蔡晟陽 徐軍 陳學軍 尹明偉 周超 馬繼華 李靈

ABO血型是輸血醫(yī)學和器官移植醫(yī)學中重要的血型系統(tǒng)，若輸注ABO不相容的血液可能導致嚴重的臨床后果。因此，正確鑒定ABO血型是確保臨床輸血安全有效的前提和重要措施[1]。一般認為，嬰兒特別是新生兒紅細胞上的抗原未完全形成，大多在出生3～6月才開始規(guī)律產生抗-A、抗-B[2-4]，在進行嬰兒ABO血型鑒定時常出現(xiàn)正反定型不一致的現(xiàn)象。

美國血庫協(xié)會(American Association of Blood Banks，AABB）規(guī)定，≤4個月的嬰兒受血者ABO血型鑒定，只要求做紅細胞血型鑒定（正定型），而不必做反定型[5]。我國目前尚未明確規(guī)定對于幾月齡的嬰兒適宜開展ABO正反定型檢測，少量國內輸血研究建議對≤6個月的嬰兒受血者，鑒定ABO血型只作正定型，對＞6個月的嬰兒受血者則同時作正反定型相互印證[2,6-7]。

為探索1周歲內嬰兒的ABO血型鑒定、血型抗體產生趨勢，探討適用于本地區(qū)嬰兒開展血型正反定型檢測的合適月齡，我們對本院2020年3月～2020年4月824例12月齡內的嬰兒血液標本進行ABO血型微柱凝膠法正反定型檢測和分析，現(xiàn)將結果報告如下。

材料與方法

1 研究對象 連續(xù)收集本院2020年3月～2020年4月期間，所有常規(guī)送檢ABO血型鑒定的1周歲內嬰兒作為研究對象，排除血液系統(tǒng)疾病（7例）、新生兒ABO溶血?。?5例）、早產兒（46例）、抗篩陽性（11例）、血漿量少（5例）后，共計824例，如圖1所示。該項目中涉及血液標本均為患兒自身臨床診治需要而常規(guī)采集的血樣，該研究項目獲浙江大學醫(yī)學院附屬兒童醫(yī)院倫理委員會批準同意，（倫）審編號：2021-JRB-147。

圖1 篩選研究對象流程

2 試劑與儀器

2.1 試劑：ABO血型正/反定型和RhD血型檢測卡（批號：50093.60.14）、低離子抗人球蛋白卡（批號：50531.38.19）、樣本稀釋液（ID-Diluent 2）（批號：05761.00.05），均為美國伯樂公司產品瑞士達亞美公司提供；人ABO血型反定型用紅細胞（批號：2 0 2 0 5 3 0 4）、抗體篩選紅細胞（批號：20207006），均為上海血液生物醫(yī)藥有限責任公司產品。

2.2 儀器：IH 1000全自動血型配血分析儀、孵育器（ID-Incubator 37SI）和卡式離心機（ID-Centrifuge

1 2SII）均為美國伯樂公司產品，醫(yī)用低速離心機（B a s o 2 0 0 5-1）為臺灣貝索公司產品，移液器（Eppendorf）。

3 方法

3.1 全自動血型鑒定：將抗凝全血量≥1 mL的樣本離心處理后，取蓋，裝載放置于IH 1000全自動血型配血分析儀中，使用配套的微柱凝膠血型卡進行檢測，記錄血型卡正反定型的凝集強度及結果。

3.2 手工微柱凝膠法：將抗凝全血量＜1 mL的樣本離心后，取壓積紅細胞用達亞美2號稀釋液配制成5%的紅細胞懸液，取10 μL分別加入微柱凝膠卡的A-B-Dctl孔，于反定型孔中加入患者血清50 μL，再分別加入0.8%的反定型A1紅細胞和B紅細胞50 μL。將卡放置于卡式離心機上1 000 r/min離心10 min，判讀并記錄血型卡正反定型的凝集強度及結果。

3.3 結果判斷：血型卡正反定型的凝集強度及結果判讀標準參照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》（第四版）[8]；其中正定型凝集強度≥3+，反定型凝集強度≥1+，確定為正反定型相符。

4 統(tǒng)計學分析 數(shù)據(jù)采用IBM SPSS 20軟件處理分析。率的比較采用卡方檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結 果

1 嬰兒血型分布情況 8 2 4例患兒中，男性4 6 2名（5 6.1%），女 性3 6 2名（4 3.9%）；A型2 4 2例（2 9.4%），B型2 3 8例（2 8.9%），O型2 8 2例（34.2%），AB型62例（7.5%），其中RhD陽性821例（99.6%），RhD陰性3例（0.4%）。

2 各月齡組嬰兒ABO血型抗體檢出情況及其變化趨勢 因AB型患兒無抗-A、抗-B產生，本研究僅對其中的762例A型、B型和O型患兒進行抗體檢出觀察分析。將762例患兒按月齡從小到大分為12個組，依次為：0～1月、1～2月、2～3月、3～4月、4～5月、5～6月、6～7月、7～8月、8～9月、9～10月、10～11月、11～12月。各月齡嬰兒血型抗體（抗-A和抗-B）檢出情況見表1，血型抗體檢出率與月齡之間的變化趨勢見圖2。具體的抗體檢出和變化現(xiàn)象如下：①自出生至3個月，嬰兒ABO血型抗體的檢出率隨月齡的增加逐漸下降；②自3月齡開始至1周歲，血型抗體的檢出率隨月齡的增加呈不斷上升的趨勢；③0～6月嬰兒ABO血型抗體檢出率與6～12月者有顯著性差異（P＜0.01）；6～7月時抗體檢出率從5～6月時的40.9%躍升至72.7%；④至12月齡時，嬰兒的ABO血型抗體已幾乎可以全部檢出。

圖2 762例A、B、O型嬰兒不同月齡時的ABO血型抗體檢出率變化趨勢圖

表1 762例12月齡內A、B、O型嬰兒的ABO血型抗體檢出情況

3 不同ABO血型母親的新生兒其血型抗體的檢出率比較 為進一步分析新生兒（定義為出生至28天者）ABO血型抗體的來源，通過病歷查詢本研究中434例新生兒的母親血型，無法查到母親血型的51例。383例新生兒母親中，母親為O型的133例，母親為AB型的38例，母親為A型的98例，母親為B型的114例，383例新生兒的ABO血型抗體檢出率為43.3%（166/383），其中不同ABO血型母親對應的新生兒血型抗體檢出情況詳見表2。

表2 不同ABO血型母親的新生兒ABO血型抗體檢出情況比較

4 嬰兒血型抗體（抗-A和抗-B）的產生情況比較在762例血型為A、B、O的12月齡內嬰兒中，抗-A和抗-B的產生情況比較詳見表3。

表3 762例12月齡內嬰兒血型抗體（抗-A和抗-B）的產生情況比較

討 論

傳統(tǒng)觀點認為，嬰兒出生后尚無或很少產生抗-A和抗-B，這類抗體需隨著生長發(fā)育逐漸生成。本研究中，嬰兒自出生至3個月其ABO血型抗體的檢出率隨月齡的增加逐漸下降，顯然與傳統(tǒng)觀點相矛盾。周金安等[3]利用2-Me破壞正反定型一致的新生兒血樣中所有可能的IgM抗體后，再通過凝膠抗球蛋白卡測定并比較破壞前后抗-A和抗-B效價的變化情況以確定抗體性質，發(fā)現(xiàn)破壞前后新生兒血型抗體效價無變化的高達93.9%[3]，認為凝膠血型卡測出的新生兒血型抗體主要為IgG性質，最大可能是來自于母親，而非新生兒自身產生。IgG抗體由于分子量較小，在妊娠過程中能夠順利通過胎盤屏障進入胎兒體內[9]，其半衰期約為1～3周[10]。前3個月，來自母體的IgG抗體不斷地被消耗代謝，嬰兒自身產生血型抗體的速度慢于來自母體抗體被消耗的速度，王曉衛(wèi)[2]與周金安[11]等報道和我們的研究結果均證實了嬰兒自出生至3個月其ABO血型抗體的檢出率隨月齡增加而逐漸下降的客觀存在。另外，我們也需更新認知，微柱凝膠血型卡具有分子篩效應，低離子溶液也能增加ABO血型抗體的凝集強度[12]，提高檢測敏感性，其反定型試驗能測出IgG類抗-A、抗-B等血型抗體。

本研究中也發(fā)現(xiàn)：自3月齡至1周歲，嬰兒ABO血型抗體的檢出率隨月齡的增加呈不斷上升的趨勢；在6～7月時，抗體檢出率由5～6月時的40.9%躍升至72.7%；至12月齡時，血型抗體已幾乎可以全部檢出。隨著來自母體的IgG抗體逐漸消失，嬰兒受天然血型物質刺激的程度與強度逐漸增強，其ABO血型抗體產生率也隨月齡增加逐漸升高；而6月齡后的嬰兒可能因戶外活動增加、添加輔食、食物多樣性增加等，加大了其通過呼吸道、消化道接觸菌群的機會，提高了產生血型抗體的幾率[7]。另外，我們的研究結果中10～11月嬰兒的血型抗體檢出率有所下降，可能與該月齡組樣本量較少而出現(xiàn)結果偏倚有關。

本研究還統(tǒng)計分析了383例新生兒的母親血型，發(fā)現(xiàn)O型母親的新生兒血型抗體檢出率（85.7%）顯著高于AB型母親者（5.3%）（P＜0.01），B型母親的新生兒血型抗體檢出率(33.3%)顯著高于A型母親者（12.2%）（P＜0.01）。一般認為，A型和B型個體主要的同種抗體是IgM型，IgG型抗體占少數(shù)，而O型血清的抗-A和抗-B主要為IgG型抗體[5,13]。O型母親體內的高效價IgG抗體通過胎盤屏障進入胎兒體內，這也解釋了母親為O型的新生兒血型抗體檢出率高達85.7%的原因；而AB型母親體內不存在抗-A和抗-B，其對應的新生兒血型抗體檢出率僅為5.3%，進一步從側面反映出新生兒自身產生血型抗體的比例非常低。

研究表明，無論在自然界或者人體內部，A抗原在數(shù)量及抗原性方面均強于B抗原，因而免疫產生的抗-A數(shù)量多于抗-B，且產生時間早于抗-B[14-15]。本研究結果顯示：B型母親的新生兒其血型抗體檢出率（3 3.3%）顯著高于A型母親者（1 2.2%）（P＜0.01），1周歲內嬰兒抗-A檢出率高于抗-B檢出率，進一步驗證了上述研究報道[2,14-15]的結論與觀點。

盡管美國AABB推薦4月齡內嬰兒ABO血型鑒定只需進行正定型，我們綜合本研究及以上相關文獻分析，推薦本地區(qū)6月齡內嬰兒ABO血型鑒定只需進行正定型，＞6月齡嬰兒進行ABO正反定型檢測，更符合國內臨床工作實際。對于6月齡以上嬰兒正反定型不一致者，可結合增強鹽水試管法等多種免疫血液學方法增加血型抗體的檢出率，更有利于準確判定血型[13,16-17]。對于尚未產生相應血型抗體的嬰兒，若在ABO正定型中尚存不確定時，可以考慮采用分子生物學方法[18]。

本研究也存在一些局限性：系單中心研究，3月齡及以上組嬰兒納入例數(shù)偏少，受條件限制未能對收集到的嬰兒標本進行用于區(qū)分血型抗體IgM或IgG來源的直接實驗。將來擴大標本量進行更深入的分析研究仍有必要。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突