李秀富，朱鋒釗

(銅仁職業(yè)技術學院，貴州 銅仁 554300)

高職院校農林牧漁類“雞新城疫抗體水平測定”技能競賽是由教育部發(fā)起，農業(yè)農村部主辦，學校、行業(yè)、企業(yè)共設的賽項。賽項測定方法按照中華人民共和國《新城疫診斷技術》(GB/T 16550—2008)國家標準，操作方法簡單，結果判定方便，但競賽時間較長，往往因器材準備不合理或選手操作不規(guī)范而影響試驗結果。筆者作為我校近幾年該技能競賽國賽和省賽的指導教師，現(xiàn)就技能競賽中影響試驗結果的因素進行歸納總結，以供參考。

1 試驗器材正確規(guī)范使用

在競賽第1環(huán)節(jié)中，除了物品標識，重點是考察托盤天平和離心機的規(guī)范使用，競賽物品準備的均為500 g載荷托盤天平。在試驗使用前，應將兩側托盤架下方的保護套取下，將平衡螺母調至最里側，砝碼歸零，觀察天平敏感性。然后選擇質量相近的2個小燒杯置于托盤中央調平，將離心管規(guī)范裝入對角取出的離心機套管并放入托盤天平燒杯內進行生理鹽水配平。在離心管裝入離心機套管配平時一定要精準，否則將影響離心機正常使用并使離心機產生較大雜音，嚴重影響離心機轉數(shù)和血細胞壓積，對清洗紅細胞和最終吸取紅細胞壓積都會產生不良影響，最終可能會導致1%紅細胞懸液配置不精準。

2 反應溫度與時間

雞新城疫抗體水平測定試驗屬于血清學實驗中的血凝與血凝抑制試驗，溫度對試驗結果影響較大。溫度過高(大于37 ℃)不僅會造成水分蒸發(fā)和反應物解離，甚至還會造成紅細胞自溶，作用時間變短；溫度低于20 ℃則會使反應速度變緩；溫度過低(小于4 ℃)不僅紅細胞會發(fā)生自凝，還會影響試驗結果的判定時間或與標準結果相差1～2個滴度[1]。為了保證試驗結果的準確性和競賽公平公正，在競賽前和整個競賽過程中應將場地內每個工位室溫盡可能控制在20～25 ℃。

3 規(guī)范精準移液

在技能競賽中造成移液不精準的因素很多，概括起來主要包括：吸頭與移液器型號是否完全匹配，裝配移液器吸頭是否規(guī)范，吸頭有無潤洗，移液前是否校準移液器，移液是否做到“慢吸，快打”，倍比稀釋混勻是否產生氣泡，移液是否有液體濺出等。操作的每一個細小失誤或動作標準不一致都會造成結果誤差，甚至沒有結果。所謂“差之毫厘，謬以千里”，所以在競賽操作中要求每位選手必須謹小慎微、規(guī)范操作。

4 準確適量配置1%紅細胞懸液

技能競賽要求準備非免疫公雞1只，要求競賽準備方認真檢測雞是否有禽流感、新城疫等相關抗體。在采血時采血器要先抽取抗凝劑再采血，若加入抗凝劑的時間、方法不當產生了血凝塊，對紅細胞懸液配置會有很大影響[2]。采血過程中2人要默契配合，抓雞做到輕、穩(wěn)、準、巧，讓雞安靜舒適地躺臥在雞籠上保定，消毒采血部位后，采血操作者要穩(wěn)、準、快地采足所需翅靜脈血液量，采血完畢一手用干棉球按壓止血，另一手蓋上采血器針帽，適度輕晃采血器以防凝血[3]。擰掉采血器上的針頭，將抗凝血沿離心管壁輕緩注入離心管中，再緩慢加入3～4倍生理鹽水混勻洗滌、配平，2 000 r/min離心5～8 min，洗滌4次，吸干凈血小板和白細胞，按照競賽用量配置適量紅細胞懸液，且所使用的生理鹽水使用前要滅菌并標定pH值至7.2。若配置的1%紅細胞懸液濃度過高，如有潤洗吸頭，則會出現(xiàn)沉降血點變大；反之，則會出現(xiàn)沉降血點變小，血沉速度減慢，血凝滴度升高，血凝抑制滴度下降，影響結果判定甚至誤判。

5 正確選擇96孔V型血凝反應板

96孔反應板選擇是否正確對試驗結果會產生較大影響。在學生練習中，我們選擇有機玻璃板、亞克力細胞培養(yǎng)板、一次性96孔反應板(底部分U型和V型，孔底有110度和90度)，對比試驗結果差距甚大，板孔傾斜的角度會影響紅細胞的沉降速度，細胞培養(yǎng)板嚴重影響血凝試驗判定結果，效果最好的是一次性96孔V型90度血凝反應板。此外要保證板面水平、孔底潔凈，避免使用陳舊反應板和有污物或彎曲傾斜等不合格的反應板，否則會因非特異性凝集出現(xiàn)結果不正確或跳孔現(xiàn)象[4]。

6 抗原對試驗結果的影響

抗原是影響新城疫檢測結果的主要因素之一，同一抗原最好2瓶以上混勻配置分裝使用。若抗原變質、陳舊或反復凍融等都會影響紅細胞的凝集力，造成解凝現(xiàn)象，嚴重影響試驗結果，所以抗原必須新鮮。4HAU的配置是根據(jù)血凝試驗結果進行的，在判讀血凝試驗結果時一定要嚴格按照《雞新城疫診斷技術》(GB/T 16550—2008)標準準確判讀，然后精確計算出生理鹽水和抗原的量，選擇適量的移液器先于小燒杯內準確加入生理鹽水，再加入抗原吹洗混勻。若混勻不均，濃度高的血凝抑制價會降低，濃度低的血凝抑制價會升高。競賽中因4HAU病毒抗原濃度對試驗結果會造成不可逆轉的影響，所以在時間允許的情況下，最好做1次回歸驗證，以校正4HAU病毒的配置濃度。

7 判定結果時間及判定標準

根據(jù)《雞新城疫診斷技術》(GB/T 16550—2008)標準，在結果判定上不管是血凝試驗還是血凝抑制試驗均要銘記“明顯”和“完全”2字。“明顯”是2個試驗均以生理鹽水對照孔紅細胞呈“明顯”鈕扣狀沉淀到孔底為判定標準；2個“完全”區(qū)別在于：血凝試驗時，正面傾斜反應板后紅細胞“完全”不流動，即以完全凝集病毒的最大稀釋度確定為該抗原的血凝滴度；血凝抑制試驗時，反面傾斜反應板，以紅細胞呈淚珠狀“完全”流下判讀為血凝抑制的滴度?？傊?，正確判定結果的時間是以陽性、陰性和生理鹽水對照成立前后5 min內判定記錄結果最好[2]。

8 小結

上述影響“雞新城疫抗體水平測定”結果的因素僅是筆者近幾年指導學生技能競賽的一些體會，在實際生產和工作中，影響抗體水平測定結果的因素還很多，每一環(huán)節(jié)都應做到認真細致，嚴格按照規(guī)程進行重復規(guī)范操作訓練和提煉總結，發(fā)現(xiàn)問題及時糾正，才能保證試驗結果的準確無誤，才能讓參賽選手在競賽中拿到好成績，更好地指導生產實踐。