馮傳欽 王圣喆 黃靜 蒲德永

摘要：本文通過對鯉魚骨骼標(biāo)本的制作方法介紹，探討了如何將冷剔法與熱剔法結(jié)合來剔除魚類肌肉，制作比較完美的魚類骨骼標(biāo)本。并適當(dāng)調(diào)整腐蝕、脫脂、漂白的時(shí)間，分析了在骨骼標(biāo)本制作過程中應(yīng)該注意的問題。

關(guān)鍵詞：鯉魚;骨骼標(biāo)本;制作方法

Abstract：Based on the introduce of the process of preparing the skeleton specimen of carp，the way how to validly remove the muscle of fish by combination of two methods called the cold-culling and the hot-culling method respectively was discussed，so as to make the perfect fish bone specimen.During the process of fish skeleton preparation，the time of corrosion，degreasing and bleaching was adjusted properly，and the problems that should be paid attention to were analyzed as well.

Keywords：Carp;Skeleton Specimen;preparation method

魚類是脊椎動物中種類最多的一個(gè)類群，在動物進(jìn)化史中占有十分重要的地位[1]。魚類具有脊椎動物中最為復(fù)雜的骨骼系統(tǒng)。由于骨骼埋藏于肌肉中，其性狀、形態(tài)不易受環(huán)境影響而變化，故在研究魚類的形態(tài)特征、演化及分類方面，骨骼是重要依據(jù)[2]。同時(shí)魚類骨骼標(biāo)本在教學(xué)以及科普工作中具有重要意義，如作為教學(xué)標(biāo)本展示以及科普工作中的直觀教具具有形象生動的特點(diǎn)。學(xué)生通過骨骼標(biāo)本的制備能更好的了解骨骼系統(tǒng)的構(gòu)造及功能，培養(yǎng)學(xué)生的觀察能力、動手能力、思維能力。

1.材料與方法

1.1材料的選擇

用于制作骨骼標(biāo)本的鯉魚應(yīng)選擇體型正常的新鮮成年個(gè)體，無損傷，鰭條完整。腐爛個(gè)體由于骨骼間，特別是肋骨與脊椎，肩帶、腰帶之間的韌帶容易脫落，骨骼難以拼裝完整，給制作標(biāo)本帶來較大困難。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

乙酸乙酯、0.5%～1%NaOH、95%乙醇、3%～5%雙氧水、膠水。

1.3實(shí)驗(yàn)器材

解剖器具（解剖剪、解剖刀、鑷子、解剖針等），電磁爐，燒杯，量筒，電子天平，解剖蠟盤，吸水紙，脫脂棉，牙刷，標(biāo)本缸，注射器等。

1.4方法

1.4.1魚的處死

用一密閉容器將沾有乙酸乙酯脫脂棉塞入魚的口腔讓其麻醉致死，剔除魚鱗，擦凈魚體表面粘液，自肛門沿腹側(cè)正中線剪開體腔，剪至腹鰭處停止，由于腹鰭和軀干骨并不相連，為方便剔除軀干骨肌肉，可以先小心將腹鰭部分取下，由開口處掏出內(nèi)臟，清洗干凈。

1.4.2肌肉剔除

剔除肌肉的順序是先從軀干部開始，沿著體測肌肉紋理和肋骨方向在肋間先用解剖刀劃破肌肉，再清理尾部，最后處理頭部和尾鰭。剔除肌肉時(shí)要注意保護(hù)好魚頭部、魚鰭及鰭擔(dān)骨不被破壞。

軀干部處理

先用解剖刀沿劃口橫向除去多余的大塊肌肉，直至暴露出肋骨后仔細(xì)分離其間肌肉并輕輕剝離肋骨上肌肉，注意避免損傷肋骨骨尖。之后再用解剖刀去除魚背部肌肉，不與脊椎相連的肌間骨一同去掉，深度盡量貼近椎骨，但不可損傷骨骼。臀鰭的支鰭骨與尾椎的脈棘相連，注意保護(hù)。在粗剔完兩側(cè)的肌肉后，魚的軀干骨應(yīng)大部分都暴露出來。

頭部處理

頭部肌肉重點(diǎn)應(yīng)剔除眼眶骨下方的肌肉、鰓絲、口腔咽顱內(nèi)肌肉以及從枕骨大孔用解剖針掏出腦。先將頭部的眼球、眼肌及面部、口腔等大塊肌肉挖出，然后從鰓蓋下方使用鑷子清理鰓弓部分，將鰓絲全部剔除干凈。之后清理胸鰭系骨骼部分，同樣使用鑷子剔除肌肉，必要時(shí)可使用解剖刀，但注意動作輕柔，防止損傷骨骼。下一步處理腦顱唇鼻骨部分，先用解剖針從枕骨大孔伸入攪動并帶出腦髓，也可使用小尖鑷進(jìn)行掏取，反復(fù)多次。最后解剖剪配合解剖刀盡量剔除唇鼻骨、口腔咽顱部位的肌肉與皮膚，切不可損傷骨骼。首次剔肉可不必將肉剔得太干凈，以免在處理軀干時(shí)散架。

肌肉細(xì)剔

由于黏附在骨骼上的肌肉十分緊密，僅使用解剖工具難以剔除干凈，因此可使用注射器向特定部位淋熱水，既可以使蛋白質(zhì)變性，肌肉收縮利于剔除，又有效避免了難以控制溫度及加熱時(shí)間以至于骨骼散架丟失而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗的結(jié)果。

然后用小鑷子和手術(shù)刀仔細(xì)地剔除附在骨骼上的小塊肌肉，特別是頭部后面和椎骨上面的肌肉，越凈越好。不要讓刀損傷骨骼，細(xì)小的部位可以用毛刷（最好用牙刷）在水中輕輕地刷去肌肉。

處理頭部及魚鰭這兩部分主要是去掉皮膚。浸燙過的標(biāo)本頭部和魚鰭上的皮膚可以用毛刷刷去，頭部骨骼外的肌肉可以用鑷子夾去。魚口和眼眶部位的骨骼細(xì)小，容易損傷，因此用刷要輕，去掉皮膚即可。在操作的過程中一定注意保證頭骨的完整性。刷魚鰭的皮膚時(shí)，毛刷要順著鰭條的方向，由內(nèi)向外輕輕洗刷，以防弄斷鰭條，難以復(fù)原。

1.4.3肌肉腐蝕

將剔除過肌肉的標(biāo)本浸入0.5%～1%的NaOH溶液中6-12小時(shí)。處理過程中應(yīng)經(jīng)常觀察標(biāo)本的變化情況，并定期檢查骨骼之間連接狀態(tài)，在骨骼上殘存的肌肉透明后，再將其處理掉。然后用清水浸洗，再用毛刷或者鑷子剔去殘存的肌肉和皮膚。同時(shí)在之前難以剔除的棘間系膜經(jīng)腐蝕后變得透明柔軟，用鑷子小心剔除即可。

1.4.4脫脂與漂白

將NaOH溶液處理過的骨骼標(biāo)本放入95%的乙醇溶液中浸泡6-12小時(shí)，根據(jù)實(shí)際情況時(shí)間可適當(dāng)延長直至骨骼標(biāo)本表面無殘留油脂。同時(shí)乙醇溶液浸泡還可以去除骨骼中殘留水分以及使殘留肌肉變性，用鑷子小心將殘留的肌肉取下即可。

雙氧水能夠氧化骨骼上的色素，破壞色素的共扼結(jié)構(gòu)，使之溶于水，脫離骨骼，起到漂白去雜的作用[8]。如果不對骨骼進(jìn)行漂白，則制作的標(biāo)本就會發(fā)黃，使得整個(gè)標(biāo)本失去觀賞價(jià)值。由于H2O2具有一定的腐蝕性，濃度過高會導(dǎo)致骨骼被腐蝕，變得疏松多孔;濃度過低，也會出現(xiàn)漂白效果不明顯的狀態(tài)。

將骨骼放入盛有3%-5%H2O2溶液中進(jìn)行漂白1-2天根據(jù)實(shí)際情況時(shí)間可適當(dāng)延長直到骨骼變白時(shí)，及時(shí)將其拿出并用清水浸泡清洗。

1.4.5整形裝架

用吸水紙將魚骨擦干平放于標(biāo)本缸中并墊上脫脂棉。在腹部中塞入適量脫脂棉維持肋骨自然形狀。放于通風(fēng)口自然晾干后，用鐵絲穿過各個(gè)脊椎骨的椎管，固定脊柱。再穿入頭骨，整理好每塊骨骼的形態(tài)，用502膠將脫離的骨骼互相連接牢固，把整體連接整形裝架置于骨架臺上。最后將帶骨和鰭骨擺好位置，進(jìn)行粘貼和固定。若標(biāo)本制作過程中有部分骨骼脫落，要注意保管，并一同處理完全過程。在標(biāo)本裝好架干燥后，用502膠粘回原位。

2.結(jié)果與討論

處死鯉魚的方法很多，為了保證鯉魚頭骨的完整性，不可使用敲擊頭部致死的方法;缺水窒息死亡會導(dǎo)致鯉魚掙扎損傷骨骼[3];藥物注射可能會影響到骨骼質(zhì)量，且人在該操作步驟中難以保障安全;沸水澆淋致死（熱處理）時(shí)，由于掙扎容易導(dǎo)致骨骼變形。通常采用乙酸乙酯或乙醚麻醉致死。

骨骼標(biāo)本的制作通常需要將骨骼進(jìn)行剔肉、腐蝕、脫脂、漂白，并模仿動物的正常自然姿態(tài)連接整裝[4，5]。傳統(tǒng)的骨骼標(biāo)本制作方法可分為3種：熱剔法、冷剔法、生物法。熱剔法中水煮是最容易讓蛋白質(zhì)變性并使肌肉脫離骨骼的方法，但由于難以控制其加熱溫度與時(shí)間極易造成骨骼分離或丟失，且高溫容易破壞骨骼間相連的韌帶，魚類骨骼骨片數(shù)目多，骨刺小連接不牢固，散架后的魚骨很難連接成型;冷剔法則是不經(jīng)水煮直接使用解剖工具剔除肌肉等組織，能夠極大程度保留骨骼的完整性，但肌肉與結(jié)締組織等難以剔除干凈;生物法是利用生物啃食肌肉的方法，存在骨骼易被誤食、制作時(shí)間長、骨骼標(biāo)本不美觀等缺點(diǎn)[6]。本文采用的熱剔法和冷剔法相結(jié)合的方法，通過局部精確熱處理能夠很好的保證骨骼的完整性并盡可能的減少肌肉的殘留，耗材少，標(biāo)本更加清晰美觀，且實(shí)驗(yàn)周期較短容易控制。

NaOH溶液處理在整個(gè)骨骼標(biāo)本制作中是至關(guān)重要的步驟，其主要作用表現(xiàn)在兩個(gè)方面，首先是NaOH溶液可以將骨骼隱蔽處不能用手術(shù)器械清理的筋肉腐蝕掉;其次是NaOH溶液可以將骨骼中的部分油脂清理掉，利于漂白，不會因有油脂包裹而處理不到位[7]。NaOH濃度過低達(dá)不到預(yù)期效果，濃度過高則易將骨骼泡壞。因此根據(jù)實(shí)際情況來確定溶液濃度與浸泡時(shí)間達(dá)到既能腐蝕肌肉又不會對骨骼造成損傷的效果是制作骨骼標(biāo)本成功的關(guān)鍵。

（魏遠(yuǎn)鵬、胡才波參加了標(biāo)本制作，在此一并致謝?。?/p>

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資助項(xiàng)目：西南大學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)研究項(xiàng)目（項(xiàng)目號：SYJ2020018）

第一作者簡介：馮傳欽（1999-），男，重慶巫山人，2018級本科生;專業(yè)：生物科學(xué)

通訊作者：蒲德永，E-mail：jia@swu.edu.cn