奉佳，顏克旭，陳智，袁曉宇，鄧鈺，劉增再

（湖南省長沙市動植物疫病預(yù)防控制中心，湖南長沙410007）

牛結(jié)節(jié)性皮膚?。↙umpy skin disease,LSD），又稱牛結(jié)節(jié)疹、牛結(jié)節(jié)性皮炎或牛疙瘩皮膚病，是由痘病毒科（Poxviridae）、脊椎動物痘病毒亞科(Chordopoxvirinae)、山羊痘病毒屬（Capripoxvirus）的牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒（Lumpy skin disease virus,LSDV）引起的牛全身性感染疫病，臨床以皮膚出現(xiàn)結(jié)節(jié)為特征。世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為法定報告的動物疫病，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部暫將其按二類動物疫病管理病采取相應(yīng)防控措施[1-2]。1929年首次在贊比亞發(fā)現(xiàn)，2019年8月在我國新疆首次報道，2020年6月以來福建、江西、廣東、安徽、浙江、廣西、云南等省份分別報告，傳播區(qū)域逐漸增多。本文通過梳理當(dāng)前國內(nèi)外相關(guān)文獻，對該病病原學(xué)、流行病學(xué)、臨床癥狀、診斷、疫苗等內(nèi)容進行描述，并為國內(nèi)LSD防控策略的制訂提供參考依據(jù)。

1 病原學(xué)

LSDV屬于痘病毒科（Poxviridae）山羊痘病毒屬（Capripoxvirus，CaPV），其 代 表 毒 株 為 南 非Neethling株[3]，只有一個血清型，病毒遺傳性狀穩(wěn)定，幾乎沒有變異。屬于雙鏈DNA病毒，病毒粒子大小約為260～320nm，基因組大小約為151kbp，呈磚塊狀或橢圓形（副痘病毒除外），有或者無包膜，形態(tài)相似[4]。由于血清學(xué)交叉反應(yīng)，簡單的血清學(xué)方法很難區(qū)分LSDV與綿羊痘病毒（SPPV）、山羊痘病毒（GTPV）。

LSDV在55℃2 h、65℃30 min可失活；在4℃下組織培養(yǎng)液可存活6個月；在-90℃皮膚病變組織可保存10年；在pH值6.6～8.6時，37℃可長期存活；對乙醚（20%）、氯仿、福爾馬林（1%）、次氯酸鈉（2%～3%）、碘化合物（1∶33稀釋液）、苯酚（2%，15 min）、季銨化合物（0.5%）和某些洗滌（如十二烷基磺酸鈉劑）敏感。在陽光直射條件下，可被紫外線殺滅[5]。

2 流行病學(xué)

2.1 流行史

1929年，LSD在贊比亞首次出現(xiàn)，之后流行于撒哈拉沙漠以南地區(qū)，中南部相對嚴(yán)重。1988年，在撒哈拉沙漠以北地區(qū)首次傳播。1989年從非洲大陸傳出，向中東擴散，期間非洲國家呈地方性流行、中東國家呈多點散發(fā)。2013年，LSD繼續(xù)向北擴散，傳入歐洲，在歐洲和歐亞交界等地蔓延。2018年，沿著俄羅斯、哈薩克斯坦邊界向東移動，2019年傳入我國新疆[6-7]。2020年，LSD在國內(nèi)流行態(tài)勢持續(xù)惡化，新增發(fā)病省份不斷增多，福建、江西、廣東、安徽、浙江、廣西、云南等省份出現(xiàn)報告，動物防控壓力陡然增大。

2.2 傳染源和易感動物

感染LSDV的牛是主要傳染源，LSDV廣泛存在頭、頸、肩部、乳房、外陰、陰囊和四肢皮膚的潰瘍或結(jié)痂，以及口眼鼻粘液、牛乳、精液等處。潛伏期4～7d到5w，OIE規(guī)定為28d。發(fā)病率在5%～45%，病死率不超過10%。牛和水牛都是LSDV的易感動物，各個品種和性別均可感染，其中奶牛對LSDV更易感，瘤牛和雜交瘤牛等地方品種可能具有天然抗性。黑斑羚和長頸鹿可在試驗性感染后出現(xiàn)臨床癥狀，南非跳羚在皮膚樣本中檢測到LSDV核酸。綿羊和山羊在試驗性感染后有局部反應(yīng)，但暫無LSDV自然感染小型反芻動物報道[8]。

2.3 傳播途徑

LSD傳播途徑形式多樣，可通過接觸傳播、哺乳傳播、精液傳播、媒介昆蟲傳播、醫(yī)源性傳播等感染。早期研究和田間證據(jù)表明，LSDV無法通過直接接觸在動物間有效傳播，結(jié)果有待進一步驗證[9-10]。FAO研究表明，將健康牛復(fù)養(yǎng)于LSD暴發(fā)后清群的牛舍仍會發(fā)病，受污染的飼料、水和用具等可間接接觸感染。研究表明，多種節(jié)肢動物可通過機械途徑傳播LSDV[11]。LSDV可通過精液傳播，受感染精液可長時間排出LSDV[12]。在疫苗免疫或注射治療時，受污染的針頭會造成醫(yī)源性的群內(nèi)或群間傳播。

2.4 流行特點

LSD發(fā)生一般為散發(fā)，可受動物的調(diào)運或遷徙、傳播媒介移動、免疫狀況等因素影響。感染動物和節(jié)肢媒介動物的移動被認為是LSDV傳入和進一步擴散的最主要風(fēng)險因素。研究表明，全球特別是歐洲季節(jié)性模式明顯，而中東和非洲一年四季都有發(fā)生，土耳其部分地區(qū)疫情甚至發(fā)生在冬季，季節(jié)性特征不明顯。LSD發(fā)生通常與高密度的叮咬昆蟲和溫暖潮濕的氣候條件有關(guān)，降水量和晝夜溫差均值也是LSD暴發(fā)的重要環(huán)境因素[7]。

3 臨床癥狀

LSD具有急性、亞急性和慢性臨床癥狀，40%～50%受感染動物出現(xiàn)皮膚損傷癥狀，部分病例臨床癥狀不明顯但攜帶病毒。特征性臨床癥狀[13]主要包括發(fā)病牛體溫升高到40.5℃以上，肩胛下淋巴結(jié)或股前淋巴結(jié)腫大，全身被結(jié)節(jié)覆蓋，泌乳牛產(chǎn)奶量急劇下降，精神消沉，不愿活動，流眼淚、流鼻涕，伴隨病程深入，鼻腔分泌物會變成膿性、黏性。發(fā)熱2d后在頭、頸、肩、乳房、陰囊、外陰等部位皮膚出現(xiàn)10～50mm結(jié)節(jié)疙瘩，可能破潰、反復(fù)結(jié)痂；7d后結(jié)節(jié)疙瘩日益明顯；11d后頸皮結(jié)痂；14d后結(jié)痂部分凹陷；19d后痂殼凹陷硬化；21～26d痂殼不斷脫落；27d后瘢痕恢復(fù)。孕母牛流產(chǎn)、發(fā)情延遲，公牛暫時或永久性不育。

特征性病變[13]可見于呼吸道出現(xiàn)痘狀瘢痕，心臟出現(xiàn)痘狀病變，膽囊、消化道等出現(xiàn)痘狀病變和出血。皮下組織漿液呈灰紅色，結(jié)節(jié)腔中組織呈干酪樣灰白色或膿血狀，嚴(yán)重的可延伸至皮下或肋骨組織。

4 診斷

4.1 臨床診斷

LSD可根據(jù)特征性臨床癥狀進行診斷，皮膚損傷癥狀注意區(qū)分鑒別牛皰疹病毒2型感染、偽疙瘩皮膚病、昆蟲叮咬、皮膚癬病、蠕形螨感染等；黏膜壞死破潰癥狀注意區(qū)分鑒別口蹄疫、牛流行性口炎、牛皰疹性乳腺炎、牛病毒性腹瀉、惡性卡他熱等。

4.2 實驗室診斷

4.2.1 病理學(xué)檢測

病毒分離鑒定可采用細胞分離培養(yǎng)病毒、動物回歸試驗等方法。電子顯微鏡檢測，很難區(qū)分山羊痘病毒（Capripoxvirus）和正痘病毒（Orthopoxvirus），二者在形態(tài)上比較接近；可以區(qū)分副痘病毒（Parapoxvirus）、皰疹病毒（Herpesvirus），作為LSD與副痘病毒屬引起牛流行性口炎、皰疹病毒引起牛皰疹病毒2型鑒別診斷。

4.2.2 血清學(xué)檢測

4.2.2.1 血清中和試驗（SN）農(nóng)業(yè)部推薦《牛結(jié)節(jié)性皮膚病防治技術(shù)規(guī)范》抗體檢測標(biāo)準(zhǔn)之一。Samojlovic等[14]用MDBK細胞分離培養(yǎng)的LSDV與接種疫苗的血清抗體建立VNT檢測方法。艾日登才次克[15]等認為SN在檢測有輕微臨床癥狀和接種后體內(nèi)低抗體度的動物敏感度不夠，不適合初步檢測或大量樣本的檢測。

4.2.2.2 酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）農(nóng)業(yè)部推薦《牛結(jié)節(jié)性皮膚病防治技術(shù)規(guī)范》抗體檢測標(biāo)準(zhǔn)之一。Bowden等[16]在羊痘病毒屬核心蛋白ORF095和ORF103基礎(chǔ)上，建立間接ELISA檢測方法，用于檢測羊痘病毒屬病毒感染的血清抗體。史宗勇等[17]采用ELISA方法檢測12個樣品的OD值孔間變異系數(shù)小于10%，說明檢測結(jié)果穩(wěn)定性和重復(fù)性良好，適合抗體檢測。

4.2.2.3 間接熒光抗體試驗（IFAT）Gamil等[18]應(yīng)用羊痘病毒屬抗原免疫牛血清建立間接免疫熒光抗體檢測法，可用于LSD皮膚活檢樣品的檢測。Gari等[19]采用IFAT評估其作為診斷工具檢測LSD抗體效果，表明該檢測方法可能與其他痘病毒具有交叉反應(yīng)。

本研究的結(jié)論對大學(xué)英語聽力教學(xué)以及如何構(gòu)建有效的聽力課堂具有重要的指導(dǎo)意義。首先，較慢語速能夠?qū)χ袊⒄Z學(xué)習(xí)者聽力理解的發(fā)展起到明顯的幫助作用，學(xué)生在日常英語學(xué)習(xí)中應(yīng)該主動接觸或教師應(yīng)該提供更多的語速降低后的聽力材料。正常課堂教學(xué)中，教師應(yīng)盡量使用慢語速并根據(jù)學(xué)生實際英語水平調(diào)整自己的語速。在《新視野大學(xué)英語:視聽說教程》課本的使用過程中，應(yīng)多聽較慢語速標(biāo)準(zhǔn)的版本。然而，必須注意的一點是，目前二語或外語教學(xué)中普遍強調(diào)自然語料對有效交際的作用，因此語速降低并不是最終目的，而是通向理解正常語速話語的一條捷徑。

4.2.2.4 瓊脂凝膠免疫擴散試驗（AGID）Kitching[20]與Sharawi等[21]用放射性35S元素標(biāo)記羊痘病毒屬特異性抗原建立瓊脂免疫擴散法，可檢測血清中的羊痘病毒屬病毒抗體，但與副痘病毒產(chǎn)生交叉反應(yīng)。Zheng等[22]建立雙重PCR方法用于同時檢測和區(qū)分羊痘病毒和口瘡病場毒，并對其DNA產(chǎn)物進行凝膠電泳，具有較高的靈敏度和特異性。

4.2.2.5 蛋白印跡試驗（WB）Chand[23]與Venkatesan等[24]采用羊痘病毒感染的細胞裂解物建立蛋白印跡試驗（WB）方法，可用于檢測血清中長度為32kDa的羊痘病毒屬病毒結(jié)構(gòu)蛋白P32的抗體，檢測靈敏性和特異性較好，但受實驗條件限制，難以用于臨床檢測。

4.2.2.6 免疫過氧化物酶單層分析試驗（IPMA）Haegeman等[25]建立檢測LSDV抗體的免疫過氧化物酶單層分析法，可檢測最高稀釋度為1∶50的牛血清，特異性良好，對口蹄疫病毒和藍舌病病毒樣品不發(fā)生反應(yīng)。

4.2.3 病原學(xué)檢測

4.2.3.1 常規(guī)PCR方法 農(nóng)業(yè)部推薦《牛結(jié)節(jié)性皮膚病防治技術(shù)規(guī)范》病原檢測標(biāo)準(zhǔn)之一。Kitching等[26]采集羊痘病毒屬病毒根據(jù)相關(guān)基因設(shè)計PCR引物，實現(xiàn)痘病毒通用型檢測。Lamien等[27]設(shè)計引物檢測不同痘病毒，且與羊口瘡病毒、牛丘疹性口炎病毒、豬痘病毒和鹿痘病毒樣品均無交叉反應(yīng)，特異性良好。

4.2.3.2 實時熒光定量PCR（qPCR）方法 農(nóng)業(yè)部推薦《牛結(jié)節(jié)性皮膚病防治技術(shù)規(guī)范》病原檢測標(biāo)準(zhǔn)之一。Das等[28]優(yōu)化了Bowden、Balinsky建立的兩種羊痘病毒屬通用型rPCR檢測方法，改良后特異性均為100%。Eirini等[29]建立LSDV雙探針rPCR方法，可鑒別區(qū)分LSDV野毒株和疫苗株。qPCR檢測方法比傳統(tǒng)的凝膠PCR檢測方法更為靈敏，如果與自動提取相結(jié)合，可用于大規(guī)模樣本的檢測。

4.2.3.3 環(huán)介導(dǎo)等溫擴增試驗（LAMP）Das等[30]建立VP39蛋白基因的羊痘病毒屬通用型LAMP檢測方法，目視陽性反應(yīng)呈天藍色，檢測結(jié)果是通過顏色的改變判定，可能會出現(xiàn)偏差。

4.2.3.4 重組酶聚合酶擴增法（RPA）Shalaby等[31]建立羊痘病毒屬通用型RPA方法，陽性檢出率和方法敏感性均為100%。該方法特異性良好，且與羊口瘡病毒、牛丘疹性口炎病毒、牛痘病毒、小反芻獸疫病毒以及藍舌病病毒無交叉反應(yīng)。

5 疫苗

5.1 細胞傳代減毒活疫苗

由于山羊痘病毒具有交叉保護，其減毒活疫苗可廣泛應(yīng)用到綿羊痘、山羊痘和牛結(jié)節(jié)性皮膚病，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部通行辦法采用山羊痘疫苗（按照山羊5倍劑量）進行緊急免疫。目前已有的疫苗減毒株包括南非Neethling毒株（LSDV）、肯尼亞KSGP O-180和KSGP O-240毒株（LSDV）、Mysore和Gorgan毒株（GTPV）、羅馬尼亞毒株（SPPV）、南斯拉夫RM-65毒株（SPPV）等，這些都是自然分離毒株經(jīng)過細胞或動物傳代致弱形成。

5.2 基因改造減毒疫苗

目前無安全性的基因工程疫苗上市。研究人員正在把LSDV作為一種載體研制重組活載體疫苗。景志忠等[32]認為GPCR基因適合作為CaPV基因組的插入位點，是發(fā)展減毒活疫苗株的重要方向。

6 綜合防控措施

6.1 強化牲畜飼養(yǎng)管理

建立衛(wèi)生消毒制度，對動物飼養(yǎng)場、交易場所、運輸動物車輛等實施消毒,并做好蚊蠅等昆蟲的滅殺工作；跨區(qū)域引種積極申報，引種隔離觀察；發(fā)現(xiàn)疫病配合檢測，早發(fā)現(xiàn)、早處理，避免更大經(jīng)濟損失。

6.2 建立日常監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)

充分發(fā)揮動物疫病預(yù)防控制機構(gòu)的動物疫病監(jiān)測作用，加強對重點地區(qū)重點環(huán)節(jié)監(jiān)測，建立LSD日常監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)，做好區(qū)域性牛結(jié)節(jié)性皮膚病風(fēng)險評估；充分發(fā)揮林業(yè)等有關(guān)部門監(jiān)測作用，做好易感染野生動物、媒介昆蟲等流調(diào)監(jiān)測工作，為區(qū)域性牛結(jié)節(jié)性皮膚病風(fēng)險評估提供依據(jù)。

6.3 及時開展免疫接種

對風(fēng)險區(qū)域牲畜采用國家批準(zhǔn)的山羊痘疫苗(按照山羊的5倍劑量)進行緊急免疫接種。

6.4 嚴(yán)抓牲畜調(diào)運監(jiān)管

堅持內(nèi)防外堵，建立區(qū)域防控，嚴(yán)把調(diào)運監(jiān)管。全面落實區(qū)域邊境巡查、開展查原滅源等防控措施；嚴(yán)格按照檢疫申報要求進行報批報檢,嚴(yán)禁從疫區(qū)調(diào)入動物,嚴(yán)查外地調(diào)入動物。

6.5 加大防控宣傳培訓(xùn)

多層次開展LSD防控知識培訓(xùn)，提升專業(yè)人員鑒別檢測能力，提高養(yǎng)殖場戶危害防范意識，普及從業(yè)人員防治知識。

7 結(jié)語

近年來，隨著動物及動物產(chǎn)品交易頻繁，LSD等外來動物疫病傳播進入我國速度加快，而相應(yīng)檢測技術(shù)、防控手段滯后，造成動物疫病大面積傳播、定植。山羊痘疫苗的緊急接種，常規(guī)PCR、qPCR和ELISA等檢測方法的使用，《牛結(jié)節(jié)性皮膚病防治技術(shù)規(guī)范》制定等都是我國防控LSD的有效手段，但是也應(yīng)看到其中存在薄弱環(huán)節(jié)，免疫防控現(xiàn)狀不穩(wěn)定、調(diào)運監(jiān)管能力不足、專項監(jiān)測薄弱、傳播速度加快等，我們應(yīng)盡快加大對LSD基因工程疫苗研發(fā)、做好移動群體篩查診斷技術(shù)建立、構(gòu)建LSD監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)、開展接種后免疫應(yīng)答評估、探討疫病根除和凈化等工作，保障養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展。 □