繆倩 任春梅 季英華 楊柳 程兆榜

關(guān)鍵詞： COP9信號(hào)復(fù)合體;黃瓜;亞細(xì)胞定位

中圖分類號(hào)： S642.2?? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A?? 文章編號(hào)： 1000-4440（2021）04-1084-05

Subcellular location and expression analysis of subunit CsCSN5b from COP9 signaling complex in Cucumis sativus L.

MIAO Qian， REN Chun-mei， JI Ying-hua， YANG Liu， CHENG Zhao-bang

（Institute of Plant Protection，Jiangsu Academy of Agricultural Sciences/Key Lab of Food Quality and Safety of Jiangsu Province-State Key Laboratory Breeding Base Co-constructed by Province and Ministry， Nanjing 210014，China）

Key words： COP9 signaling complex;Cucumis sativus L.;subcellular location

江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 2021年第37卷第4期

繆 倩等：黃瓜COP9信號(hào)復(fù)合體亞基CsCSN5b的亞細(xì)胞定位和表達(dá)分析

COP9信號(hào)復(fù)合體（Constitutively photomorphogennic signalosome， CSN）是一種在黑暗條件下抑制光形態(tài)建成的調(diào)節(jié)蛋白[1]，1992年在研究調(diào)控?cái)M南芥的光形態(tài)建成的轉(zhuǎn)錄因子時(shí)被發(fā)現(xiàn)，突變體擬南芥在黑暗條件下，子葉展開，下胚軸縮短，這一表型與野生型擬南芥在光照下幼苗生長(zhǎng)的形態(tài)一致。CSN是一種高度保守的多亞基蛋白質(zhì)復(fù)合體，調(diào)控動(dòng)物、植物的生命活動(dòng)，如生長(zhǎng)、分化、繁殖。CSN主要參與調(diào)節(jié)泛素-蛋白酶體通路（Ubiquitin proteasome system， UPS）[2]，UPS是蛋白質(zhì)高效特異性降解的主要途徑，目標(biāo)蛋白被泛素三酶級(jí)聯(lián)反應(yīng)，靶蛋白進(jìn)行泛素化修飾后，由26S蛋白酶體催化蛋白質(zhì)降解[3]。其中SCF型泛素連接酶（CRLs）是泛素連接酶E3中最大的家族，該復(fù)合體包括Cullin蛋白、RING蛋白、調(diào)控蛋白以及底物識(shí)別蛋白[4]，CSN可以催化泛素類蛋白NEDD8從Cullin-RING泛素連接酶上去Nedd化導(dǎo)致CRLs活性喪失，實(shí)現(xiàn)CSN影響蛋白質(zhì)降解過程[5]。在高等真核生物中典型的CSN蛋白由8個(gè)不同亞基組成（CSN1～CSN8），這些亞基通常含有2個(gè)保守結(jié)構(gòu)域：MPN（MPRI-PADI-N-terminal domain）和PCI（Proteasome COP9 signalosome initiation factor 3 domain）[6]。MPN結(jié)構(gòu)域是由3條α螺旋和9條β線纏繞成β片層組成，一般存在于CSN5和CSN6中，主要識(shí)別信號(hào)因子，激活下游活動(dòng)，調(diào)控生物學(xué)功能[6]。PCI結(jié)構(gòu)域存在于CSN1、CSN2、CSN3、CSN4、CSN7和CSN8中，是復(fù)合體亞基裝配完整的關(guān)鍵部分，并介導(dǎo)蛋白質(zhì)的相互作用[7]。

COP9信號(hào)復(fù)合體亞基已經(jīng)從多種生物中被克隆并分析，各個(gè)亞基的功能也陸續(xù)被發(fā)現(xiàn)，如水稻OsCSN5B基因[8]、蘋果MdCSNs基因[9]、甘藍(lán)型油菜BnCOP9基因[10]、菊花CmCSN1基因[11]，擬南芥CSN蛋白[12]，煙草CSN4蛋白[13]等。CSN5結(jié)構(gòu)最為特殊，它具備完整的催化活性位點(diǎn)和金屬離子鋅結(jié)合位點(diǎn)，在生物體中以單體或小復(fù)合體的形式發(fā)揮功能[14]，有研究結(jié)果表明人體內(nèi)的同源基因Jab1與癌癥密切相關(guān)[15-17]。CSN5可調(diào)控真菌生長(zhǎng)發(fā)育和代謝，茶樹內(nèi)生真菌無花果擬盤多毛孢基因組中找到的同源基因PfcsnE，是分生孢子形成的必需條件，并調(diào)控菌株的次級(jí)代謝活動(dòng)[18]。CSN5在植物逆境脅迫中扮演重要角色，雙生病毒編碼的C2蛋白能夠與擬南芥的CSN5A互作，影響擬南芥泛素化蛋白質(zhì)降解[19]。擬南芥突變體csn5對(duì)鹽表現(xiàn)出較高的耐受性，發(fā)現(xiàn)CSN5B通過26S蛋白酶體途徑降解GDP-甘露糖焦磷酸化酶，影響植物抵御非生物脅迫的關(guān)鍵因子抗壞血酸（AsA）的合成，CSN5B功能缺失后AsA的含量升高，處于較高水平，可提高植物對(duì)環(huán)境脅迫的耐受性[20]。CSN5有2個(gè)編碼基因CSN5a和CSN5B，現(xiàn)在研究較多的是CSN5a的功能。

黃瓜是瓜類蔬菜作物中具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值的一類，全國(guó)范圍內(nèi)收集的3 283份黃瓜疑似病毒病樣品中，黃瓜綠斑駁花葉病毒（CGMMV）檢出率為21.38%。CGMMV發(fā)展形勢(shì)日趨嚴(yán)峻，嚴(yán)重影響黃瓜的品質(zhì)和產(chǎn)量，使黃瓜產(chǎn)業(yè)經(jīng)濟(jì)損失達(dá)15%～25%[21]。本研究首次從黃瓜中克隆到CsCSN5b，前期研究預(yù)測(cè)CsCSN5b與CGMMV的CP蛋白有互作關(guān)系，猜測(cè)CsCSN5b在黃瓜應(yīng)答CGMMV生物脅迫中發(fā)揮作用。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試CGMMV毒源為本實(shí)驗(yàn)室保存的2012年采集于海南的具有典型發(fā)病癥狀的西瓜樣品上[22];植物材料黃瓜9930（Cucumis sativus L.）和本氏煙草（Nicotiana benthamiana）由本實(shí)驗(yàn)室保存;熒光標(biāo)記載體35S：YFP由南京農(nóng)業(yè)大學(xué)陶小榮實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2 植物總RNA的提取和cDNA的合成

黃瓜總RNA提取參照RNA提取試劑盒使用說明書操作，總RNA經(jīng)Nanodrop2000和瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)后，取5 μg RNA為模板，按TaKaRa反轉(zhuǎn)錄試劑盒（PrimeScriptTM 1st Strand cDNA Synthesis Kit）說明書操作得到cDNA，將剩余的RNA和cDNA于-80 ℃保存，用于后續(xù)試驗(yàn)。

1.3 CsCSN5b基因克隆及其序列分析

根據(jù)公開的黃瓜基因組信息，設(shè)計(jì)CsCSN5b基因擴(kuò)增引物COP9-bf：5′-CGGGATCCATGGAGCCGTTTCCATCATC-3′和COP9_bR_dTGA：5′-CGGGATCCGCTTTCCACCATTGGTTCTG-3′（下劃線為引入的Bam H Ⅰ酶切位點(diǎn)），以合成的cDNA為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。反應(yīng)程序：95 ℃預(yù)變性3 min;95 ℃變性15 s，52 ℃退火15 s，72 ℃延伸70 s，32個(gè)循環(huán);72 ℃延伸5 min，12 ℃保存。純化產(chǎn)物與pMD18-T載體連接，連接體系參照pMD18-T載體試劑盒說明書操作，16 ℃連接過夜，連接產(chǎn)物通過熱激法轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)TOP10，挑取單菌落PCR鑒定得到陽性克隆，送于南京金斯瑞生物公司進(jìn)行測(cè)序。利用NCBI（https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/）的Blast在線分析工具進(jìn)行序列分析，使用MEGA6軟件的臨接法（Neighbor-joining）構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹，進(jìn)化樹的可信度使用1 000次自導(dǎo)復(fù)制驗(yàn)證。

1.4 CsCSN5b-YFP融合表達(dá)載體構(gòu)建

參照質(zhì)粒提取試劑盒說明書提取pMD18-CsCSN5b質(zhì)粒，用Bam H Ⅰ進(jìn)行單酶切，37 ℃酶切1 h，酶切產(chǎn)物通過T4連接酶連接經(jīng)Bam H Ⅰ單酶切的線性化35S：YFP，連接體系參照T4 DNA Ligase試劑盒說明書操作，22 ℃連接1 h。連接產(chǎn)物通過熱激法轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)TOP10，送于南京金斯瑞生物科技有限公司進(jìn)行測(cè)序。

1.5 CsCSN5b蛋白的亞細(xì)胞定位觀察

重組質(zhì)粒CsCSN5b-YFP電擊法轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌GV3101，以35S：YFP空載體為對(duì)照，在LB平板（含50 mg/L 利福平和50 mg/L硫酸卡那霉素）上篩選培養(yǎng)，經(jīng)PCR鑒定陽性菌落，用于后續(xù)試驗(yàn)。

將轉(zhuǎn)入35S：：CsCSN5b-YFP農(nóng)桿菌和35S：YFP空載體的農(nóng)桿菌單菌落用液體LB（含50 mg/L 利福平和50 mg/L硫酸卡那霉素）振蕩培養(yǎng)，至OD600約為1.0，離心收集菌體，棄上清液，加入誘導(dǎo)液[150 μmol/L乙酰丁香酮、10 mmol/L MES（pH5.7）和10 mmol/L MgCl2]重懸菌體，室溫避光靜止2 h，選取4～6葉齡健康本氏煙草的葉片，表皮按壓注射菌液。40 h后取浸潤(rùn)區(qū)煙草葉片置于載玻片上，于激光共聚焦顯微鏡（ZEIZZ LSM710）488 nm激發(fā)光下觀察上表皮細(xì)胞中目標(biāo)蛋白表達(dá)情況及其亞細(xì)胞定位特征。

細(xì)胞核染色采用DAPI標(biāo)記法。取浸潤(rùn)區(qū)煙草葉片置于載玻片上，于激光共聚焦顯微鏡360～400 nm激發(fā)光下觀察。

1.6 CsCSN5b蛋白Western blot分析

按照植物蛋白提取試劑盒（Solarbio）說明書提取煙草葉片植物總蛋白質(zhì)，加入適量SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液（×5），漩渦震蕩混勻，99 ℃金屬浴10 min，冰浴5 min，12 000 r/min離心5 min，取上清液，用于Western blot試驗(yàn)。取20 μl上述蛋白質(zhì)樣品于12% SDS-PAGE膠上進(jìn)行電泳（80 V，30 min;130 V，1 h）檢測(cè)，轉(zhuǎn)印硝酸纖維素膜，用5%脫脂奶粉封閉，室溫60 r/min震蕩1 h，然后以1∶5 000的GFP抗體常溫孵育，60 r/min震蕩1 h，經(jīng)PBST洗滌4次，用辣根過氧化物酶HRP標(biāo)記的羊抗兔作為二抗1∶5 000常溫孵育，60 r/min震蕩1 h，用PBST洗滌4次。顯色試劑盒ECL Western Blotting Substrate避光顯色，在天能Tanon 5200 Multi全自動(dòng)熒光/化學(xué)發(fā)光成像分析系統(tǒng)下曝光顯影。

1.7 CsCSN5b轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的RT-PCR檢測(cè)

浸潤(rùn)區(qū)煙草葉片總RNA提取參照RNA提取試劑盒說明書操作，取5 μg RNA為模板，按TaKaRa反轉(zhuǎn)錄試劑盒（PrimeScriptTM 1st Strand cDNA Synthesis Kit）說明書合成cDNA。以cDNA為模板，利用35S：YFP上游引物35SBglⅡ-F和CsCSN5b基因擴(kuò)增引物COP9_bR_dTGA進(jìn)行PCR檢測(cè)，為了驗(yàn)證35S：：CsCSN5b-YFP在本氏煙草葉片細(xì)胞中是否正常轉(zhuǎn)錄。

1.8 基因表達(dá)分析

已感染CGMMV病毒的西瓜葉為接種病原，稱0.1 g新鮮病葉，加入10 ml 0.01 mol/L PBS（pH7.0）緩沖液研磨，在10 d苗齡的黃瓜子葉上均勻噴灑少許金剛砂，吸取500 μl接種液滴在子葉上，手指順著葉脈方向輕輕摩擦葉面，同時(shí)以PBS緩沖液接種作為對(duì)照組（CK），接種10 min后，對(duì)接種的葉片噴灑清水保濕。摩擦接種后第7 d、第15 d和第25 d采集黃瓜葉片。

提取黃瓜葉片樣品的RNA，第一條鏈cDNA鏈的合成參考PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser試劑盒說明書，以反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA為模板，根據(jù)克隆得到的黃瓜CsCSN5b基因序列設(shè)計(jì)熒光定量PCR引物QCsCOP9-F：5′-ACACCTATCTATGGCTGG-3′，QCsCOP9-R：5′-TTGCACCGAGTCGTTCATAGA-3′，以QCsActin為內(nèi)參基因，進(jìn)行熒光定量PCR，檢測(cè)CsCSN5b基因在接種CGMMV后的表達(dá)情況。擴(kuò)增條件為：預(yù)變性95 ℃ 30 s;變性95 ℃ 5 s，60 ℃ 34 s，40個(gè)循環(huán)，每組試驗(yàn)設(shè)3次生物學(xué)重復(fù)，采用2-△△Ct法對(duì)CsCSN5b基因進(jìn)行相對(duì)定量分析，Ct值為達(dá)到檢測(cè)閾值時(shí)的PCR循環(huán)數(shù)。使用Excel軟件作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 黃瓜CsCSN5b基因克隆

提取黃瓜葉片總RNA，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一條鏈，以cDNA為模板，利用CsCSN5b全長(zhǎng)擴(kuò)增引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)結(jié)果顯示，擴(kuò)增到1條大小約1.2 kb的特異性條帶，與預(yù)期的目的基因（1 098 bp）大小基本一致。轉(zhuǎn)化大腸桿菌TOP10感受態(tài)細(xì)胞，送南京金斯瑞生物科技有限公司測(cè)序，驗(yàn)證重組質(zhì)粒pMD18T-CsCSN5b序列準(zhǔn)確無誤。

2.2 CsCSN5b蛋白的生物信息學(xué)分析

黃瓜CsCSN5b基因核苷酸序列全長(zhǎng)1 098 bp，編碼1個(gè)含有365個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)，相對(duì)分子質(zhì)量大小約36 700。利用NCBI Conserved Domain Search分析保守結(jié)構(gòu)域，發(fā)現(xiàn)CsCSN5b編碼的蛋白質(zhì)屬于COP9信號(hào)復(fù)合體CSN第5亞基家族，含有典型的MPN保守功能域，并且有1個(gè)鋅結(jié)合位點(diǎn)，很可能與復(fù)合體的催化活性有關(guān)。MPN同源蛋白進(jìn)化樹分析結(jié)果顯示，CsCSN5b與葫蘆科植物番南瓜（Cucurbita maxima）、中國(guó)南瓜（Cucurbita moschata）、西葫蘆（Cucurbita pepo）、甜瓜（Cucumis melo）、小黃瓜（Cucumis sativus）CSN5b的氨基酸序列具有較高的同源性，其中與小黃瓜的親緣關(guān)系最近，與荷花（Nelumbo nucifera）、棕櫚（Elaeis guineensis）、玉米（Zea mays）的親緣關(guān)系較低。

2.3 CsCSN5b-YFP融合表達(dá)載體構(gòu)建

克隆CsCSN5b基因時(shí)在基因的兩端加入了BamH Ⅰ酶切位點(diǎn)，因此通過Bam H Ⅰ單酶切pMD18-CsCSN5b獲得2條片段，其中一條是pMD18T載體片段，大小約為2 000～3 000 bp，另一條大小約1 200 bp的條帶，與預(yù)期的1 098 bp CsCSN5b基因片段大小相近。對(duì)最終篩選的陽性克隆送南京金斯瑞生物科技有限公司進(jìn)行測(cè)序。測(cè)序驗(yàn)證的陽性克隆，序列正確的帶有YFP標(biāo)簽的融合表達(dá)載體命名為35S：：CsCSN5b-YFP。為了確保插入方向正確，35S：：CsCSN5b-YFP融合表達(dá)載體進(jìn)一步用載體引物35SBglⅡ-F和CsCSN5b基因擴(kuò)增引物COP9_bR_dTGA進(jìn)行菌落PCR篩選，產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)得到另一條大小約1 200 bp的條帶，與預(yù)期的1 098 bp CsCSN5b基因片段大小相近。進(jìn)一步Bam H Ⅰ酶切鑒定，酶切產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，有2個(gè)條帶，其中一條是35S：YFP載體，大小在15 000 bp左右，另一條大小約1 200 bp，與預(yù)期的1 098 bp CsCSN5b基因片段大小相近。

2.4 CsCSN5b編碼的蛋白質(zhì)亞細(xì)胞定位分析

激光共聚焦顯微鏡觀察到綠色熒光蛋白在煙草表皮細(xì)胞高效瞬時(shí)表達(dá)，35S：：CsCSN5b-YFP融合蛋白在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中均有綠色熒光信號(hào)，用DAPI處理發(fā)現(xiàn)35S：：CsCSN5b-YFP融合蛋白在表皮細(xì)胞的細(xì)胞核中有熒光信號(hào)，所以可以推測(cè)CsCSN5b蛋白的亞細(xì)胞定位在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中。

2.5 CsCSN5b-YFP的表達(dá)檢測(cè)

浸潤(rùn)C(jī)sCSN5b-YFP的煙草葉片可以擴(kuò)增到1條與CsCSN5b目的片段大小一致的條帶，空載體沒有出現(xiàn)對(duì)應(yīng)條帶，表明重組蛋白轉(zhuǎn)錄正常。

提取浸潤(rùn)處煙草葉片植物總蛋白質(zhì)，進(jìn)行Western Blotting蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)，結(jié)果顯示，63 000處有單一目的條帶，與預(yù)期的CsCSN5b-YFP融合蛋白大小一致，接種YFP的煙草在27 000處有條帶，與預(yù)期的YFP大小一致。表明提取的植物蛋白質(zhì)與抗YFP抗體發(fā)生特異性結(jié)合，說明構(gòu)建的融合蛋白成功表達(dá)。

2.6 CsCSN5b基因表達(dá)分析

熒光定量PCR結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，CGMMV處理的黃瓜葉片中CsCSN5b基因相對(duì)表達(dá)量隨著時(shí)間的推移升高，CGMMV處理的第7 d CsCSN5b基因表達(dá)量是對(duì)照組的1.24倍，第15 d CsCSN5b基因表達(dá)量是對(duì)照組的1.67倍，第25 d CsCSN5b基因表達(dá)量是對(duì)照組的5.74倍。說明CsCSN5b基因能夠響應(yīng)CGMMV侵染脅迫，上調(diào)表達(dá)，該基因可能是CGMMV生物脅迫的反應(yīng)基因。

3 討論

CSN首先發(fā)現(xiàn)于擬南芥中，相對(duì)分子質(zhì)量為450 000～550 000[23]，后來在人類、果蠅、酵母等生物中相繼發(fā)現(xiàn)，不同亞基在不同生物體中的功能和數(shù)目有較大的差異[24]。CSN主要通過金屬蛋白酶活性、去泛素化活性和蛋白激酶活性在生物體內(nèi)發(fā)揮生物學(xué)作用[25-27]，參與植物激素信號(hào)傳導(dǎo)、逆境脅迫應(yīng)答、次生代謝等活動(dòng)。N基因是抗煙草花葉病毒（TMV）的典型基因，煙草中證實(shí)NbRar1和NbSGT1對(duì)N基因介導(dǎo)的抗病毒作用是必需的，采用酵母雙雜技術(shù)和免疫共沉淀技術(shù)發(fā)現(xiàn)NbCOP9復(fù)合物與這2種基因有聯(lián)系，利用VIGS技術(shù)發(fā)現(xiàn)NbCOP9復(fù)合體表達(dá)水平下降導(dǎo)致N基因介導(dǎo)的TMV抗性下降[28]。雙生病毒C2蛋白與CSN5互作，改變CSN復(fù)合物的活性，干擾寄主對(duì)病毒蛋白泛素化過程。

CSN5比較特別，它參與各種細(xì)胞活動(dòng)的調(diào)控，如細(xì)胞的增殖和凋亡[29]，單獨(dú)或以復(fù)合體形式存在都可以發(fā)揮功能[30]。CSN5的催化中心是Jab1/MPN/Mov34（JAMM）子結(jié)構(gòu)域，它可以調(diào)節(jié)降解類泛素化酶的活性，為CSN發(fā)揮作用提供幫助。2014年發(fā)現(xiàn)擬南芥中CSN5是由2個(gè)同源基因編碼的CSN5a和CSN5b異構(gòu)體組成，在擬南芥生長(zhǎng)過程中突變其中1個(gè)基因植物能生長(zhǎng)，2個(gè)基因同時(shí)突變就會(huì)產(chǎn)生典型的cop/det/fus突變體致死表型，說明兩者行使了部分重疊功能[31]。2011年在CSN5基因沉默突變株中發(fā)現(xiàn)茉莉酸的合成量大大降低，水楊酸含量無變化[32];2018年發(fā)現(xiàn)擬南芥csn5a缺陷型影響表面毛狀體和花青素、苯丙素、類胡蘿卜素等化合物的合成，從而改變了TTG1/bHLH/MYB轉(zhuǎn)錄復(fù)合物的調(diào)控協(xié)同性[33];2017年在小麥上接種葉銹病病菌發(fā)現(xiàn)高抗性的宿主體內(nèi)TaCSN5轉(zhuǎn)錄豐度較高[34]。

黃瓜是瓜類蔬菜作物中具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值的一類[35-38]，近年來CGMMV在葫蘆科作物上的危害漸趨嚴(yán)重，并已成為危害設(shè)施瓜類作物的主要病毒。本研究首次從黃瓜中克隆了COP9信號(hào)復(fù)合體亞基CsCSN5b基因，該基因ORF全長(zhǎng)1 098 bp，編碼的蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量36 700，該蛋白質(zhì)含有1個(gè)保守的MPN功能域，與CSN5蛋白結(jié)構(gòu)相似，氨基酸序列比對(duì)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CsCSN5b與葫蘆科植物的CSN親緣關(guān)系較近。本研究構(gòu)建了帶有YFP熒光標(biāo)簽的重組表達(dá)載體CsCSN5b-YFP，轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌后浸潤(rùn)接種煙草，進(jìn)一步研究其亞細(xì)胞定位特征，發(fā)現(xiàn)帶YFP標(biāo)簽的CsCSN5b蛋白成功在煙草細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)，這是首次在黃瓜中克隆CsCSN5b基因并研究其亞細(xì)胞定位特征，為研究其功能提供了基礎(chǔ)。在本研究中，CGMMV侵染黃瓜苗后，CsCSN5b基因表達(dá)量逐漸上升，說明該基因參與了病毒脅迫的應(yīng)答機(jī)制，響應(yīng)CGMMV感染脅迫。但是CsCSN5b基因在黃瓜受CGMMV感染后具體表達(dá)模式和調(diào)控機(jī)制尚不明確，需要更深入的探究。

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（責(zé)任編輯：陳海霞）

收稿日期：2020-10-23

基金項(xiàng)目：江蘇省農(nóng)業(yè)科技自主創(chuàng)新基金項(xiàng)目[CX（19）3108];國(guó)家公益性行業(yè)科研專項(xiàng)（201303028）;國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（31501610）

作者簡(jiǎn)介：繆 倩（1986-），女，江蘇常州人，碩士研究生，主要從事植物病毒研究。（E-mail）：miaoqian603@163.com

通訊作者：程兆榜，（E-mail）onlyone8501@126.com