陳 彥 孫 英

(首都醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院免疫學系，北京 100069)

2021年，mRNA疫苗占據(jù)世界頂尖科學家協(xié)會(World Laureates Association，WLA)全球發(fā)布的年度報告之首，并在MIT Technology Review 被評選為2021年“全球十大突破性技術”之一；與此同時，2021年拉斯克(The Lasker Awards)臨床醫(yī)學研究獎授予了在mRNA技術上做出開拓性貢獻的Katalin Karikó 與Drew Weissman(圖1),他們聯(lián)合發(fā)現(xiàn)的基于mRNA修飾的創(chuàng)新治療技術不但讓快速開發(fā)mRNA新型冠狀病毒疫苗成為可能，而且正在用于治療和預防一系列其他疾病[1]。mRNA疫苗又稱信使RNA(messenger RNA，mRNA)疫苗，是將合成的編碼蛋白質(zhì)抗原的mRNA序列遞送至體內(nèi)指導機體表達相應的蛋白質(zhì)，并誘導機體產(chǎn)生針對該蛋白的免疫應答以實現(xiàn)疾病預防和治療的目的。mRNA疫苗具有良好的安全性和靈活的生產(chǎn)工藝，被認為是開發(fā)新型治療手段的一個重要工具。本文將從mRNA疫苗的發(fā)展歷程、技術原理、疫苗遞送系統(tǒng)和mRNA 疫苗在臨床應用的情況等方面作一綜述。

圖1 Katalin Karikó[1]

1 臨床醫(yī)學研究獎

2021年拉斯克(The Lasker Awards)臨床醫(yī)學研究獎的獲獎者Katalin Karikó一生專注于mRNA的研究，但前期研究經(jīng)歷坎坷。在博士畢業(yè)后就在匈牙利科學院下屬的生物研究中心工作，由于沒有科研成果，30歲時被解雇。1989年，她加入賓夕法尼亞大學，因為拿不到經(jīng)費，沒有項目，也沒有成果，她又被降職。直到1997年，她遇到了剛在賓夕法尼亞大學成立了自己實驗室的Drew Weissmanm并開始mRNA疫苗合作研究，一起開發(fā)針對HIV/AIDS的mRNA疫苗。但是，Karikó將mRNA注射到小鼠體內(nèi)時產(chǎn)生了明顯的炎性反應。經(jīng)過深入分析，他們發(fā)現(xiàn)：這種合成的mRNA激活了Toll樣受體，這些受體能在第一時間對來自病原體的危險信號作出響應而引起炎癥發(fā)生，但通過重新編排mRNA的一個核苷酸-尿苷的化學鍵，創(chuàng)造出假尿苷的類似物，就可以防止機體將合成的mRNA視為敵人，這一重要研究成果發(fā)表在2005年的Immunity上。在新型冠狀病毒肺炎疫情中，他們聯(lián)合發(fā)現(xiàn)的基于mRNA修飾的創(chuàng)新治療技術不但讓快速開發(fā)新冠疫苗成為可能，并且由于mRNA疫苗在對抗新冠肺炎疫情中展現(xiàn)出的驚人保護效果，為其后續(xù)用于治療和預防一系列其他疾病奠定了一定基礎。

圖2 Drew Weissman[1]

2 mRNA疫苗發(fā)展的歷史進程

mRNA 疫苗是繼傳統(tǒng)疫苗(滅活疫苗、減毒活疫苗)和新型疫苗(亞單位疫苗和病毒載體疫苗)后的第三代疫苗，具有針對病原體變異反應速度快、生產(chǎn)工藝簡單、易規(guī)模化擴大和安全有效性高等特點。

在過去的30 年里，mRNA 疫苗研發(fā)已完成了基礎平臺的搭建。1987年，Malone等[2]率先發(fā)現(xiàn)將mRNA鏈和脂滴一起，可使mRNA被人體細胞吸收并合成蛋白。隨后，同一實驗室的研究證明青蛙胚胎也能吸收mRNA。這些研究表明導入機體細胞中的mRNA能夠指導表達出目的蛋白。1990年，Wolff等[3]將編碼β-半乳糖苷酶的mRNA成功在小鼠骨骼肌表達所編碼的酶，證明了體外轉(zhuǎn)錄mRNA 可在機體組織內(nèi)表達相應蛋白質(zhì)，為mRNA治療研究拉開了序幕。加之mRNA只需體外轉(zhuǎn)錄就可以人工合成，且造價低廉，從此后的十幾年里，眾多科學家和醫(yī)藥公司開始嘗試mRNA疫苗的研究，但后續(xù)的研究發(fā)現(xiàn)，人工合成的mRNA免疫的動物體內(nèi)會產(chǎn)生針對該核酸編碼抗原的免疫應答而影響其效應，而且mRNA自身不穩(wěn)定, 容易被RNA酶降解，這些問題又使其發(fā)展受到限制，使得當時很多嘗試開發(fā)mRNA疫苗的公司都放棄了對mRNA疫苗的研究。mRNA疫苗里程碑式的轉(zhuǎn)折始于匈牙利生物化學家Katalin Karikó和美國免疫學家 Drew Weissman把假尿苷加入到人工合成的mRNA，通過改變mRNA的密碼子從而幫助合成的mRNA躲過細胞的固有免疫防御，避免激活Toll樣受體所引起的免疫應答[4-5]，而且顯著增強了mRNA表達蛋白的能力。此后，mRNA結(jié)構(gòu)研究等相關技術得到了迅速發(fā)展。

21世紀初始，伴隨著化學合成、納米材料制造水平的提升，mRNA的制備過程和遞送技術的發(fā)展，mRNA在體內(nèi)的表達效率大大提高，mRNA本身的免疫原性也進一步降低，提高了安全性。自此，眾多大型藥企大舉向mRNA疫苗的應用進軍。2017年，Sahin等[6]首次報道了將針對多種抗原的個性化mRNA腫瘤疫苗應用于治療黑色素瘤患者的臨床試驗, 結(jié)果顯示13名受試者中有8名得到了有效治療, 并且1 年內(nèi)沒有復發(fā)。盡管如此，但mRNA疫苗一直未正式應用于臨床，而新冠疫情的出現(xiàn)加速了這一進程。2020年，美國Moderna和德國BioNTech公司的新型冠狀病毒mRNA疫苗通過美國食品藥品監(jiān)督管理局(Food and Drug Administration, FDA)緊急授權(quán)并開始免疫接種[7]，該項授權(quán)成為臨床應用方面的重大進展, 同時也在全球掀起了mRNA治療研究的熱潮。至此，mRNA疫苗是作為一種此前從未用于治療的技術，掀開了其在醫(yī)學發(fā)展史中的新篇章。

3 mRNA疫苗技術原理及制備過程

3.1 mRNA疫苗分類

mRNA疫苗分為自我擴增型(self-amplifying，SAM)以及非復制型(non-replicating)兩種類型。SAM mRNA疫苗的設計是將編碼病毒結(jié)構(gòu)的基因用外源靶蛋白基因(抗原基因)替換，即在保留了病毒基因組自我復制能力的同時又不能合成病毒蛋白，具有較好的安全性，且引起較強的免疫應答。非復制型的mRNA疫苗只含有體外轉(zhuǎn)錄好的編碼蛋白質(zhì)抗原的mRNA，優(yōu)點是結(jié)構(gòu)簡單, 但需要成熟的優(yōu)化工藝才能在較低的劑量誘發(fā)有效的免疫應答，且這種合成的mRNA在人體內(nèi)無法自我復制。

3.2 mRNA疫苗合成修飾

mRNA作為一種外源的核酸物質(zhì)，進入體內(nèi)后很容易被免疫系統(tǒng)識別和被核酸酶降解，為了保證mRNA疫苗的穩(wěn)定性和免疫活性，目前已開發(fā)了多種mRNA修飾技術，主要包括：① 通過“加帽法”增強mRNA的穩(wěn)定性和促進翻譯起始，以防止5′核酸外切酶對其降解；最近, Trilink公司研發(fā)出的CleanCap技術, 使得共轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生天然Cap1結(jié)構(gòu)成為可能。②在5′和3′ UTR 區(qū)域增加可調(diào)控序列，提高mRNA 轉(zhuǎn)譯率和延長mRNA 半衰期；③修飾3′ Poly (A)尾穩(wěn)定mRNA，增強蛋白質(zhì)翻譯；研究[8]表明，3′UTR的特異性修飾可通過影響脫腺苷率而減緩Poly(A) 尾的衰變。④修飾核苷酸，減少固有免疫激活；⑤優(yōu)化序列，選擇與tRNA同源的密碼子，提高翻譯率。

4 mRNA疫苗誘導免疫應答的機制

與傳統(tǒng)疫苗向人體注入減弱或滅活的病原體來觸發(fā)免疫反應不同，mRNA疫苗可指導體內(nèi)細胞合成某種蛋白質(zhì)或者蛋白質(zhì)片段，從而觸發(fā)機體的免疫應答。

4.1 mRNA疫苗所誘導的免疫應答

固有免疫是人體免疫系統(tǒng)的第一道防線，可以通過模式識別受體(pattern recognition receptor，PRR)識別病原相關模式分子(pathogen-associated molecular patterns，PAMP)，從而啟動免疫應答。mRNA疫苗作為外源的核酸物質(zhì)，表現(xiàn)出與病毒mRNA相似的特性。它可被抗原提呈細胞(antigen presenting cells,APCs)識別，激活Toll樣受體3(Toll like receptor 3, TLR3)、TLR7和TLR8等模式識別受體，促進APCs的成熟、促進炎性細胞因子和I型干擾素(interferon，IFN)的產(chǎn)生[8-9]。上述過程最終可誘導機體產(chǎn)生細胞和體液免疫應答，對機體產(chǎn)生預期的免疫保護效應。如果mRNA刺激的免疫應答過度則會使被刺激細胞分泌大量的I型干擾素，抑制mRNA的翻譯和促進mRNA的降解，從而下調(diào)目的蛋白的表達，對免疫應答產(chǎn)生負向的反作用[10-11]。這可能會對一些mRNA疫苗的應用產(chǎn)生負面影響。因此有必要根據(jù)不同的應用需求對mRNA免疫原性進行適度調(diào)控，從而有效提高疫苗的應用效果。

4.2 mRNA疫苗遞送系統(tǒng)

根據(jù)蛋白質(zhì)抗原需要表達的位置，可將mRNA疫苗進行系統(tǒng)給藥或者局部給藥，通常皮下和肌肉注射的局部給藥可以引起較強的免疫應答，方便進行預防接種；如果是治療性mRNA疫苗通常通過腹腔或者靜脈注射系統(tǒng)給藥，這些給藥方式都有助于刺激抗原提呈和啟動免疫應答。然而，給藥方式的不同將會使mRNA疫苗在體內(nèi)的代謝以及目的蛋白翻譯的效率受到影響。

RNA難以通過自由擴散的方式穿過細胞膜。因此，有效地將mRNA以高水平輸送到足量的細胞成為mRNA疫苗應用中的難題之一，而高特異性和高效的mRNA遞送系統(tǒng)也成為亟待解決的關鍵問題[12]。目前，科學家已經(jīng)研發(fā)了多種遞送載體，常用的載體包括樹突狀細胞(dendritic cell, DC)、魚精蛋白、多聚體載體和脂質(zhì)納米顆粒(lipid nanoparticles，LNPs)等。

DCsmRNA遞送系統(tǒng)主要是通過體外途徑將編碼肽、蛋白質(zhì)等其他抗原的mRNA轉(zhuǎn)染到DC中，然后將轉(zhuǎn)染的的DCs回輸至機體，啟動抗原特異性免疫應答，在這個過程中單獨的DCsmRNA遞送系統(tǒng)就可以產(chǎn)生較高的遞送效率，現(xiàn)已被廣泛應用于動物模型和臨床研究[13-14]。此外，由于主要介導細胞免疫應答，其臨床應用以腫瘤治療為主。

魚精蛋白是通過將mRNA分子絡合成納米級別的核酸顆粒，以阻斷RNA酶對mRNA降解；但受二者組合比例和結(jié)合緊密性的影響，采用這種方式制備的mRNA疫苗的蛋白表達效率會受限。近年來，魚精蛋白mRNA給藥系統(tǒng)被廣泛應用于臨床試驗，并在狂犬病、肺癌等臨床治療中取得了較好的效果[15-16]。

在多聚物載體材料中，聚乙烯亞胺(polyethylenimine ,PEI)是使用最為廣泛的mRNA疫苗載體；大分子量的PEI更適合作為自我復制性mRNA疫苗的載體，但它同時會帶來較強的不良反應，且其對mRNA的結(jié)合非常穩(wěn)定以至于無法順利的將mRNA釋放至細胞質(zhì)；而小分子量的PEI轉(zhuǎn)染能力有限。除了PEI外還有其他的分子被用來作為載體，例如聚甲基丙烯酸二甲氨基乙酯(PDMAEMA)等。

脂質(zhì)納米顆粒(lipid nanoparticles,LNP)是目前最先進的遞送系統(tǒng)，mRNA處于LNP的核心位置，不易被核酸酶降解，且LNP的親脂性使其易與宿主細胞膜融合，進而以內(nèi)吞的方式將mRNA傳遞至細胞內(nèi)。在早期的研究中，LNP的安全性就已在siRNA的傳遞中證明。Geall等[17]的報道顯示由LNP遞送的SAM RNA疫苗中的mRNA在小鼠體內(nèi)的表達水平明顯高于裸mRNA，并能有效誘導CD4+/CD8+T介導的免疫應答。此外，根據(jù)靶向不同疾病的需求，LNPmRNA可以通過采用不同方式的給藥策略達到激發(fā)不同區(qū)域的免疫效應。近期的新冠疫苗大規(guī)模臨床試驗表明，LNP作為mRNA 的遞送載體，其安全性和遞呈效果較理想。

綜上，與傳統(tǒng)疫苗相比，mRNA疫苗具有獨特的優(yōu)勢：①相比需要入核的DNA, mRNA不進入細胞核內(nèi)部，只需要在細胞質(zhì)內(nèi)表達目的蛋白；②mRNA 本身不具備感染性，亦能通過正常細胞途徑降解，并不存在感染或插入突變的風險。③mRNA可以表達特定序列的靶蛋白誘導特異性免疫反應，序列修飾/優(yōu)化可以使mRNA的穩(wěn)定性和翻譯效率顯著提高；④mRNA設計、合成方法簡便，易于在體外開展大規(guī)模生產(chǎn)，有利于傳染病的防控[18]。

5 mRNA疫苗與臨床應用

隨著 mRNA制備技術和應用領域的不斷拓展，多種mRNA 疫苗在傳染性疾病以及腫瘤等臨床前及臨床研究階段取得了較好的結(jié)果。

5.1 傳染性疾病mRNA疫苗

針對傳染性疾病疫苗生產(chǎn)的最大難點是在短時間內(nèi)獲得足量的疫苗, 而mRNA疫苗可以解決這一問題。

首個用于疾病預防的mRNA疫苗是流感疫苗[19]。由于流感病毒的血凝素和神經(jīng)氨酸酶極易發(fā)生變異，而且缺乏可以有效對抗此種突變病原體的廣譜性疫苗，Modena TX 公司以LNP為載體，率先完成了H10N8 和H7N9 流感疫苗的Ⅰ期臨床試驗[20]，結(jié)果顯示mRNA疫苗對甲型流感具有明顯的預防保護作用，且在人體內(nèi)具有較強的免疫原性、較好的安全性和耐受性。Meyer等[21]研發(fā)的針對2種編碼埃博拉病毒(Ebola virus, EBOV)糖蛋白的 mRNA疫苗注射給EBOV感染的豚鼠后，感染EBO豚鼠體內(nèi)可產(chǎn)生EBOV 糖蛋白特異性IgG抗體以及EBOV中和抗體，并且豚鼠的存活率可達100%。Roth等[22]以Ⅰ型登革病毒(Dengue virus，DENV)非結(jié)構(gòu)蛋白作為目的抗原設計了一個LNP修飾的編碼DENV1-NS的 mRNA疫苗，將其免疫HLA Ⅰ類分子轉(zhuǎn)基因小鼠后，發(fā)現(xiàn)能夠誘導該小鼠產(chǎn)生病毒特異性CD8+T細胞，發(fā)揮保護作用。Pardi等[23]采用針對寨卡病毒prM-E (pre-membrane and envelope)的mRNA-LNPs免疫小鼠和非人靈長類動物，結(jié)果顯示mRNA-LNPs單次免疫即可快速誘導產(chǎn)生高效價中和抗體以及持久的免疫效應。Modena TX 公司針對寨卡病毒的非復制型mRNA-LNPs 疫苗已完成Ⅰ期臨床試驗，但結(jié)果尚未發(fā)布。CureVac AG 公司研制的狂犬病疫苗CV7201 已完成 Ⅰ 期臨床試驗[24]。臨床前研究[25]顯示，該疫苗對小鼠和豬表現(xiàn)出了良好的免疫原性和保護效果，皮下免疫顯示與已上市的Rabipur 疫苗具有類似的效果。另有臨床試驗將編碼有HIV-1抗原、人類巨細胞病毒(cytomegalovirus，CMV)pp65抗原的mRNA在體外轉(zhuǎn)染自體DC, 然后將自體DC再回輸個體, 以激活特異性的細胞免疫，結(jié)果同樣顯示mRNA具有安全性并能引起T細胞介導的免疫應答。

由重癥急性呼吸綜合征冠狀病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2) 引起的新型冠狀病毒肺炎(COVID-19)正在全球蔓延，嚴重影響了人類生命健康和社會穩(wěn)定，接種疫苗是控制疫情暴發(fā)和病毒傳播的有效防治手段。面對突發(fā)的全球性COVID-19疫情, 多個國家采用多種技術平臺以前所未有的速度開始了疫苗的研發(fā)。由輝瑞和BioNTech研發(fā)的針對具有融合前構(gòu)象的新冠病毒刺突蛋白的BNT162b2疫苗的Ⅲ期臨床試驗結(jié)果表明[26-27]其預防SARS-CoV-2的有效性可高達95%，因此，BNT162b2疫苗在 2020年12月11日成為第一個獲得FDA批準的SARS CoV-2 mRNA疫苗, 并確定劑量為相隔21 d的兩次肌肉注射, 每次30 μg。 2020年12月18日, Moderna 公司研發(fā)的COVID-19 mRNA-1273疫苗獲得FDA頒發(fā)的緊急使用授權(quán)，允許美國18歲及以上的個人使用Moderna COVID-19疫苗, 并確定劑量為相隔28 d的兩次肌肉注射, 每次100 μg, 成為第2個獲批使用的mRNA疫苗。mRNA-1273疫苗的mRNA 編碼新冠病毒全長S 蛋白序列，為提高穩(wěn)定性, 抗原蛋白986和987號殘基被脯氨酸(S-2P)代替，遞送系統(tǒng)為LNPs，Ⅲ 期臨床試驗結(jié)果顯示該疫苗的有效率高達 94.1%, 并具有較好的安全性[7]。隨后，德國Biontech SE 公司的mRNA-LNPs 疫苗分別在德國和美國進入臨床Ⅰ/Ⅱ期試驗。該臨床試驗主要考察其安全性、耐受性、免疫原性等。中國在應對COVID-19疫情時采用的疫苗研發(fā)5 種技術策略也包括了新冠病毒mRNA疫苗，目前該疫苗處于研發(fā)之中，正在海外進行Ⅲ期臨床試驗。

5.2 mRNA腫瘤疫苗

mRNA腫瘤疫苗療法始于Conry等[27]通過肌肉注射癌胚抗原mRNA, 使小鼠獲得了抗腫瘤的免疫反應。mRNA腫瘤疫苗常用的臨床方法有樹突狀細胞 mRNA腫瘤疫苗、mRNA腫瘤疫苗直接注射、外周血細胞mRNA腫瘤疫苗、編碼嵌合抗原受體(chimeric antigen receptor, CAR)的mRNA等。

樹突狀細胞mRNA腫瘤疫苗是指將抗原 mRNA轉(zhuǎn)染DC，使其遞呈抗原, 從而激發(fā)機體特異性免疫應答。該疫苗自身的免疫原性不僅能夠促使樹突狀細胞成熟, 并由此促進細胞和體液免疫應答,還可能會減少mRNA疫苗自身的翻譯, 從而減少樹突狀細胞抗原的呈遞。目前, 已開展了針對肺癌、黑色素瘤、胰腺癌等多種腫瘤樹突狀細胞疫苗的臨床試驗。其缺點是需要從患者的外周血中分離樹突狀細胞進行體外培養(yǎng), 這使得整個制作周期較長，若改良為采用外周血細胞作為mRNA疫苗的載體[28]，就能夠節(jié)省從外周血中分離并培養(yǎng)樹突狀細胞的時間。目前, 編碼抗人間皮素基因的CAR mRNA通過電穿孔方式轉(zhuǎn)染的外周血淋巴細胞已經(jīng)被試用于卵巢癌的治療[29]。編碼CAR的mRNA是將編碼 CAR的mRNA導入T細胞, 在T細胞膜表面表達嵌合抗原受體，從而識別并攻擊特定癌細胞。與傳統(tǒng)的CAR-T 療法相比，編碼CAR的mRNA可以介導瞬時CAR表達，從而減少不良反應的產(chǎn)生。mRNA疫苗也能激活體內(nèi)原本輸入的CAR-T細胞，如通過在小鼠體內(nèi)注射CLDN6 mRNA疫苗促進樹突狀細胞表面CLDN6的表達, 能夠激發(fā)和促進CLDN6-CAR-T細胞的效能[30]。此外，mRNA腫瘤疫苗和其他腫瘤治療方式(如免疫檢查點抑制劑、化學療法和小分子靶點藥物等)聯(lián)合的組合療法如今也被廣泛使用。比如, 聯(lián)合使用PD-L1 沉默的siRNA和次要組織相容性抗原mRNA腫瘤疫苗治療血液系統(tǒng)疾病[31], 可以減少疫苗所受腫瘤微環(huán)境和免疫抑制因子的限制。

5.3 mRNA疫苗在其他疾病中的應用

目前mRNA疫苗在抗細菌和寄生蟲感染中也有應用。Lorenzi等[32]研發(fā)的編碼麻風分枝桿菌HSP65蛋白的 mRNA 疫苗，經(jīng)鼻內(nèi)給藥后可使小鼠免受結(jié)核分枝桿菌的感染，且通過鼻內(nèi)給藥的途徑可以減輕小鼠肺部的荷菌量和炎性反應改變，為控制實驗性結(jié)核病提供了一種有效的策略。Baeza等[33]發(fā)現(xiàn)利用編碼瘧原蟲產(chǎn)生巨噬細胞遷移抑制因子同源物(plasmodium macrophage migration inhibitory factor, PMIF)的SAM 疫苗可以產(chǎn)生PMIF特異性免疫反應，降低了Th1相關炎性反應因子，增強了Tfh細胞和生發(fā)中心反應，增加了抗瘧原蟲抗體效價，以及T細胞的分化，從而獲得抗瘧疾感染的保護性免疫。此外，Krienke等[34]證明在由髓鞘少突膠質(zhì)細胞糖蛋白(MOG3555)肽免疫小鼠建立的多發(fā)性硬化的實驗性自身免疫性腦脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE) 的模型小鼠，在免疫后第7天和第10天接種MOG3555編碼的1-甲基偽尿嘧啶(m1Ψ)mRNA，可以通過誘導產(chǎn)生新的FOXP3+調(diào)節(jié)性T 細胞，抑制促進疾病發(fā)生的Th1、Th17和Th1/Th17細胞的產(chǎn)生，且對已確診EAE的小鼠接種該疫苗可防止疾病進一步進展，甚至可逆轉(zhuǎn)病理改變。該項研究提示，m1Ψ mRNA方法具有高度的靈活性、快速性和成本效益，這可能使疫苗個性化和不同自身抗原的組合成為自身免疫性mRNA疫苗研制的一個新方式。

6 小結(jié)與展望

隨著疫苗研發(fā)工作的不斷開展，mRNA 疫苗技術已日趨成熟。研究[33-34]顯示，mRNA 疫苗的保護效果優(yōu)于同種病毒的滅活疫苗、亞單位疫苗和病毒載體疫苗，而且目前的臨床和臨床前數(shù)據(jù)已展現(xiàn)出積極的應用前景，Katalin Karikó 和Drew Weissman共同獲得2021年拉斯克臨床醫(yī)學研究獎。上述種種都預示著mRNA疫苗有望成為防控感染性疾病和開展疾病治療的有力工具。但是，mRNA疫苗在動物模型和人體內(nèi)應用的安全性和有效性仍存在較大差異，因此對于進一步提升穩(wěn)定性和遞送的特異性，從而提高疫苗的療效仍是其研發(fā)的一個重要挑戰(zhàn)；此外，優(yōu)化疫苗最佳給藥方式和接種劑量及次數(shù)，以及拓展其在各種疾病中的應用也是今后研究應用的重要方向。在疫苗行業(yè)逐步成熟的情況下，開發(fā)對抗突變性抗原的廣譜疫苗以實現(xiàn)一針多能，具有為疾病提供預防和保護措施的重大意義。