陳 瑤

江蘇省無錫市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇無錫 214001

急性白血病(AL)是一種高度異質(zhì)性的惡性血液疾病，目前病因尚不清楚，可能與病毒、放射性元素或遺傳有關(guān)。AL傳統(tǒng)的分類方法為FAB分型[1]，根據(jù)此分型將其分為急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)、急性非淋巴細(xì)胞白血病(ANLL)。由于ALL與ANLL的診治方案完全不同，因此精準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)十分重要[2]。現(xiàn)階段ALL與ANLL的鑒別診斷方法很大程度上依賴于組織化學(xué)染色。目前過氧化物酶(POX)染色是輔助判斷AL細(xì)胞類型的首選、最重要的細(xì)胞化學(xué)染色法，其檢測(cè)的對(duì)象是血細(xì)胞所含的髓過氧化物酶(MPO)，MPO的來源是中性粒細(xì)胞中的蛋白質(zhì)。POX染色結(jié)果僅靠肉眼觀察，主觀性比較強(qiáng)，流式細(xì)胞術(shù)近年來在血液病的診斷上發(fā)展突飛猛進(jìn)，AL細(xì)胞質(zhì)髓過氧化物酶(cMPO)流式細(xì)胞術(shù)在臨床上逐步得到應(yīng)用，但是關(guān)于cMPO流式細(xì)胞術(shù)的檢測(cè)能力的報(bào)道不多[3]。筆者為了探討AL細(xì)胞POX染色與cMPO流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)能力的區(qū)別，選取60例AL患者作為研究對(duì)象進(jìn)行研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年1月至2021年4月在本院血液內(nèi)科住院的60例AL患者作為研究對(duì)象，其中男32例、女28例，年齡6～89歲、平均(57.87±1.52)歲，根據(jù)FAB分型分為ALL組(10例)和ANLL組(50例)。兩組均進(jìn)行POX染色與流式細(xì)胞儀免疫分型術(shù)檢測(cè)，并對(duì)檢測(cè)后的POX染色、cMPO陽性率及陽性積分進(jìn)行觀察及評(píng)估。

1.2方法

1.2.1POX染色檢測(cè)細(xì)胞MPO 于干燥骨髓片上添加Ⅰ液(含乙醇、聯(lián)苯胺、亞硝基鐵氰化鈉等)后覆蓋血膜，室溫放置1 min；再添加Ⅱ液(過氧化氫)，混勻后室溫放置4 min，流水沖洗；95%乙醇脫色后進(jìn)行瑞氏染色。結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)如下，陽性：細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色或藍(lán)黑色沉淀物，同時(shí)根據(jù)沉淀物量的多少及顏色深淺進(jìn)行積分，分別為3分(強(qiáng)陽性)、2分(陽性)、1分(弱陽性)；陰性：細(xì)胞質(zhì)無沉淀物，積分為0分。本次試驗(yàn)的試劑盒購于太陽生物技術(shù)有限公司。

1.2.2流式細(xì)胞儀免疫分型術(shù)檢測(cè)cMPO 于待檢試管中添加熒光標(biāo)記抗體(美國BD公司)，混勻后避光放置30 min；溶血?jiǎng)┤苎? 000×g離心5 min，去除上清液；加磷酸鹽緩沖液300 μL、破膜劑40 μL，混勻，避光放置30 min；待洗滌，離心后去除上清液，加入細(xì)胞質(zhì)抗體20 μL，混勻，避光放置30 min；3 000×g離心5 min，于貝克曼FC500-MC2型流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果判斷：陰性積分為0分；強(qiáng)陽性、陽性、弱陽性積分分別為3、2、1分。

1.3觀察指標(biāo) 觀察且分析AL患者的細(xì)胞POX染色、cMPO流式細(xì)胞術(shù)的陽性率及陽性積分。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及分析。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1AL患者細(xì)胞POX染色與cMPO流式細(xì)胞術(shù)陽性率比較 ANLL患者細(xì)胞cMPO流式細(xì)胞術(shù)的陽性率較高，與POX染色的陽性率對(duì)比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；而ALL患者細(xì)胞的POX染色出現(xiàn)1例假陽性，見表1。

表1 AL患者細(xì)胞POX染色與cMPO流式細(xì)胞術(shù)陽性率比較[n(%)]

2.2AL患者細(xì)胞POX染色與cMPO流式細(xì)胞術(shù)的陽性積分比較 ALL與ANLL患者細(xì)胞的POX染色與cMPO流式細(xì)胞術(shù)的陽性積分對(duì)比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表2。

表2 AL患者細(xì)胞POX染色與cMPO流式細(xì)胞術(shù)陽性積分比較

3 討 論

AL是臨床上較為常見的惡性疾病之一，其主要病理改變是機(jī)體多種造血干細(xì)胞發(fā)生惡變，且失去正常的增殖、分化及成熟能力。近年來，由于多種原因AL的發(fā)病率逐年升高，復(fù)雜類型的AL也陸續(xù)被發(fā)現(xiàn)，白血病分型對(duì)治療方案的制訂及預(yù)后改善具有重要意義[4-5]。目前臨床上對(duì)于AL的治療方案為60歲以下ANLL患者采用“3+7”方案，即蒽環(huán)類藥物3 d+標(biāo)準(zhǔn)劑量的阿糖胞苷7 d，完全緩解后進(jìn)入鞏固治療階段；對(duì)于老年性ANLL則強(qiáng)調(diào)個(gè)體化治療，根據(jù)患者年齡、體能狀態(tài)、合并癥指數(shù)選擇標(biāo)準(zhǔn)劑量化療方案[6-7]。ALL患者整體治療分3個(gè)階段，分別為誘導(dǎo)、緩解后鞏固、強(qiáng)化及維持治療，推薦VDCLP或HyperCVAD方案，有條件者誘導(dǎo)、緩解后盡早行異基因造血干細(xì)胞移植。

人體中性粒細(xì)胞中含量較多的一種蛋白質(zhì)存在于MPO，MPO的檢出對(duì)白血病分型具有重要意義[8]。白血病的檢測(cè)技術(shù)日新月異，在經(jīng)典的組織化學(xué)染色的基礎(chǔ)上，流式細(xì)胞術(shù)也逐漸用于白血病的分型。前者主要是對(duì)血細(xì)胞中的MPO進(jìn)行檢測(cè)，常見的檢測(cè)原理為二氨基聯(lián)苯胺法，而后者常采用流式細(xì)胞術(shù)來檢測(cè)cMPO[9]。

目前國內(nèi)的實(shí)驗(yàn)室對(duì)AL的診斷分型檢測(cè)方法中，比較常規(guī)使用的細(xì)胞化學(xué)染色法是POX染色，其在鑒別ALL和ANLL上具有較高的檢測(cè)效能。在正常情況下，除分化差的原始粒細(xì)胞POX染色為陰性外，分化好的原始粒細(xì)胞至中性成熟粒細(xì)胞均為陽性反應(yīng)，且細(xì)胞越成熟，陽性反應(yīng)的程度越高；而淋巴系統(tǒng)的細(xì)胞均呈陰性反應(yīng)。但實(shí)際上ALL患者骨髓中可殘留少許原始粒細(xì)胞，故FAB分型規(guī)定ALL患者的POX陽性率<3%[7]。因此，POX染色可作為判斷白血病細(xì)胞類型的依據(jù)[10]，該方法的優(yōu)點(diǎn)是可以直接計(jì)算白血病細(xì)胞的陽性率，但是仍存在一些缺點(diǎn)，比如染色后涂片中的細(xì)胞結(jié)構(gòu)不如瑞氏染色清晰，陽性顆粒的覆蓋一定程度上干擾了對(duì)細(xì)胞的辨認(rèn)，故導(dǎo)致POX染色陽性率與實(shí)際情況存在差異，造成假陽性事件的發(fā)生；同時(shí)試劑失效將導(dǎo)致假陰性結(jié)果，由此說明該方法的準(zhǔn)確性有待提高[11]。

近幾年來流式細(xì)胞術(shù)在臨床上得到廣泛應(yīng)用及推廣，其原理主要是采用各類抗血細(xì)胞表面分化抗原的單克隆抗體，測(cè)定熒光染料的熒光強(qiáng)度以獲取血細(xì)胞各種抗原水平。臨床上一般將該方法用于白血病及淋巴瘤的免疫分型，該方法具有分析速度快、重復(fù)性好、靈敏度高、特異性強(qiáng)等優(yōu)勢(shì)[12]。在微小殘留和混合型白血病中診斷價(jià)值極高[13]，但是流式細(xì)胞術(shù)在AL檢測(cè)分型中的效能如何，與POX染色的差異有無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，相關(guān)的報(bào)道較少。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，ANLL患者的細(xì)胞POX染色與cMPO流式細(xì)胞術(shù)的陽性率對(duì)比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，其中cMPO流式細(xì)胞術(shù)的陽性率較高；而ALL患者分別采用POX染色檢測(cè)MPO及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)cMPO，其中POX染色陽性率較高，后證實(shí)該病例POX染色結(jié)果為假陽性。由此說明POX染色檢測(cè)MPO的準(zhǔn)確度明顯低于cMPO流式細(xì)胞術(shù)[14]。

同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)，ALL與ANLL患者POX染色與cMPO流式細(xì)胞術(shù)的陽性積分對(duì)比，差異亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，與陳姣等[15]研究結(jié)果一致。由此說明以上兩種方法檢測(cè)髓系白血病細(xì)胞陽性程度不存在差異。目前國外研究發(fā)現(xiàn)，cMPO流式細(xì)胞術(shù)與POX染色檢測(cè)的一致性有待進(jìn)一步大樣本的研究；POX染色陰性的患者并不說明其白血病細(xì)胞中不存在MPO，需用cMPO流式細(xì)胞術(shù)復(fù)核[16]。相關(guān)研究報(bào)道，POX染色法與cMPO流式細(xì)胞術(shù)可相互補(bǔ)充、相互印證[17]。

綜上所述，細(xì)胞POX染色與cMPO流式細(xì)胞術(shù)的陽性率與陽性積分在AL診斷中的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，前者具有成本低、儀器依賴性小、在基層醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室可操作等特點(diǎn)；而后者靈敏度高、特異性強(qiáng)，但成本較高，且對(duì)操作者具有較高的要求。筆者認(rèn)為兩種方法聯(lián)合應(yīng)用才能起到相互補(bǔ)充的作用，繼而為血液系統(tǒng)疾病的診斷提供客觀依據(jù)。