李卓
摘要:做好對菌種的保護(hù)與管理工作,主要目的在于保護(hù)菌株,并保留其自身具備的遺傳性特點(diǎn)。本文以微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室菌種使用保存與管理為探討主題,從建立菌種登記和管理程度、嚴(yán)格管控菌種傳代、運(yùn)用科學(xué)方法保存常用菌種等方面分析實(shí)施使用管理與保護(hù)工作的具體方法,總結(jié)菌種管理工作的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn),為微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室菌種保管工作的優(yōu)化發(fā)展提供有效參考。
關(guān)鍵詞:微生物學(xué);菌種;使用
1建立菌種登記和管理程序
在保存與應(yīng)用菌種時(shí),工作人員應(yīng)全面了解并掌握材料的來源情況,明確其適應(yīng)的存儲方法,按照微生物實(shí)驗(yàn)室的規(guī)范要求做好菌種的管理工作,確保提升其在整個(gè)保存過程中的穩(wěn)定性。首先,管理人員應(yīng)準(zhǔn)確詳細(xì)地登記菌種的具體來源,著重研究材料的溯源問題,規(guī)范整個(gè)管理程序,對于每個(gè)菌種,為其設(shè)定獨(dú)有的編號,在將其正式納入到保存系統(tǒng)前,需初步記載菌種的各項(xiàng)基本信息。其次,加強(qiáng)管理菌種的接收工作,選用科學(xué)合理的方式保存菌種。對于普通的原始菌種,大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室使用的是玻璃瓶裝的凍干粉,且附帶有相應(yīng)的資料信息。在購買完所需的菌種后,工作人員應(yīng)嚴(yán)格記錄瓶的數(shù)量,以及上方標(biāo)識的名稱等關(guān)鍵信息,在適宜的位置上粘貼標(biāo)簽,然后將其直接放置于溫度適宜的容器內(nèi),進(jìn)行保存處理。在需要使用時(shí),再將其及時(shí)取出即可。通常情況下,普通瓶裝凍干粉的使用期限在五年左右。最后,是復(fù)活菌種環(huán)節(jié),在應(yīng)用原始菌種材料時(shí),實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)該預(yù)先復(fù)活處理凍干的菌種,其涉及到的作業(yè)流程主要包括以下幾部分:在初始階段需要做好復(fù)活的準(zhǔn)備工作,采用無菌習(xí)慣,吸取適量的也,然后將其置于安瓶環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng),通過輕輕旋轉(zhuǎn),有效地融入液體與凍干粉,確保完全溶解菌種,接下來,將其向試管中進(jìn)行轉(zhuǎn)移,參照菌種所屬的類型,以及所需的生存條件,針對性的調(diào)整其所處環(huán)境,確保菌種復(fù)活后,得到良好的培養(yǎng)條件。在菌種復(fù)活的實(shí)際生長過程中,很可能會發(fā)生液體渾濁等現(xiàn)象,因而在實(shí)際培養(yǎng)的階段內(nèi),若出現(xiàn)嚴(yán)重的感染問題,則應(yīng)采用有效的滅菌技術(shù)處理被污染的培養(yǎng)物,明確導(dǎo)致出現(xiàn)污染現(xiàn)象的具體原因,分離菌類,重新篩選菌落[1]。
2嚴(yán)格管控菌種傳代工作
在我國有關(guān)的管理制度中,對微生物菌種傳代與保存的全流程作業(yè)規(guī)范提出了明確要求,要切實(shí)保障菌種傳代工作的順利完成,需重點(diǎn)把握以下操作要點(diǎn):首先,是復(fù)溶與接種處理菌種,工作人員在對其進(jìn)行培養(yǎng)時(shí),應(yīng)嚴(yán)格參照說明書上標(biāo)明的具體要求,完成對菌種的復(fù)壯處理后,向平板上予以直接轉(zhuǎn)移,營造適宜的室溫環(huán)境,培養(yǎng)菌種。然后,是轉(zhuǎn)移和分離單個(gè)菌落,以此形成第二代菌落。在鑒定菌種的過程中,工作人員還需運(yùn)用適宜的技術(shù)方法,在第一時(shí)間內(nèi)對菌種進(jìn)行特性鑒定,然后從中選擇出適宜的菌落,妥善轉(zhuǎn)移并放置到甘油冷凍管內(nèi),作為工作菌種。在傳代操作的整個(gè)過程中,第二代菌種是被從正常保存的菌種,第三代菌種則為工作菌種。一般情況下,工作人員需要冷凍保存處理二代菌種,選擇并應(yīng)在適宜溫度的環(huán)境下培養(yǎng)三代菌種,并將其直接應(yīng)用到一系列的實(shí)驗(yàn)過程中。若是需要在低溫、冷凍等環(huán)境條件下保存第三代菌種,則應(yīng)及時(shí)滅菌處理二代菌種,并將其及時(shí)丟棄,在完成以上處理流程后,接下來培養(yǎng)第四代、第五代菌種時(shí),均需重新開啟安瓶。對于微生物實(shí)驗(yàn)工作來說,只有嚴(yán)格參照規(guī)范化系統(tǒng)化的菌種傳代作業(yè)流程,才能提高菌種的使用效率,確保其得到妥善科學(xué)的保存管理[2]。
3運(yùn)用科學(xué)方法保存常用菌種
保存處理微生物菌種,營造適宜的存儲環(huán)境,需要把握以下基本準(zhǔn)則:(1)保持環(huán)境不變的情況下,科學(xué)有效地保護(hù)菌種,避免其形態(tài)發(fā)生改變。(2)當(dāng)菌種處于不死狀態(tài)下時(shí),應(yīng)確保其仍然可以保持自身的生存活力,避免其出現(xiàn)死亡現(xiàn)象。(3)為菌種的純潔性提供可靠保障,避免外部環(huán)境、人為操作等因素污染菌種,亦或是使其活性受到不利影響。(3)菌種所屬的類型不同,其對環(huán)境提出的條件與要求也會存在較大差異,通常情況下,工作人員需結(jié)合實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的實(shí)際環(huán)境條件,了解并把握不同類型菌種的生長特點(diǎn),以及對應(yīng)的適宜有效的保存方式,做好對常用菌種的保存與管理工作,提高各項(xiàng)保管與存放方法的實(shí)效性[3]。
測定并識別菌落,根據(jù)所檢測菌種的技術(shù)資料,每個(gè)稀釋度取不同類型的代表菌落,通過涂片、染色、鏡檢等技術(shù)手段,確認(rèn)有效菌。計(jì)算菌落,以出現(xiàn)20-300個(gè)菌落數(shù)的稀釋度的平板為計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn),分別統(tǒng)計(jì)有效活菌數(shù)目和雜菌數(shù)目。
4總結(jié)菌種管理工作經(jīng)驗(yàn)
無論是在實(shí)驗(yàn)活動(dòng)過程中使用菌種,還是對其實(shí)施系統(tǒng)化的管理與保護(hù),均需要對質(zhì)量檢驗(yàn)工作的貫徹落實(shí)提高重視,對于管理人員而言,不僅需要明確具體的項(xiàng)目目標(biāo)與實(shí)踐方案,還需深入掌握完善化的作業(yè)規(guī)程,在完成一系列的使用、保存與管理工作后,及時(shí)地總結(jié)在自身實(shí)踐操作過程中的經(jīng)驗(yàn),以及存在的不足,這是全面提升微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室管理工作水平的有效措施,也是切實(shí)推動(dòng)菌種使用保存與管理工作高效發(fā)展的必要路徑。在正式實(shí)施各環(huán)節(jié)的管理工作時(shí),工作人員應(yīng)著重加強(qiáng)對有效期的把握,針對性地提高各環(huán)節(jié)的作業(yè)效率。通過實(shí)踐調(diào)研以及研究各項(xiàng)數(shù)據(jù)資料可以分析,甘油冷凍管的最佳冷凍時(shí)間在兩年左右,因此需結(jié)合實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際情況,以每兩年為基準(zhǔn),對其進(jìn)行一次轉(zhuǎn)接計(jì)算。要完成第四代的轉(zhuǎn)接工作,工作人員需要采用正確的方法長期保存一支凍干管。當(dāng)前,此種方法被廣泛應(yīng)用于酵母菌、細(xì)菌等菌種的傳代處理中,要實(shí)現(xiàn)對真菌等其他類型細(xì)菌的科學(xué)傳代管理,還需積極引入并應(yīng)用其他有效方法。
與其他微生物相比,菌種是一種特殊標(biāo)準(zhǔn)品,且在大部分標(biāo)準(zhǔn)說明下,許多品種的菌種被歸納為病原菌,因此,在實(shí)驗(yàn)室處理此類特殊菌種時(shí),需注重區(qū)分這些菌種和其他品種。例如,根據(jù)菌株對其他動(dòng)物的傳染力度、致病力等為參照點(diǎn),劃分并分類處理菌種,然后依托于專業(yè)的機(jī)構(gòu)給予的技術(shù)幫助,提高對菌種的保存與管理成效。在正常環(huán)境下,實(shí)驗(yàn)人員需在生物安全柜中運(yùn)用專業(yè)的技術(shù)手段操作處理裸露在外的菌種,并做好有關(guān)實(shí)驗(yàn)操作的記錄工作。
結(jié)束語:深入研究菌種的使用保存與管理方法,是全面提高微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)管理工作水平的必要路徑。在現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)創(chuàng)新發(fā)展的時(shí)代背景下,微生物處理技術(shù)獲得有利的發(fā)展契機(jī),推動(dòng)菌種保管工作的規(guī)范化、流程化發(fā)展,意在貼合當(dāng)前技術(shù)進(jìn)步的發(fā)展趨勢,穩(wěn)定優(yōu)化微生物研究工作質(zhì)量,助力我國科學(xué)研究工作的現(xiàn)代化發(fā)展。
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