膠分別在第15、14天出現(xiàn)氣泡。

理論上，Laemmli膠中的Tris-HCl，以及兩種新型電泳膠中的三乙醇胺和三異丙醇胺都屬于胺類。胺類是典型的親核試劑，能夠親核攻擊酰胺基團(tuán)帶正電的碳原子，進(jìn)行胺交換反應(yīng)。因此，這三種胺都有破壞聚丙烯酰胺三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的可能性。這三種親核試劑中，Tris-HCl是伯胺，發(fā)生胺交換反應(yīng)相對(duì)更容易，但反應(yīng)條件也比較苛刻(在酸性或堿性條件使酰胺鍵的穩(wěn)定性受到破壞)；經(jīng)過(guò)較長(zhǎng)的時(shí)間，其—NH2基團(tuán)與聚丙烯酰胺會(huì)逐漸發(fā)生反應(yīng)，如圖3(a)所示，反應(yīng)使交聯(lián)結(jié)構(gòu)的酰胺鍵斷開(kāi)，三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)遭到破壞，電泳膠逐漸失去了分子篩效應(yīng)，分離能力下降[5]。三乙醇胺和三異丙醇胺都是叔胺，對(duì)酰胺進(jìn)行親核攻擊非常困難，甚至無(wú)法進(jìn)行。同時(shí)，兩種新型電泳膠中的甘氨酸成分有利于保持它們的空間網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，并減輕蛋白質(zhì)條帶的拖尾情況。兩種新型電泳膠配方中Tris的含量遠(yuǎn)低于Laemmli膠，并采用?；撬帷⒁掖妓嶙鳛榫彌_成分，通過(guò)調(diào)節(jié)pH減少聚丙烯酰胺的中酰胺鍵在酸性條件下被破壞的程度，從而延長(zhǎng)了電泳膠的保質(zhì)期[5]。從圖3(b，c)可以看出，三異丙醇胺與三乙醇胺雖然性質(zhì)相似，但三異丙醇胺立體空間結(jié)構(gòu)相對(duì)于三乙醇胺具有更強(qiáng)的支撐、分散性能，且與酰胺鍵發(fā)生反應(yīng)時(shí)的空間位阻更大，變質(zhì)過(guò)程更加緩慢。以上分析表明，新型I電泳的保質(zhì)期應(yīng)該長(zhǎng)于新型II電泳膠并遠(yuǎn)遠(yuǎn)長(zhǎng)于Laemmli膠，與我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符。電泳膠穩(wěn)定性的增強(qiáng)也有助于其耐受更高的電壓，使兩種新型電泳膠能夠承受350 V的電壓，耐壓性能顯著高于Laemmli膠。

圖3 (a) 酸性條件下Tris與酰胺鍵反應(yīng);(b)三乙醇胺結(jié)構(gòu)和(c)三異丙醇胺結(jié)構(gòu)

Rowell 等人的研究表明，SDS-PAGE在37 ℃下恒溫保存1天約等于4 ℃下恒溫保存1個(gè)月[9]。由于Bio-Rad預(yù)制膠使用時(shí)，距離生產(chǎn)日期約2個(gè)月，通過(guò)換算后該預(yù)制膠保質(zhì)期為11～12個(gè)月，與產(chǎn)品說(shuō)明基本相符。根據(jù)Rowell的結(jié)果推斷，在4 ℃冷藏條件下，新型I、新型II電泳膠可以分別保存約15、14個(gè)月，保質(zhì)期較Bio-Rad預(yù)制膠更長(zhǎng)，明顯長(zhǎng)于Laemmli膠。

2.4 電泳膠變質(zhì)過(guò)程的表觀活化能

兩種新型電泳膠和Laemmli膠保質(zhì)期的結(jié)果都是根據(jù)較高溫度下加速實(shí)驗(yàn)的結(jié)果推定的。通過(guò)計(jì)算電泳膠變質(zhì)過(guò)程中的表觀活化能，能夠推算電泳膠在理論上的保質(zhì)期。四種電泳膠變質(zhì)過(guò)程的表觀活化能如表6所示。幾種電泳膠表觀活化能由大到小排序?yàn)椋盒滦虸電泳膠、新型II電泳膠、Bio-Rad預(yù)制膠、Laemmli膠。表觀活化能數(shù)值越高，反應(yīng)進(jìn)行越慢，這進(jìn)一步說(shuō)明了新型I電泳膠具有更加穩(wěn)定的化學(xué)性質(zhì)，從而具有較長(zhǎng)的保質(zhì)期。根據(jù)表觀活化能推算電泳膠在4 ℃儲(chǔ)存條件下的理論保質(zhì)期列于表6，其中新型I電泳膠保質(zhì)期最長(zhǎng)，可達(dá)3年以上。根據(jù)表觀活化能計(jì)算的四種電泳膠的保質(zhì)期比根據(jù)Rowell研究結(jié)果推算的保質(zhì)期明顯偏長(zhǎng)，因此需要進(jìn)一步通過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證這四種電泳膠在4 ℃下的確切的保質(zhì)期。

2.5 Laemmli膠和兩種新型電泳膠的理化參數(shù)

Laemmli膠和兩種新型電泳膠的部分理化參數(shù)如表7所示。

表7 三種電泳膠部分理化參數(shù)(10%分離膠)

3 結(jié)語(yǔ)

最大電壓耐受實(shí)驗(yàn)和加速壽命實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，新型I和新型II電泳膠具備了Laemmli膠對(duì)蛋白質(zhì)良好的分離性能，并且制膠時(shí)凝固速度更快；耐受工作電壓高達(dá)350 V，完成電泳時(shí)間更短；新型I和新型II電泳膠配方中的緩沖物質(zhì)三異丙醇胺和三乙醇胺能有效保護(hù)聚丙烯酰胺的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，保質(zhì)期超過(guò)現(xiàn)有的商業(yè)預(yù)制膠，具有良好的應(yīng)用前景。