林琳 應(yīng)媛媛
肺炎是臨床常見病癥之一,多見于兒童,支原體(Mp)感染是主要致病原因,在兒童社區(qū)獲得性肺炎(CAP)中占比高達(dá)10%~32%,且地區(qū)性爆發(fā)流行時(shí)可達(dá)到55%~80%,對(duì)患者危害極大[1]。由于Mp感染而引起的兒童肺炎,與其他病原體所引起的感染疾病在影像學(xué)、體征及癥狀等方面具有相似性,難以準(zhǔn)確區(qū)分,因此,實(shí)驗(yàn)室病原檢測(cè)成為兒童支原體肺炎(Mpp)的有效診斷方法之一[2]。對(duì)于血清學(xué)檢測(cè)Mp感染的診斷方法,臨床常用肺炎支原體抗體滴度檢測(cè),而RNA實(shí)時(shí)熒光恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(SAT)可對(duì)RNA病原準(zhǔn)確檢測(cè),研究發(fā)現(xiàn),兩種方法聯(lián)合檢測(cè)具有較高的準(zhǔn)確率[3]。本次選取442例患兒,研究?jī)和疢pp診治中肺炎Mp抗體滴度與RNA病原檢測(cè)的應(yīng)用價(jià)值。
1.1 一般資料選取我院于2018年1月~2020年12月診治的442例CAP患兒為研究對(duì)象,以實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)果為依據(jù),分為支原體肺炎組(M組)和非支原體肺炎組(非M組),分別為312例、130例。M組患兒納入標(biāo)準(zhǔn):①均出現(xiàn)呼吸道感染癥狀,以干咳、發(fā)熱等為主,經(jīng)實(shí)驗(yàn)室檢查確診為Mpp;②急性期、恢復(fù)期雙份血清抗體滴度升高≥4倍或單次血清抗體滴度≥1∶160;③資料完整;④家長(zhǎng)簽署知情同意書。非M組患兒納入標(biāo)準(zhǔn):①經(jīng)臨床確診為非Mpp的其他肺炎類型;②復(fù)查結(jié)果顯示血清Mp抗體滴度≤1∶80;③資料完整;④家長(zhǎng)簽署知情同意書。排除合并精神疾病者、中途退出者及合并血液系統(tǒng)疾病者。以入院前是否使用大環(huán)內(nèi)酯類藥物為依據(jù),將M組患兒分為使用組(規(guī)律用藥>3d)和未使用組(未用藥及用藥≤3d)。入組病例中,M組男173例,女139例,年齡1~16歲,平均(5.16±2.45)歲。非M組男72例,女58例,年齡8個(gè)月~11歲,平均(5.01±2.51)歲。兩組資料比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。本研究獲倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。
1.2 方法
1.2.1 抗體滴度檢測(cè) Mp抗體檢測(cè)試劑盒由日本富士瑞必歐株式會(huì)社提供,采用顆粒凝集法測(cè)定抗體滴度,分別設(shè)置為<1∶40、1∶40、1∶80、1∶160、1∶320、1∶640、>1∶640。
1.2.2 Mp-RNA檢測(cè) Mp核酸檢測(cè)試劑盒由上海仁度生物科技有限公司提供,于患兒入院當(dāng)天采集咽拭子,并放置于生理鹽水中,將等量裂解液加入,制作成待測(cè)樣本。加入內(nèi)標(biāo)后,應(yīng)用磁珠法對(duì)靶標(biāo)RNA進(jìn)行提取,對(duì)擴(kuò)增檢測(cè)液進(jìn)行配置后應(yīng)用核酸擴(kuò)增儀測(cè)定。采用4支Mp-RNA標(biāo)準(zhǔn)品,對(duì)待測(cè)樣本進(jìn)行定量分析。
1.3 觀察指標(biāo)①對(duì)比兩組抗體滴度分布情況及Mp-RNA檢測(cè)結(jié)果;②分析M組Mp-RNA與抗體滴度檢測(cè)結(jié)果;③分析M組不同檢測(cè)方法對(duì)陽性率的影響因素;④分析不同檢測(cè)方法對(duì)不同病程患兒的檢測(cè)結(jié)果;⑤分析Mp-RNA檢測(cè)在Mpp療效評(píng)估及短期復(fù)發(fā)診斷中的意義。
1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS 19.0軟件分析,計(jì)量、計(jì)數(shù)資料分別用±s、%表示,分別經(jīng)t、χ2檢驗(yàn),P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2.1 兩組Mp-RNA檢測(cè)結(jié)果及抗體滴度分布對(duì)比M組抗體滴度陰性(<1∶160)64例,占比20.51%;陽性(≥1∶160)248例,占比79.49%??贵w滴度陽性率隨病程增加呈升高趨勢(shì),Mp-RNA陽性率隨抗體滴度升高呈下降趨勢(shì);于4~6d后復(fù)查,抗體滴度<1∶160患者的滴度均升高≥4倍;以抗體滴度1∶160為截點(diǎn)分組,Mp-RNA陽性率比較,<1∶160組(90.63%)高于>1∶160組(72.85%),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=8.810,P<0.05)。于4~6d后復(fù)查結(jié)果顯示,非M組有5例Mp-RNA陽性,占比為3.85%,見表1。
表1 兩組Mp-RNA結(jié)果及抗體滴度分布
2.2 M組Mp-RNA與抗體滴度檢測(cè)結(jié)果對(duì)比M組抗體滴度陽性率(≥1∶160)為79.49%(248/312),Mp-RNA陽性率為77.24%(241/312),未見明顯差異(χ2=0.463,P>0.05)。兩種檢測(cè)方法陽性一致率為58.65%(183/312),陰性一致率為1.92%(6/312),見表2。
表2 M組Mp-RNA與抗體滴度檢測(cè)結(jié)果比較(n)
2.3 M組不同方法檢測(cè)陽性率的影響因素與<3歲組、>10歲組比較,4~6歲組與7~9歲組兩種檢測(cè)方法的陽性率均更高,但整體年齡分組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與病程較短組比較,病程較長(zhǎng)組的抗體滴度陽性率更高,Mp-RNA陽性率更低(P<0.05);入院前藥物使用對(duì)兩種檢測(cè)方法的陽性率影響差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表3。M組入院時(shí)Mp-RNA檢測(cè)為陰性共73例,其中14例患兒于3~7d后復(fù)查,12例復(fù)查結(jié)果為陰性,2例轉(zhuǎn)陽性。
表3 M組不同方法檢測(cè)陽性率的影響因素
2.4 不同檢測(cè)方法對(duì)不同病程患兒的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)用單一方法檢測(cè)時(shí),病程較長(zhǎng)組抗體滴度陽性率較高,而病程較短組Mp-RNA陽性率較高。聯(lián)合檢測(cè)以任意一種陽性結(jié)果為感染判斷標(biāo)準(zhǔn),除4~7d組陽性率為95.71%,其余病程組陽性率均為100%。8~14d組兩種檢測(cè)方法均陽性率最高,其次是4~7d組,見表4。
表4 不同病程組不同檢測(cè)方法的陽性率比較[n(%)]
2.5 Mp-RNA檢測(cè)在Mp療效評(píng)估及短期復(fù)發(fā)診斷中的意義M組78例患兒入院Mp-RNA結(jié)果為陽性,住院時(shí)間為(6.63±2.31)d,期間規(guī)范用阿奇霉素,于出院當(dāng)天復(fù)查,結(jié)果顯示,Mp-RNA轉(zhuǎn)陰27例(34.62%),轉(zhuǎn)陰患兒入院前大環(huán)內(nèi)酯類藥物服用時(shí)間為(4.32±3.01)d。Mp-RNA定量檢測(cè)結(jié)果顯示,83.33%(65/78)的患兒復(fù)查結(jié)果下降,拷貝數(shù)下降至原來的16.8%;51例未轉(zhuǎn)陰者首次測(cè)定RNA拷貝數(shù)高于轉(zhuǎn)陰者;43.14%(22/51)的患兒首次拷貝數(shù)>106拷貝數(shù)/ml,轉(zhuǎn)陰組為25.93%(7/27)。
M組中29例患兒出院后1個(gè)月再次入院,首次診斷Mpp與再次入院時(shí)間間隔為(18.29±7.98)d, 首次入院抗體陽性率為62.07%(18/29),Mp-RNA陽性率為86.21%(25/29),再入院時(shí)抗體陽性率為100%,且抗體滴度均>1∶640,Mp-RNA陽性率為27.59%(8/29)。
Mp是目前已知獨(dú)立生活最小的一種病原微生物,可由鼻、喉、咽等吸入氣溶膠或飛沫等進(jìn)行傳播,人群普遍易感,多見于學(xué)齡兒童、青少年等,以5~10歲為高發(fā)年齡。兒童一旦感染Mp,依據(jù)身體情況不同可出現(xiàn)不同臨床癥狀,且癥狀輕重程度具有一定差異,多數(shù)以高熱為主要表現(xiàn),體溫可達(dá)到39℃,也有部分患兒無發(fā)熱,但多見咳嗽、咳痰等,偶見惡心、斑丘疹及嘔吐等癥狀。Mp侵入呼吸道后,可附著于上皮細(xì)胞,對(duì)黏膜纖毛的清除作用產(chǎn)生抵抗,進(jìn)而引起機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng),損傷呼吸道上皮[4~6]。以往,臨床多采用X線、CT等診斷兒童Mpp,但準(zhǔn)確度較差,且患兒配合度不高。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)不斷發(fā)展,Mp抗體滴度、RNA抗原檢測(cè)等均得到廣泛應(yīng)用,不僅能早期診斷兒童Mpp,還可用于治療及復(fù)發(fā)評(píng)估,應(yīng)用價(jià)值較高[7]。
本研究發(fā)現(xiàn),M組Mp-RNA陽性率、抗體滴度陽性率均高于75%,提示兩種方法單一檢測(cè),可取得相近的診斷效率,對(duì)于疾病診斷具有較高的準(zhǔn)確度。相較于病程較短組,病程較長(zhǎng)組抗體滴度陽性率明顯更高,而抗體滴度為1∶160患兒的平均病程為5.89d,提示對(duì)于發(fā)病時(shí)間為1~7d患兒,單次抗體滴度檢測(cè)結(jié)果為1∶160進(jìn)行診斷,可能存在一定假陰性情況,需聯(lián)合病原檢測(cè),以提高診斷準(zhǔn)確性。首次抗體滴度檢測(cè)結(jié)果為≤1∶80的M組患者,4~6d后可見抗體滴度升高,而非M組患兒未見明顯升高,提示Mp感染后,對(duì)于免疫力正常的兒童來說,短時(shí)間內(nèi)可出現(xiàn)抗體滴度明顯升高情況,由此,應(yīng)用雙份血清對(duì)兒童Mpp進(jìn)行診斷,可提高診斷準(zhǔn)確度。同時(shí),對(duì)于首次抗體滴度檢測(cè)結(jié)果較低患兒,考慮可能處于Mp感染早期,機(jī)體內(nèi)抗體仍然處于上升期或尚未產(chǎn)生抗體,應(yīng)當(dāng)結(jié)合病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果、臨床癥狀及抗體滴度變化情況等進(jìn)行綜合診 斷[8]。此外,本研究還發(fā)現(xiàn),29例再次入院患兒的首次入院Mp-RNA陽性率為86.21%,明顯高于M組平均值,而復(fù)查未轉(zhuǎn)陰患兒的早期Mp-DNA定量檢測(cè)結(jié)果也高于轉(zhuǎn)陰組,提示PCR病原學(xué)檢測(cè)中,早期載量高、早期陽性等均與疾病程度密切相關(guān),可作為兒童Mpp重癥病例的預(yù)警判斷因素。分析原因,SAT屬于新型分子生物學(xué)檢測(cè)方法的一種,相較于傳統(tǒng)PCR檢測(cè)方法,其診斷準(zhǔn)確度、敏感度均更高[9]。RNA僅在活菌體中存在,自身免疫、用藥等均可導(dǎo)致病原體死亡,或?qū)ζ浠钚援a(chǎn)生抑制,RNA降解、載量由此降低,因此對(duì)Mp-RNA進(jìn)行檢測(cè),對(duì)于兒童Mpp的診斷、治療、轉(zhuǎn)歸等均有較高的價(jià)值。早期進(jìn)行PCR病原學(xué)檢測(cè),有利于指導(dǎo)臨床合理制定治療方案[10]。
綜上所述,聯(lián)合檢測(cè)Mp抗體滴度及RNA病原,可為臨床診斷兒童Mpp及治療提供可靠依據(jù)。