宋曉莉，王相子，開(kāi) 妍，魏若瑤，岑 雪，劉 云

（江蘇省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，江蘇南京 210036）

高致病性禽流感（highly pathogenic avian influenza，HPAI）是由A 型流感病毒中的高致病力病毒引起的禽類(lèi)烈性傳染病，以發(fā)熱、腹瀉、麟腳出血為特征，雞、火雞、鴨、鵝、鵪鶉、雉雞、鷓鴣、鴕鳥(niǎo)、鴿子、孔雀等多種禽類(lèi)對(duì)其均易感，是世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）規(guī)定的須通報(bào)動(dòng)物疫病，我國(guó)將其列為一類(lèi)動(dòng)物疫病[1]。自2004 年2月22 日廣西隆安縣發(fā)生HPAI 疫情以來(lái)，高致病性禽流感病毒（HPAIV）一直嚴(yán)重威脅著我國(guó)養(yǎng)禽業(yè)的高質(zhì)量發(fā)展和公共衛(wèi)生安全[2]。2010 年我國(guó)首次在鴨中分離到H5N8 亞型HPAIV[3]，隨后多次在野鳥(niǎo)中監(jiān)測(cè)到該亞型病毒。禽流感病毒的不斷變異進(jìn)化，造成了H5 亞型禽流感疫情的復(fù)雜性，因而增加了防控難度[4-6]。

2020 年1 月，江蘇省連云港市野保站發(fā)現(xiàn)一起野禽感染H5N8 亞型HPAIV 異常死亡事件。江蘇省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳迅速組織相關(guān)人員，指導(dǎo)連云港市開(kāi)展現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查、實(shí)驗(yàn)室診斷和應(yīng)急處置，分析疫點(diǎn)向外傳播疫病的風(fēng)險(xiǎn)，以便及時(shí)控制疫情，降低疫情影響。

1 流行情況及初診

2020 年1 月20 日，連云港市野保站發(fā)現(xiàn)云臺(tái)山景區(qū)云臺(tái)街道西隅水庫(kù)野禽異常死亡。經(jīng)進(jìn)一步觀測(cè)，該水庫(kù)內(nèi)棲息野生禽類(lèi)共計(jì)97 只，現(xiàn)場(chǎng)發(fā)現(xiàn)死亡鴛鴦10 只。同時(shí)，在距離該水庫(kù)6 km 的小島山還發(fā)現(xiàn)5 只大雁死亡。1 月22 日，在西隅水庫(kù)又發(fā)現(xiàn)2 只鴛鴦死亡。1 月21 日開(kāi)始，連云港市獸醫(yī)站會(huì)同市野保站人員聯(lián)合開(kāi)展流行病學(xué)調(diào)查，對(duì)死亡的17 只野禽開(kāi)展臨床診斷并采集樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。

1 月23 日，經(jīng)連云港市獸醫(yī)站檢測(cè)，所采集的野禽樣本為H5 亞型禽流感陽(yáng)性。為進(jìn)一步確定這些野禽死亡的原因，1 月26 日連云港市獸醫(yī)站和市野保站有關(guān)人員聯(lián)合對(duì)野生鳥(niǎo)類(lèi)分布狀況和疫病發(fā)生等情況開(kāi)展了流行病學(xué)調(diào)查，并采集了部分野禽糞便及口鼻腔拭子。1 月27 日上午，連云港市獸醫(yī)站將所采集的21 份樣品送江蘇省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心檢測(cè)。

2 實(shí)驗(yàn)室病原學(xué)診斷

2.1 樣品

共收到采集的野禽樣品21 份，其中9 份為云臺(tái)山景區(qū)宿城水庫(kù)野禽糞便拭子，9 份為云臺(tái)山景區(qū)小島山救護(hù)中心死亡野禽糞便拭子，3 份為云臺(tái)山景區(qū)小島山救護(hù)中心死亡野禽口腔拭子。

2.2 方法

拭子樣品離心取上清，用全自動(dòng)核酸提取工作站（購(gòu)自德國(guó)QIAGEN 公司）進(jìn)行核酸提取。對(duì)提取的核酸樣品，分別用禽流感H5、H7、H9亞型三重?zé)晒釸T-PCR 檢測(cè)試劑盒（哈爾濱國(guó)生生物有限公司，生產(chǎn)批號(hào)20210305）、禽流感病毒N8 基因核酸測(cè)定試劑盒（上海之江生物科技股份有限公司，生產(chǎn)批號(hào)P20201101）檢測(cè)樣品中的禽流感病毒核酸。

將實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果為AIV 核酸陽(yáng)性的樣品送中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所國(guó)家禽流感參考實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行病毒分離及分型鑒定。

2.3 結(jié)果

經(jīng)江蘇省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心熒光RT-PCR檢測(cè)，21 份樣品中，有3 份為H5N8 亞型HPAIV核酸陽(yáng)性（圖2～3），陽(yáng)性檢出率為14.29%，3 份陽(yáng)性樣品均為小島山救護(hù)中心野禽口腔拭子。

圖1 樣品H5 亞型熒光RT-PCR 檢測(cè)擴(kuò)增曲線

圖2 樣品N8 亞型熒光RT-PCR 檢測(cè)擴(kuò)增曲線

經(jīng)中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所國(guó)家禽流感參考實(shí)驗(yàn)室鑒定，從2 份野禽口腔拭子中各分離到1 株H5N8 亞型禽流感病毒，其余樣品未分離到禽流感病毒。病毒序列數(shù)據(jù)顯示，分離到的H5N8 亞型禽流感病毒HA 基因裂解位點(diǎn)均具有高致病性病毒特征，結(jié)合雞胚死亡時(shí)間，證實(shí)為高致病性毒株。病毒表面HA 基因同源性比較結(jié)果顯示，2 株H5N8 病毒的HA 基因核苷酸同源性為99.7%，均屬于2.3.4.4 分支，與2020 年11月報(bào)道的山西省平陸縣三灣大天鵝景區(qū)野生天鵝H5N8 疫情毒株高度同源，HA 基因核苷酸同源性為99.5%～99.7%。

3 應(yīng)急處置

江蘇省政府組織林業(yè)及農(nóng)業(yè)農(nóng)村主管部門(mén)聯(lián)合召開(kāi)緊急會(huì)議，迅速組建處置小組，指導(dǎo)連云港市按照國(guó)家相關(guān)規(guī)范要求[7-10]，劃定疫點(diǎn)、疫區(qū)和受威脅區(qū)，封鎖相關(guān)區(qū)域，開(kāi)展應(yīng)急監(jiān)測(cè)、緊急流行病學(xué)調(diào)查、全面消毒等應(yīng)急處置工作。

3.1 劃定疫點(diǎn)、疫區(qū)和受威脅區(qū)

將檢出陽(yáng)性樣品的小島山設(shè)為疫點(diǎn)，由疫點(diǎn)邊緣向外延伸3 km 的區(qū)域（內(nèi)有散戶9 戶，家禽存欄375 只）設(shè)為疫區(qū)，由疫區(qū)邊緣向外延伸5 km 的區(qū)域（家禽存欄共計(jì)34 000 余只，其中291 戶散戶存欄4 000 余只，1 個(gè)規(guī)模雞場(chǎng)存欄3 000 余只）設(shè)為受威脅區(qū)。疫點(diǎn)地理位置見(jiàn)圖3。

圖3 疫點(diǎn)地理位置

3.2 相關(guān)區(qū)域封鎖

對(duì)疫區(qū)實(shí)行封鎖，撲殺疫區(qū)內(nèi)所有禽只，并對(duì)撲殺禽只和死亡野禽及其排泄物，以及被污染或可能被污染的飼料和墊料、污水等進(jìn)行無(wú)害化處理；禁止禽類(lèi)及禽類(lèi)產(chǎn)品運(yùn)出疫區(qū)，對(duì)被污染或可能被污染的物品、交通工具、用具、場(chǎng)地環(huán)境等進(jìn)行徹底清洗消毒；對(duì)疫區(qū)內(nèi)的運(yùn)載工具和相關(guān)設(shè)施設(shè)備按規(guī)定要求進(jìn)行消毒；疫區(qū)內(nèi)設(shè)立警示標(biāo)志，設(shè)置臨時(shí)檢查消毒站，對(duì)出入的相關(guān)人員和車(chē)輛進(jìn)行消毒；對(duì)疫區(qū)內(nèi)養(yǎng)殖場(chǎng)戶實(shí)施嚴(yán)密隔離觀察，對(duì)疫區(qū)和受威脅區(qū)內(nèi)養(yǎng)殖場(chǎng)戶加強(qiáng)應(yīng)急監(jiān)測(cè)和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，根據(jù)評(píng)估結(jié)果開(kāi)展緊急免疫；持續(xù)對(duì)受威脅區(qū)內(nèi)所有飼養(yǎng)家禽進(jìn)行采樣檢測(cè)和臨床觀察。

3.3 應(yīng)急監(jiān)測(cè)排查

對(duì)連云港市所有養(yǎng)殖場(chǎng)戶開(kāi)展應(yīng)急監(jiān)測(cè)和臨床排查，對(duì)重點(diǎn)區(qū)域、關(guān)鍵環(huán)節(jié)和異常死亡家禽加強(qiáng)監(jiān)測(cè)，及時(shí)發(fā)現(xiàn)疫情隱患。全省組織力量對(duì)轄區(qū)內(nèi)家禽養(yǎng)殖戶開(kāi)展摸底排查，加大對(duì)家禽交易場(chǎng)所、屠宰場(chǎng)所、無(wú)害化處理廠的巡查力度，有針對(duì)性地開(kāi)展監(jiān)測(cè)，并高度關(guān)注家禽、野禽的異常死亡情況。

3.4 緊急流行病學(xué)調(diào)查及全面消毒

通過(guò)調(diào)查，掌握疫點(diǎn)、疫區(qū)、受威脅區(qū)及連云港市易感禽類(lèi)的養(yǎng)殖情況、免疫情況、環(huán)境狀況及野禽分布情況，統(tǒng)計(jì)發(fā)病禽種類(lèi)、數(shù)量、死亡數(shù)等相關(guān)信息，分析疫病發(fā)生情況并每日對(duì)環(huán)境進(jìn)行消毒。至解除封鎖前，累計(jì)使用消毒藥原液453 kg，消毒面積114.9 萬(wàn)m2，其中疫點(diǎn)、疫區(qū)和受威脅區(qū)分別為26.3 萬(wàn)、38.7 萬(wàn)和49.9 萬(wàn)m2。

3.5 解除封鎖

3 月8—9 日，連云港市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局組織對(duì)疫區(qū)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)、風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和現(xiàn)場(chǎng)驗(yàn)收，認(rèn)為風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估（表1）和驗(yàn)收結(jié)果符合疫區(qū)解除封鎖相關(guān)規(guī)定，決定自3 月10 日零時(shí)起，云臺(tái)山景區(qū)解除H5N8亞型高致病性禽流感疫區(qū)封鎖，疫情處置結(jié)束。

表1 疫點(diǎn)向家禽傳播H5N8 亞型HPAI 的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

4 事件引發(fā)的思考

4.1 揭示出的問(wèn)題

本次疫情1 月20 日林業(yè)部門(mén)發(fā)現(xiàn)野禽異常死亡，1 月23 日連云港市獸醫(yī)站對(duì)死亡野禽樣品進(jìn)行檢測(cè)，直到1 月26 日市獸醫(yī)站和市野保站才開(kāi)始開(kāi)展流行病學(xué)調(diào)查并采集相關(guān)樣品檢測(cè)，說(shuō)明林業(yè)部門(mén)和農(nóng)業(yè)農(nóng)村部門(mén)之間溝通協(xié)作有待進(jìn)一步增強(qiáng)；在小島山日常的禽流感監(jiān)測(cè)中未檢測(cè)到H5N8亞型病毒，直至出現(xiàn)野禽感染死亡才發(fā)現(xiàn)，說(shuō)明平時(shí)的野禽禽流感監(jiān)測(cè)力度不夠大，監(jiān)測(cè)面不夠廣。H5N8 亞型為近些年剛出現(xiàn)的新亞型，雖然不同H5 亞型禽流感病毒具有一定的交叉保護(hù)性，但是目前家禽中使用的H5 亞型禽流感疫苗與現(xiàn)流行的H5N8 亞型毒株可能存在著一定的抗原差異性，需要開(kāi)展此方面的研究進(jìn)行確定。有報(bào)道[11]稱，在俄羅斯，H5N8 亞型病毒或已出現(xiàn)“禽傳人”，且已經(jīng)在多個(gè)國(guó)家家禽中引發(fā)疫情，導(dǎo)致數(shù)以萬(wàn)計(jì)的家禽被撲殺。目前我國(guó)尚未發(fā)現(xiàn)該亞型病毒在家禽中流行，這導(dǎo)致群眾的防范意識(shí)較為薄弱，沒(méi)有認(rèn)識(shí)到野禽攜帶的H5N8 亞型禽流感病毒的公共衛(wèi)生危害，部分地區(qū)捕捉和食用野禽情況依然存在。

4.2 措施建議

林業(yè)部門(mén)和農(nóng)業(yè)農(nóng)村部門(mén)要進(jìn)一步健全野禽禽流感防控工作聯(lián)席會(huì)議機(jī)制和野生動(dòng)物疫病防控分工負(fù)責(zé)機(jī)制，共同研究分析野禽及家禽禽流感疫情形勢(shì)，評(píng)估野生動(dòng)物重大動(dòng)物疫情風(fēng)險(xiǎn)，討論制定有針對(duì)性的解決方案。林業(yè)部門(mén)要建立高質(zhì)量巡護(hù)隊(duì)伍，在野生動(dòng)物主要活動(dòng)區(qū)域、繁殖地、遷徙通道等棲息地等區(qū)域進(jìn)一步加強(qiáng)巡護(hù)，高度關(guān)注病死野禽，及時(shí)排查野生禽類(lèi)疫情。農(nóng)業(yè)部門(mén)可成立督查組，對(duì)日常工作開(kāi)展情況進(jìn)行督導(dǎo)檢查，確保巡查責(zé)任落實(shí)到位，進(jìn)一步提升禽流感疫情預(yù)警防控能力。

繼續(xù)加大對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)、活禽市場(chǎng)和野禽的監(jiān)測(cè)力度，建設(shè)野鳥(niǎo)防護(hù)網(wǎng)，減少野鳥(niǎo)與家禽、野鳥(niǎo)與人之間的直接接觸，防止傳染給家禽和人，做到一旦傳入及時(shí)發(fā)現(xiàn)和控制，保障家禽、野生動(dòng)物和人類(lèi)健康安全，避免出現(xiàn)嚴(yán)重的公共衛(wèi)生危機(jī)。HPAIV 具有一定的交叉保護(hù)性，因此各養(yǎng)殖場(chǎng)要制定科學(xué)合理的免疫程序，及時(shí)開(kāi)展免疫工作并建立免疫檔案。

地方相關(guān)部門(mén)要制定禽流感監(jiān)測(cè)計(jì)劃，切實(shí)開(kāi)展疫病監(jiān)測(cè)工作，及時(shí)掌握疫病免疫保護(hù)水平、流行現(xiàn)狀及相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)因素，適時(shí)調(diào)整疫病控制策略；科研單位需要對(duì)H5N8 亞型2.3.4.4 分支病毒的傳播性、致病性和抗原性進(jìn)行進(jìn)一步評(píng)估，一旦發(fā)現(xiàn)發(fā)生抗原變異，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行疫苗毒株更新。

地方政府要進(jìn)一步加強(qiáng)對(duì)群眾的禽流感防控教育和宣傳，提高其防范意識(shí)，教育其加強(qiáng)個(gè)人防護(hù)，遠(yuǎn)離野鳥(niǎo)并杜絕狩獵和食用野鳥(niǎo)等。