張恒，何靜，張小彥，張樹衡，李彥湘，張金花，程永，李紅磊

(1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)院，甘肅 蘭州 730070；2.先正達(中國)投資有限公司，上海 200120)

枸杞(Lyciumbarbarum)是茄科多年生灌木，其果實、葉片、根系都是傳統(tǒng)中藥[1]，具有很高的藥用價值和食用價值.枸杞中的主要成分具有抗癌[2-3]、抗氧化[4-5]、提高代謝、控制體質(zhì)量、保護視力、增強免疫等多種醫(yī)療與保健功能[6-9].隨著大眾對枸杞保健功能的了解，種植枸杞的經(jīng)濟效益日漸上升，在甘肅、寧夏、青海等地均種植有大面積的枸杞[10-11].此外，枸杞還有很高的生態(tài)價值，具備很強的抗逆性與碳匯潛力，在鹽堿干旱地區(qū)能正常生長發(fā)育，可有效改善次生鹽漬化土地土壤質(zhì)量[12-13].因此，枸杞即可作經(jīng)濟樹種，也可作防護樹種.但枸杞的專生病蟲害種類豐富、發(fā)生頻率高[14]，嚴重影響枸杞的生態(tài)效益和相關(guān)產(chǎn)品質(zhì)量，同時限制干旱荒漠地區(qū)的生態(tài)建設(shè)，給種植企業(yè)和農(nóng)戶造成很大的經(jīng)濟損失.

根腐病作為一種土傳病害，具有很強的傳染性[15].其危害較大，致病性強，易造成大片的植株死亡[16]，導(dǎo)致嚴重的經(jīng)濟損失[17-19].枸杞根腐病主要危害枸杞植株根部及莖基部[20].病情嚴重時，根部腐爛發(fā)黑，地上部逐漸枯萎，最終造成全株死亡.有關(guān)根腐病的主要病原菌，諸多研究說法不一[21-22]，其中腐皮鐮刀菌(Fusariumsolani)是黃連[23]、黃芪[24]、梨樹[25]、波羅蜜[26]等多種經(jīng)濟作物根腐病的優(yōu)勢致病菌，已有研究表明腐皮鐮刀菌(Fusariumsolani)是枸杞根腐病的主要致病菌[27].目前，化學(xué)防治因見效快、操作簡單等優(yōu)點，仍作為根腐病的主要防治手段，被廣泛應(yīng)用.但因我國田間農(nóng)藥利用率低，種植戶常依靠增加用藥次數(shù)和用藥量來提高防治效果[28]，缺乏科學(xué)指導(dǎo).本研究以常用殺菌劑12%咯菌腈、500 g/L噻菌靈、250 g/L咪鮮胺、22%抑霉唑、1%申嗪霉素和25%氰烯菌酯等8種殺菌劑為供試藥劑，對腐皮鐮刀菌進行室內(nèi)毒力測定，并開展盆栽防效試驗，以篩選枸杞根腐病最佳防治藥劑，為有效防治枸杞根腐病，科學(xué)用藥提供參考借鑒.

1 材料與方法

1.1 供試材料

1.1.1 供試菌種 腐皮鐮刀菌(Fusariumsolani)由甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)森保實驗室提供，分離自枸杞根腐病病株，試驗前經(jīng)活化處理.

1.1.2 供試枸杞 寧杞1號樹齡2 a實生苗.

1.1.3 供試藥劑 試驗所用供試藥劑如表1所示.

表1 供試藥劑一覽表

1.2 試驗方法

1.2.1 藥劑室內(nèi)毒力測定 采用菌絲生長速率法[29].在無菌條件下，將各殺菌劑分別用無菌水稀釋至所需濃度，待滅菌的PDA培養(yǎng)基冷卻至45～50℃時，加入藥劑并充分搖勻，制成含藥培養(yǎng)基備用.用打孔器(D=6 mm)在距供試菌株菌落中心2～3 cm的區(qū)域內(nèi)打取菌餅，用鑷子(每次接種前，蘸取酒精并在火焰上加熱消毒)挑取菌餅接種在含藥PDA平板中央，置于25 ℃恒溫箱中倒置培養(yǎng)6～7 d，待對照組菌落長至整個平板的3/4時，采用十字交叉法測量菌落直徑(mm)，求其平均值，按照以下公式計算供試藥劑在不同質(zhì)量濃度下的菌絲生長抑制率.

以藥劑質(zhì)量濃度的對數(shù)值及對應(yīng)的菌絲生長抑制率的幾率值作回歸分析，得出各處理的抑制率幾率值(y)與質(zhì)量濃度對數(shù)(x)之間的毒力回歸方程、EC50值和相關(guān)系數(shù).

表2 8種殺菌劑處理濃度

1.2.2 盆栽藥效試驗 試驗地設(shè)在甘肅省蘭州市安寧區(qū)甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)院經(jīng)濟林教研試驗基地，采用隨機區(qū)組，利用自然光照和溫度模擬大田環(huán)境，按4 500株/hm2模擬大田種植密度設(shè)置殺菌劑質(zhì)量濃度(表3)，共設(shè)4個處理(含對照)，每處理3個小區(qū)，每小區(qū)4株，共計枸杞48株.將腐皮鐮刀菌接種于PDA培養(yǎng)基上，于28 ℃，濕度為40%的黑暗條件下培養(yǎng)7 d后，在無菌環(huán)境中，加入適量無菌水刮下PDA培養(yǎng)基上的菌絲與孢子，四層紗布過濾后6 000 r/min離心，收集孢子，用無菌水調(diào)制成腐皮鐮刀菌孢子懸浮液，通過血球計數(shù)法確定孢子懸浮液為1×106個/mL.枸杞移栽前經(jīng)傷根處理后，每株分別用500 mL孢子懸浮液進行灌根處理.待植株開始發(fā)病后，用供試殺菌劑進行灌根防治，以蒸餾水為對照.

表3 室外盆栽試驗藥劑使用量

分別于2019年8月9日和8月24日施藥,間隔15 d，共2次.第1次用藥前1 d和用藥后15 d，以及第2次用藥后15 d調(diào)查每株枸杞黃化葉片數(shù)占整個植株總?cè)~片數(shù)的比例及根的腐爛程度并做記錄.枸杞根腐病病情分級標準：0級：葉片均無黃化，根系未發(fā)??；1級：黃化葉片數(shù)占總?cè)~片數(shù)0～25%，根系腐爛在5%以下；2級：黃化葉片數(shù)占總?cè)~片數(shù)26%～50%，根系腐爛程度在6%～15%；3級：黃化葉片數(shù)占總?cè)~片數(shù)51%～75%，根系腐爛在16%～30%；4級根系腐爛在31%～45%：黃化葉片數(shù)占總?cè)~片數(shù)76%～100%，根系腐爛在45%以上.按下式計算病情指數(shù)與防治效果[30].

式中：PT0為藥劑處理的藥前病情指數(shù)；PT1為藥劑處理的藥后病情指數(shù)；CK0為空白對照的藥前病情指數(shù)；CK1為空白對照的藥后病情指數(shù).

2 結(jié)果與分析

2.1 供試殺菌劑對枸杞根腐病病原菌的室內(nèi)毒力

由8種殺菌劑對枸杞根腐病的室內(nèi)毒力測定結(jié)果(表4)可知，12%咯菌腈對腐皮鐮刀菌的抑制效果最強，EC50值僅為1.333 6 mg/L，其余7種殺菌劑對腐皮鐮刀菌的抑制效果由強到弱依次為500 g/L噻菌靈、250 g/L咪鮮胺、22%抑霉唑、1%申嗪霉素、25%氰烯菌酯、250 g/L嘧菌酯、2%春雷霉素，EC50值分別為1.761 7 、1.901 7、17.767 4、135.039 3、361.403 1、24 064.751 5、83 228.794 4 mg/L.12%咯菌腈、500 g/L噻菌靈、250 g/L咪鮮胺對腐皮鐮刀菌有較強的抑制效果，EC50值均在2 mg/L以下，進一步進行室外盆栽試驗.25%氰烯菌酯、250 g/L嘧菌酯、2%春雷霉素的EC50值都在360 mg/L以上，對腐皮鐮刀菌的抑制效果較差.

表4 8種殺菌劑對腐皮鐮刀菌的室內(nèi)毒力

2.2 供試殺菌劑對枸杞根腐病的盆栽藥效

由12%咯菌腈、250 g/L咪鮮胺、500 g/L噻菌靈3種供試殺菌劑對枸杞根腐病的盆栽防效試驗結(jié)果(表5)可知，在第一次用藥后15 d，3種供試藥劑對枸杞根腐病均具有一定的防治效果，且差異不顯著.其中以12%咯菌腈的防治效果最好，達66.66%.在兩次用藥后15 d，3種供試藥劑的防治效果均有不同程度的提升，其中，以12%咯菌腈對枸杞根腐病的防治效果最好，防效達85.92%，顯著高于250 g/L咪鮮胺和500 g/L噻菌靈處理.

表5 供試殺菌劑對枸杞根腐病的盆栽藥效防治

3 討論與結(jié)論

本研究采用菌絲生長速率法，就常用8種殺菌劑對腐皮鐮刀菌進行了室內(nèi)毒力測定，其抑制效果由強到弱依次為：12%咯菌腈、500 g/L噻菌靈、250 g/L咪鮮胺、22%抑霉唑、1%申嗪霉素、25%氰烯菌酯、250 g/L嘧菌酯、2%春雷霉素.12%咯菌腈是一種廣譜性苯基吡咯類殺菌劑，對辣椒[31]、獼猴桃[32]、馬鈴薯[33]等農(nóng)產(chǎn)品的真菌病害均有防治作用.已有報道稱咯菌腈能夠高效的抑制鐮刀菌的生長[34]，本研究結(jié)果表明，12%咯菌腈對腐皮鐮刀菌有較好的抑制作用，EC50值為1.333 6.8種供試殺菌劑的相關(guān)性系數(shù)均在0.9以上，表明各殺菌劑的毒力回歸方程兩變量線性關(guān)系密切，試驗可用.

12%咯菌腈、250 g/L咪鮮胺、500 g/L噻菌靈對枸杞根腐病的盆栽防效試驗顯示3種殺菌劑對枸杞根腐病均有一定防治效果，以12%咯菌腈對枸杞根腐病的防治效果最好.賈嬌等[35]發(fā)現(xiàn)10%咯菌腈懸浮種衣劑對鐮刀菌引起的玉米根腐病防治效果最好，防效達81.26%.潘龍其等[36]通過盆栽試驗發(fā)現(xiàn)50%咯菌腈對鐮刀菌引起的紫花苜蓿根腐病的防治效果最好，防效達69.42%.本研究中，12%咯菌腈對枸杞根腐病的防治效果最好，最高達到85.92%，可作為防治枸杞根腐病的推薦藥劑.

目前常用于防治枸杞根腐病的化學(xué)藥劑多為多菌靈、甲基托布津等苯并咪唑類殺菌劑[37].其作用位點單一，預(yù)期產(chǎn)生抗藥性的風(fēng)險較高[38].本研究中12%咯菌腈在對腐皮鐮刀菌的室內(nèi)毒力和盆栽防效均表現(xiàn)最好，可作為生產(chǎn)中枸杞根腐病防治的輪換藥劑與常用的苯并咪唑類殺菌劑交替使用，以提高防效，防止病原菌產(chǎn)生耐藥性.