王維政，楊林桐，楊二軍，謝瑞濤,3，陳剛,2，黃建盛,2*

( 1.廣東海洋大學(xué) 水產(chǎn)學(xué)院，廣東 湛江 524088；2.南方海洋科學(xué)與工程廣東省實(shí)驗室（湛江），廣東 湛江 524025；3.廣東恒興飼料實(shí)業(yè)股份有限公司，廣東 湛江 524022)

1 引言

免疫是動物以維持自身穩(wěn)態(tài)為目的而進(jìn)行的一種特異性的生理反應(yīng)，根據(jù)免疫響應(yīng)的類型，魚類的免疫分為先天免疫和適應(yīng)性免疫。先天免疫構(gòu)成了魚類抵御外界病原體感染的第一道防線，在早期的識別以及后期觸發(fā)病原體入侵而導(dǎo)致的促炎反應(yīng)中起著重要作用，通過模式識別受體（Pattern Recognition Receptors，PRRs）對病原體入侵的識別而啟動。適應(yīng)性免疫則負(fù)責(zé)對特定病原體產(chǎn)生特異性的免疫應(yīng)答，兩者在防御、自穩(wěn)和監(jiān)督方面發(fā)揮關(guān)鍵作用[1-2]。免疫系統(tǒng)主要包括免疫組織及器官、免疫細(xì)胞和免疫因子3種組成成分[3]。免疫組織和器官是動物機(jī)體免疫細(xì)胞發(fā)生、成熟、活化及最終產(chǎn)生免疫應(yīng)答的場所，魚類的免疫器官分為中樞免疫器官和外周免疫器官[4]，其中鰓、肝臟、腸道和脾臟是魚類重要的免疫器官[5-8]，在免疫應(yīng)答中扮演著重要的角色。免疫細(xì)胞包括淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞和粒細(xì)胞等，主要分布在免疫器官、淋巴液和血液中。免疫因子則包含細(xì)胞因子、補(bǔ)體和抗菌肽等[9-11]，共同發(fā)揮免疫應(yīng)答功能。

低氧是一種由人類活動或者環(huán)境變化引起的自然現(xiàn)象，作為魚類的應(yīng)激條件之一，會對魚類的生長和健康造成影響。持續(xù)暴露在低氧環(huán)境中，魚類的行為、代謝發(fā)生異常，還可能對免疫功能造成損傷，甚至導(dǎo)致魚類的死亡[12]。據(jù)報道，相對于常氧，低氧對尼羅羅非魚（Oreochromis niloticus）的免疫系統(tǒng)具有明顯的抑制作用[13]。長期的低氧脅迫導(dǎo)致大西洋鮭（Salmo salar）免疫相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)量的降低或延遲，從而改變其免疫反應(yīng)[14]。在對金頭鯛（Sparus aurata）的研究中也發(fā)現(xiàn)，低氧脅迫會抑制其頭腎白細(xì)胞的呼吸爆發(fā)活力，從而降低其免疫力[15]。由此可見，低氧與魚類的免疫能力息息相關(guān)，研究低氧對魚類免疫功能的影響具有重要意義。

軍曹魚（Rachycentron canadum），隸屬于鱸形目的單科單屬單種魚類（軍曹魚科，軍曹魚屬），又被稱作海鱺和海龍魚，屬于大型洄游性魚類，在世界各地均有分布。軍曹魚因其飼料轉(zhuǎn)化率高、肉質(zhì)鮮美和市場價值巨大，在亞洲（尤其是中國）、北美洲、加勒比地區(qū)和南美洲大西洋沿岸等地區(qū)均有養(yǎng)殖[16]，在全世界范圍內(nèi)的年產(chǎn)量約為59 538 t[17]。目前，關(guān)于低氧對軍曹魚免疫方面的報道還相對匱乏，本實(shí)驗室前期開展了低氧對軍曹魚幼魚肝臟免疫相關(guān)酶活的研究，為了進(jìn)一步探究低氧對軍曹魚免疫功能的影響，本文以軍曹魚幼魚為研究對象，探討低氧對其免疫相關(guān)基因腫瘤壞死因子α（TNFα）、腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白 3（TNFAIP3）、白細(xì)胞介素 1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素1受體 2（IL-1R2）、白細(xì)胞介素 17C（IL-17C）和熱休克蛋白70（HSP70）在不同組織（鰓、肝臟、腸道和脾臟）中的轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)情況，為闡明軍曹魚低氧適應(yīng)機(jī)制提供基礎(chǔ)資料。

2 材料與方法

2.1 實(shí)驗材料

本研究所用軍曹魚為當(dāng)年人工繁育的幼魚，2019年6月運(yùn)到廣東恒興飼料股份有限公司863基地后，于室內(nèi)24 h流水養(yǎng)殖系統(tǒng)暫養(yǎng)1周，初始體質(zhì)量為（50.44±2.78）g，體長為（16.87±2.19）cm。暫養(yǎng)水溫為（29±1）℃，溶解氧濃度在 6 mg/L以上，鹽度為28～30，pH為7.8～8.0，自然光周期，每天早上 8:00和下午4:00各飽食投喂配合飼料（廣東越群海洋生物研究開發(fā)有限公司）1次，1 h后清除殘餌和糞便，實(shí)驗開始前1天停止投喂。

2.2 低氧脅迫實(shí)驗

根據(jù)實(shí)驗要求將軍曹魚幼魚分為常氧對照組和低氧脅迫組，每個處理組有3個重復(fù)，每個重復(fù)有35尾魚。實(shí)驗周期為28 d，常氧對照組所有條件與暫養(yǎng)期間一致，低氧脅迫組除溶解氧濃度控制在（3.15±0.21）mg/L的水平外，其他條件與暫養(yǎng)相同。低氧脅迫組的溶氧條件實(shí)現(xiàn)方法：首先關(guān)掉流水以及停止充氣，在每個養(yǎng)殖水槽上方覆蓋聚乙烯薄膜，最大限度地隔絕空氣與水體的接觸，利用軍曹魚的呼吸作用使水體的溶解氧濃度降至3 mg/L左右，其次不斷調(diào)節(jié)充氣量的大小以及流水速度來控制氧氣的輸入，以此穩(wěn)定實(shí)驗所需的溶氧條件，期間使用化學(xué)滴定法（GB 7489—87）檢測水體的溶氧量。最終在實(shí)驗期間，低氧脅迫組的溶解氧濃度穩(wěn)定在（3.15±0.21）mg/L，常氧對照組溶解氧濃度為（6.18±0.24）mg/L。實(shí)驗結(jié)束時低氧脅迫組軍曹魚體質(zhì)量為（58.44±3.03）g，體長為（18.23±1.48）cm，常氧對照組軍曹魚體質(zhì)量為（119.17±5.80）g，體長為（20.94±1.32）cm。

實(shí)驗分別在低氧脅迫的第1天、第7天、第14天和第28天進(jìn)行取樣，且同時取對照組樣品。取樣時每個水槽取5尾軍曹魚，使用MS-222進(jìn)行麻醉，解剖取鰓、肝臟、腸道和脾臟，裝進(jìn)2 mL凍存管后置于液氮速凍，運(yùn)回實(shí)驗室后放進(jìn)-80℃冰箱保存待測。

2.3 總RNA的提取以及反轉(zhuǎn)錄

軍曹魚幼魚各組織樣品在液氮中研磨后，使用總RNA提取試劑盒TransZol Up Plus RNA Kit（北京全式金生物有限公司）提取組織的總RNA。通過1.5%瓊脂糖凝膠電泳和超微量核酸蛋白測定儀檢測其完整性和濃度后，以提取的總RNA為模板，根據(jù)反轉(zhuǎn)錄試劑盒EasyScript First-Strand cDNA Synthesis SuperMix（北京全式金生物有限公司）說明書進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，合成模板cDNA。

2.4 引物設(shè)計

根據(jù)本實(shí)驗室已有的軍曹魚肝臟轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，篩選出注釋為 TNFα、TNFAIP3、IL-1β、IL-1R2、IL-17C、HSP70和內(nèi)參基因β-actin的unigene。經(jīng)NCBI數(shù)據(jù)庫Blast比對驗證后，利用Primer Primer 6.0設(shè)計特異性引物 TNFα-F/R、TNFAIP3-F/R、IL-1β-F/R、IL-1R2-F/R、IL-17C-F/R、HSP70-F/R和β-actin-F/R（表1），用于實(shí)時熒光定量PCR（qRT-PCR）檢測，每組樣品重復(fù)3次，采用2-△△CT的方法計算各基因的相對表達(dá)量。

表1 本研究所用引物序列Table 1 Primer sequences used in this study

2.5 數(shù)據(jù)分析

使用GraphPad Prism 8軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行作圖，采用配對t檢驗的方法進(jìn)行數(shù)據(jù)差異顯著性分析，p＜0.05表示差異顯著，p＜0.01表示差異極顯著。

3 結(jié)果

3.1 低氧脅迫對軍曹魚幼魚鰓組織免疫相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)的影響

低氧脅迫對軍曹魚幼魚鰓組織免疫相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)的影響見圖1。由圖1可知，在鰓組織中，低氧脅迫后，TNFα、IL-1R2和HSP70變化趨勢相同，在脅迫1 d時，TNFα、IL-1R2基因表達(dá)量極顯著下降（p＜0.01），HSP70 顯著下降（p＜0.05），在脅迫 7 d 時上升至與對照組無顯著性差異的水平后，在脅迫14 d時均極顯著下降（p＜0.01），在脅迫 28 d 時，TNFα、HSP70基因表達(dá)量極顯著下降（p＜0.01），IL-1R2顯著下降（p＜0.05）；TNFAIP3 在脅迫 1 d 時極顯著上升（p＜0.01）后呈下降趨勢，其中在脅迫7 d和14 d時分別與對照水平具有顯著（p＜0.05）和極顯著差異（p＜0.01），在脅迫28 d時上升至與對照組無顯著差異的水平；IL-1β在脅迫1 d時極顯著下降后極顯著升高（p＜0.01），在脅迫7 d、14 d和28 d時極顯著高于對照組（p＜0.01）；IL-17C 在脅迫7 d 和14 d 時極顯著下降（p＜0.01），脅迫1 d和28 d與對照水平無顯著差異。

圖1 低氧脅迫后軍曹魚幼魚鰓組織 TNFα（a）、TNFAIP3（b）、IL-1β（c）、IL-1R2（d）、IL-17C（e）和 HSP70（f）基因的相對表達(dá)量Fig.1 Relative expression of TNFα (a), TNFAIP3 (b), IL-1β (c), IL-1R2 (d), IL-17C (e) and HSP70 (f) genes in gill of juvenile cobia after hypoxia

3.2 低氧脅迫對軍曹魚幼魚肝臟免疫相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)的影響

低氧脅迫對軍曹魚幼魚肝臟免疫相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)的影響見圖2。由圖2可知，在肝臟中，低氧脅迫后，TNFα和IL-1R2表達(dá)趨勢一致，在脅迫1 d時顯著下降（p＜0.05）后上升，脅迫7 d時與對照組無顯著差異，在脅迫14 d和28 d時分別極顯著（p＜0.01）和顯著低于對照水平（p＜0.05）；TNFAIP3在脅迫 1 d時極顯著升高（p＜0.01）后顯著下降，并且在脅迫14 d和28 d 時與對照組具有極顯著差異（p＜0.01）；IL-1β 在所有時間點(diǎn)均極顯著高于對照水平（p＜0.01）；IL-17C在脅迫 7 d、14 d和 28 d時極顯著下降（p＜0.01）；HSP70基因表現(xiàn)為不斷升高的變化趨勢，在脅迫7 d和14 d時顯著升高（p＜0.05），在28 d 時則極顯著上升（p＜0.01）。

圖2 低氧脅迫后軍曹魚幼魚肝組織 TNFα（a）、TNFAIP3（b）、IL-1β（c）、IL-1R2（d）、IL-17C（e）和 HSP70（f）基因的相對表達(dá)量Fig.2 Relative expression of TNFα (a), TNFAIP3 (b), IL-1β (c), IL-1R2 (d), IL-17C (e) and HSP70 (f) genes in liver of juvenile cobia after hypoxia

3.3 低氧脅迫對軍曹魚幼魚腸道免疫相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)的影響

低氧脅迫對軍曹魚幼魚腸道免疫相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)的影響見圖3。由圖3可知，在腸道中，低氧脅迫后，TNFα、IL-1β、IL-1R2、IL-17C和 HSP70基因表達(dá)量在脅迫的所有時間點(diǎn)均極顯著高于對照組（p＜0.01），TNFAIP3基因表達(dá)量在脅迫 1 d時極顯著升高（p＜0.01）后顯著下降，并且在脅迫7 d和14 d分別與對照組具有顯著差異（p＜0.05）和極顯著差異（p＜0.01）。

圖3 低氧脅迫后軍曹魚幼魚腸組織 TNFα（a）、TNFAIP3（b）、IL-1β（c）、IL-1R2（d）、IL-17C（e）和 HSP70（f）基因的相對表達(dá)量Fig.3 Relative expression of TNFα (a), TNFAIP3 (b), IL-1β (c), IL-1R2 (d), IL-17C (e) and HSP70 (f) genes in intestine of juvenile cobia after hypoxia

3.4 低氧脅迫對軍曹魚幼魚脾臟免疫相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)的影響

低氧脅迫對軍曹魚幼魚脾臟免疫相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)的影響見圖4。由圖4可知，在脾臟中，低氧脅迫后TNFα、IL-1β、IL-1R2和IL-17C具有相同的變化趨勢，在脅迫的所有時間點(diǎn)均有明顯的下降，其中，TNFα和IL-17C在脅迫1 d、7 d和14 d時極顯著下降（p＜0.01），在脅迫 28 d時則顯著下降（p＜0.05）；IL-1β在脅迫 1 d和 28 d時極顯著下降（p＜0.01），在脅迫7 d 和 14 d 時則顯著下降（p＜0.05）；IL-1R2 在脅迫 1 d、7 d和 28 d時極顯著下降（p＜0.01），在脅迫 14 d時則顯著下降（p＜0.05）。

圖4 低氧脅迫后軍曹魚幼魚脾組織 TNFα（a）、TNFAIP3（b）、IL-1β（c）、IL-1R2（d）、IL-17C（e）和 HSP70（f）基因的相對表達(dá)量Fig.4 Relative expression of TNFα (a), TNFAIP3 (b), IL-1β (c), IL-1R2 (d), IL-17C (e) and HSP70 (f) genes in spleen of juvenile cobia after hypoxia

4 討論

在養(yǎng)殖條件下，魚類經(jīng)常會受到低氧等的環(huán)境脅迫壓力，暴露在環(huán)境脅迫中的魚類不僅新陳代謝、滲透調(diào)節(jié)等會受到影響，其免疫屏障功能也會受損，如果長期受到環(huán)境脅迫的壓力，還可能導(dǎo)致其生長緩慢、行為異常，并且增加其疾病易感性，對魚類的養(yǎng)殖造成嚴(yán)重的損失[18]。在魚類的免疫系統(tǒng)中，細(xì)胞因子由免疫細(xì)胞分泌，是一種調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答、修復(fù)損傷組織和抵抗病原體感染的關(guān)鍵介質(zhì)[19]。TNFα是一種由巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞和分化的T細(xì)胞產(chǎn)生的促炎細(xì)胞因子，通過增加IL-1β和IL-6的產(chǎn)生、黏附因子的表達(dá)、成纖維細(xì)胞的增殖以及啟動細(xì)胞毒性、凋亡和急性反應(yīng)等實(shí)現(xiàn)促炎作用。IL-1β也是一種研究廣泛的促炎細(xì)胞因子，通過各種類型的細(xì)胞啟動2型環(huán)氧化物酶、磷脂酶A和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶而產(chǎn)生，具有免疫上調(diào)和促炎活性[20]。TNFAIP3作為一種負(fù)調(diào)控因子，在免疫信號通路的負(fù)反饋調(diào)節(jié)中具有重要作用，可以作為NF-kB信號通路的負(fù)反饋調(diào)節(jié)因子，對NF-kB具有抑制功能，用以應(yīng)對包括TNFα、IL-1β和LPS引起的多種炎癥刺激，對于維持免疫穩(wěn)態(tài)至關(guān)重要[21]。IL-1R2是IL-1受體家族的細(xì)胞因子受體，可調(diào)節(jié)細(xì)胞代謝和多種細(xì)胞因子誘導(dǎo)的免疫炎癥反應(yīng)，同時，IL-1R2是一個分子誘餌，可引誘IL-1β的結(jié)合而不啟動后續(xù)的反應(yīng)，從而抑制炎癥，研究表明，其在潰瘍性結(jié)腸炎緩解過程中起著穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)作用[22]。IL-17C作為先天免疫的中介因子，通過激活NF-kB通路和MAPK通路，在黏膜炎癥和宿主抗病中發(fā)揮重要作用[23]。熱休克蛋白（HSPs）在正常和應(yīng)激條件下都發(fā)揮著重要的生物學(xué)作用，正常情況下，作為分子伴侶蛋白參與蛋白質(zhì)的折疊和運(yùn)輸、細(xì)胞周期調(diào)控和細(xì)胞凋亡等，而在生物機(jī)體受到低氧等環(huán)境脅迫和微生物感染時，為了維持機(jī)體平衡，HSPs的表達(dá)顯著增加[18]。HSP70作為一種應(yīng)激反應(yīng)蛋白可激活先天免疫，參與保護(hù)細(xì)胞質(zhì)成分、對抗包括細(xì)菌感染在內(nèi)的各種應(yīng)激條件，并在保護(hù)生物體免受應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷中具有關(guān)鍵作用[24-25]。

為了揭示低氧脅迫對軍曹魚幼魚免疫功能的影響，本研究分析比較6種免疫相關(guān)基因在鰓、肝臟、腸道和脾臟中的轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)情況，結(jié)果顯示，該6個基因在不同組織中具有不同的變化趨勢，原因可能是組織器官的功能特異性導(dǎo)致6個免疫相關(guān)基因響應(yīng)情況的差異。魚類的鰓直接與水體接觸，是魚類進(jìn)行氣體和水體交換的場所，具有濾食、排泄、調(diào)節(jié)滲透壓和酸堿平衡的作用，同時，魚鰓作為黏膜淋巴組織之一，也是魚體的免疫器官[26]。肝臟作為脊椎動物最大的腺體器官，在消化、能量代謝和激素合成等方面具有重要意義，此外，肝臟還含有大量的免疫細(xì)胞，能夠分泌產(chǎn)生細(xì)胞因子和補(bǔ)體等以應(yīng)對病原體的入侵[27-28]。本文結(jié)果顯示，軍曹魚幼魚的鰓和肝臟中免疫基因的轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)情況類似，TNFα、TNFAIP3、IL-1R2和IL-17C的表達(dá)在低氧脅迫后均出現(xiàn)了顯著和極顯著下降的變化情況，提示軍曹魚幼魚的鰓和肝臟在脅迫過程中可能具有類似的免疫應(yīng)答機(jī)制，根據(jù)基因的功能表明，低氧可能降低了鰓和肝臟的免疫能力。在前期實(shí)驗結(jié)果中，低氧脅迫后，軍曹魚幼魚血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性顯著升高，表明幼魚肝臟受到一定程度的損傷[29]，在卵形鯧鲹的研究結(jié)果中，14 d的低氧嚴(yán)重影響其鰓器官形態(tài)結(jié)構(gòu)，肝組織發(fā)生明顯的病理變化，受損嚴(yán)重[30-31]，由此推測，低氧也可能對軍曹魚幼魚的鰓和肝臟造成損傷，從而導(dǎo)致其免疫功能受到影響。IL-1β在鰓和肝臟中與其他炎癥基因變化趨勢相反，提示其參與鰓和肝臟免疫調(diào)控的機(jī)制可能存在差異，IL-1R2的誘餌功能以及TNFAIP3的負(fù)反饋調(diào)節(jié)作用的下降也可能是其表達(dá)升高的原因。HSP70基因的轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)情況在鰓和肝臟中呈現(xiàn)相反的趨勢，其表達(dá)量在鰓組織中出現(xiàn)顯著和極顯著下降的情況，而在肝臟中則持續(xù)升高，暗示與鰓組織相比，HSP70可能在肝臟抵御低氧脅迫過程中發(fā)揮關(guān)鍵的作用。此外，在研究結(jié)果中還觀察到，總體來看，在低氧脅迫14 d和28 d后，免疫基因的表達(dá)量明顯低于脅迫1 d和7 d，對此，研究表明，魚類長期處于脅迫條件下，其免疫反應(yīng)會受到抑制[32]，該結(jié)果進(jìn)一步說明28 d的低氧脅迫可能造成軍曹魚幼魚的鰓和肝臟免疫功能的下降。

腸道除了具有消化和吸收功能以外，還具有免疫屏障功能，在腸黏膜中分布有大量的淋巴細(xì)胞以抵御病原體的入侵，是魚體防御的第一道屏障[33]。研究發(fā)現(xiàn)，長時間的低氧應(yīng)激會破壞腸道的緊密連接結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致腸道的固有屏障受損，從而增加腸道的通透性，進(jìn)而增加病原體入侵的機(jī)會，引發(fā)腸道的免疫炎癥[34-35]。通常，慢性腸道炎癥還會伴隨著促炎細(xì)胞因子的增加以及中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的積累[36]。在本文的研究結(jié)果中，低氧脅迫后腸道TNFα、IL-1β和IL-17C等炎癥相關(guān)基因以及HSP70基因的轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)量極顯著升高，負(fù)反饋調(diào)節(jié)因子TNFAIP3極顯著升高后再顯著下降。再結(jié)合實(shí)驗室前期研究結(jié)果，低氧導(dǎo)致軍曹魚幼魚腸黏膜皺襞高度、絨毛寬度、肌層厚度顯著下降，微絨毛排列雜亂、萎縮、脫落（數(shù)據(jù)還未發(fā)表）以及腸道菌群中條件致病菌的增多[37]，暗示低氧可能對腸道產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致軍曹魚幼魚腸道結(jié)構(gòu)受損，腸道通透性增加造成病原菌的入侵，進(jìn)而引發(fā)了腸道炎癥，導(dǎo)致軍曹魚腸道炎癥相關(guān)基因和HSP70表達(dá)的增加。Niklasson等[38]研究也發(fā)現(xiàn)，長期的低氧引發(fā)了大西洋鮭的腸道炎癥，腸道白細(xì)胞浸潤增加，然而，其腸道促炎細(xì)胞因子IL-1β和IFN γ卻沒有升高的現(xiàn)象，與本文結(jié)果有所差異，推測其原因，可能是脅迫的時間、程度以及魚的種類不同所致。

脾臟是硬骨魚免疫系統(tǒng)中最后發(fā)育形成的免疫器官[8]，含有淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，發(fā)揮免疫功能，負(fù)責(zé)保護(hù)機(jī)體免受病原體的入侵和檢測異常細(xì)胞，也是紅細(xì)胞、中性粒細(xì)胞產(chǎn)生、成熟以及儲存的地點(diǎn)，具有造血功能[39-40]。Mu等[41]對大黃魚（Larimichthys crocea）低氧脅迫后的脾臟轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行分析，挖掘出大量免疫相關(guān)的差異表達(dá)基因，包括模式識別受體（PRRs），如 Toll樣受體（TLR-1、TLR2-1、TLR2-2）、凝集素（FUCL1、FUCL4、FUCL5）和巨噬細(xì)胞甘露糖受體（MRC1）等均受到低氧的抑制，表達(dá)量顯著下降，表明低氧可能抑制了PRRs介導(dǎo)的幾種免疫應(yīng)答的信號通路。本文的研究結(jié)果也出現(xiàn)類似的現(xiàn)象，低氧脅迫導(dǎo)致軍曹魚幼魚脾臟6種免疫基因均表現(xiàn)出不同程度的下降趨勢，提示低氧可能抑制了軍曹魚幼魚脾臟的免疫功能，進(jìn)而可能增加其感染病原菌的風(fēng)險。

綜上，28 d低氧脅迫后，軍曹魚幼魚鰓、肝臟、腸道和脾臟中的免疫相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平發(fā)生顯著性的變化，長期的低氧可能抑制了幼魚的免疫功能，引發(fā)腸道炎癥，并增加幼魚感染病原菌的風(fēng)險。