黃英 蔣龍

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定雞肉中尼卡巴嗪殘留標志物的不確定度評定

黃 英，蔣 龍

（深圳信測標準技術(shù)服務(wù)有限公司，廣東深圳 518000）

摘 要：依據(jù)標準GB 29690—2013和JJF 1059.1—2012對液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）測定雞肉中尼卡巴嗪殘留標志物過程中的各個不確定度來源進行分析，計算相對擴展不確定度。

關(guān)鍵詞：LC-MS/MS;雞肉;尼卡巴嗪殘留標志物;不確定度

尼卡巴嗪是一種廣譜的抗球蟲劑，常用于防治雞等禽類球蟲病。4，4-二硝基均二苯脲（下文均用DNC表示）是尼卡巴嗪成分之一，是起抗蟲效果的主要活性成分，通常將其作為尼卡巴嗪的殘留標志物。本文通過對測量DNC殘留量的過程進行分析，識別不確定度來源，列出影響測定結(jié)果的不確定度因素，計算相對擴展不確定度[1-2]。

1 測量方法和數(shù)學(xué)模型

1.1 測量方法

①材料。DNC標準物質(zhì)、乙腈、甲醇。②步驟。取均質(zhì)后雞肉樣品m（2 g），加乙腈提取，取上層液濃縮，定容至V（1.0 mL），濾膜過濾。③設(shè)備。液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（AB）、萬分之一天平。④色譜條件。色譜柱C18，流速

0.3 mL/min。

1.2 數(shù)學(xué)模型

樣品與標準溶液同時測定，以峰面積比值為縱坐標，濃度為橫坐標繪制標準曲線，從標準曲線上求得樣品溶液的濃度，按公式計算待測樣中DNC的含量，計算公式：

（1）

式中：X-待測樣中DNC的含量，μg/kg;C-由標準曲線所得的DNC濃度，ng/mL;V-樣品最終定容體積，mL;

m-取樣量，g。

X是由C、V、m計算得到的，因此X的不確定度分別由C、V、m的不確定度合成，采用相對標準不確定度分析。

2 測量總相對標準不確定度的來源

由標準曲線所得DNC濃度的相對標準不確定度urel（C），樣品稱量產(chǎn)生的相對標準不確定度urel（m），

樣品定容產(chǎn)生的相對標準不確定度urel（V），重復(fù)性測量產(chǎn)生的相對標準不確定度urel（重復(fù)），因此urel（總）=

。各相對不確定度分量及其影響因素[4]見圖1。

3 測量不確定度的計算

3.1 標準曲線所得的DNC濃度的相對標準不確定度urel（C）

3.1.1 標準溶液產(chǎn)生的相對不確定度urel（標準）

（1）配制標準工作液產(chǎn)生的相對不確定度。DNC標準溶液：100 μg/mL，不確定度為5%，k=2。配制標準工作液：

1.00 μg/mL、0.10 μg/mL、0.01 μg/mL。①使用10 mL容量瓶（A級），允差為0.02 mL，使用3次。②使用20～200 μL

移液器，允差為0.002 mL，使用2次。③使用100～1 000 μL

移液器，允差為0.01 mL，使用1次。④DNC標準溶液產(chǎn)生的不確定度為。按矩形分布，以上4項合成配制標準工作液的相對不確定度為：

0.030 8（2）

（2）配制曲線使用容量瓶產(chǎn)生的相對不確定度。使用

5 mL容量瓶（A級），允差為0.02 mL，使用6次，按矩形分布計算相對不確定度為：（3）

（3）配制曲線使用移液器時產(chǎn)生的相對不確定度。使用100～1 000 μL移液器，允差為0.005 mL、0.010 mL。0.250 mL、

0.500 mL和1.000 mL各移取2次，按矩形分布計算相對不確定度為：

（4）

合并（2）（3）（4）得標準溶液的相對不確定度為：

。

3.1.2 標準曲線所得DNC濃度的相對標準不確定度urel（C）

標準曲線為6個濃度點，每個濃度測定3次，共n=18個。由實驗數(shù)據(jù)進行線性擬合得線性方程y=0.414 32 x-0.116 07，相關(guān)系數(shù)0.998 5。對樣品測量7次，由峰面積比值通過直線方程求得其濃度，結(jié)果見表1。

依據(jù)式[3]：

（5）

式中：u（c樣液）代表標準曲線求得C樣液產(chǎn)生的不確定度;SA/C代表標準曲線求得的A標和相應(yīng)的Ai的回歸剩余標準差;m代表樣品溶液的測定次數(shù)，m=7;n代表標準溶液測定的次數(shù)，n=18;b代表回歸系數(shù);C樣液代表樣品處理液中DNC的濃度，ng/mL;C代表樣品處理液中DNC濃度的回歸值，ng/mL;代表標準溶液中DNC濃度平均值，ng/mL;Ci代表各標準溶液中DNC濃度，ng/mL;Ai代表標準溶液各點峰面積的測定值;A標代表標準溶液各點峰面積的回歸值。

計算：SA/C為0.335，u（c樣液）為0.360 ng/mL，得urel（回歸）=

u（c樣液）/C樣液==0.039 4，綜上得：

urel（C）==0.054 1。

3.2 重復(fù)性測量產(chǎn)生的相對不確定度urel（重復(fù)）

依據(jù)表1，計算標準偏差為0.267，計算相對不確定度為==0.016 8。

3.3 樣品稱量產(chǎn)生的相對不確定度urel（m）

使用萬分之一天平，允差為0.5 mg，按矩形分布計算相對不確定度為

3.4 樣品定容產(chǎn)生的相對不確定度urel（V）

使用100～1 000 μL移液器，允差為0.01 mL，按矩形分布計算相對不確定度為urel（V）=

3.5 合成總相對標準不確定度

，

u=0.056 9 ×4.57=0.260 mg/kg

當包含因子k=2，則擴展不確定度為0.260×2≈

0.52 μg/kg。

4 結(jié)論

當DNC含量為4.57 mg/kg時，其相對擴展不確定度為0.52 μg/kg（k=2））。LC-MS/MS測定雞肉中尼卡巴嗪殘留標志物時，不確定度主要由標準物質(zhì)、移液器、容量瓶的誤差、線性回歸引入;樣品稱量、樣品提取過程所引入的不確定度很小，可以忽略?？赏ㄟ^選擇較高純度的標準物質(zhì)、增加標準曲線重復(fù)測定和多次測量平行樣降低結(jié)果的不確定度[5]。

參考文獻

[1]農(nóng)業(yè)部 衛(wèi)生和計劃生育委員會.食品安全國家標準 動物性食品中尼卡巴嗪殘留標志物殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法：GB 29690—2013[S].北京：中國標準出版社，2021.

[2]中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局.測量不確定度評定與表示：JJF 1059.1—2012[S].北京：中國標準出版社，2012.

[3]中國合格評定國家認可委員會.CNAS-GL006：2019化學(xué)分析中不確定度的評估指南[EB/OL].（2019-04-09）[2021-07-20].https：//www.cnas.org.cn/rkgf/sysrk/rkzn/2019/04/896487.shtml.

[4]宋迎春，袁婭，王艷敏，等.GC-MS測定動物組織中五氯酚鈉的不確定度評定 醫(yī)學(xué)與檢驗醫(yī)學(xué)，2019，8，37（4）：

568-572.

[5]張麗芳，康俊杰，張建雄，等.液相色譜質(zhì)譜法測定雞肉中尼卡巴嗪殘留標志物殘留量的不確定度評定[J/OL].中國動物傳染病學(xué)報：1-10[2021-07-20].http：//kns.cnki.net/kcms/detail/31.2031.s.20210427.1057.026.html.