朱文博，張秋萍，許繼飛，2*，龐小可，劉建國(guó)，趙吉，2

（1.內(nèi)蒙古大學(xué)生態(tài)與環(huán)境學(xué)院，呼和浩特 010021；2.內(nèi)蒙古自治區(qū)環(huán)境污染控制與廢物資源化重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，呼和浩特 010021；3.內(nèi)蒙古工業(yè)大學(xué)能源與動(dòng)力工程學(xué)院，呼和浩特 010051）

在畜牧養(yǎng)殖業(yè)快速發(fā)展的同時(shí)，大量畜禽糞便產(chǎn)生，我國(guó)每年畜禽糞污產(chǎn)生量高達(dá)38 億t，其中牛糞占比最高，這些糞便若不能得到合理處置，將造成不容忽視的環(huán)境污染[1-2]。近年來，畜禽糞便中的抗生素抗性污染問題日益凸顯，抗生素抗性基因（Antibiotic resistance genes，ARGs）在畜禽糞便中被頻繁檢出，尤其是四環(huán)素類抗性基因（Tetracycline resistance genes，TRGs）[3-5]。當(dāng)糞便進(jìn)入環(huán)境后，糞源ARGs 會(huì)在環(huán)境微生物間轉(zhuǎn)移和傳播，從而對(duì)人類健康和生態(tài)系統(tǒng)造成長(zhǎng)期、不可逆的危害[6-7]。厭氧消化是糞便資源化利用的一種主要方式，也是在源頭上削減環(huán)境抗生素抗性的管控措施之一[8]。因此，許多研究關(guān)注厭氧消化對(duì)畜禽糞便中ARGs 尤其是牛糞中TRGs 的削減作用[9-12]。

消化原料是畜禽糞便厭氧消化的一個(gè)重要因素[13]，對(duì)ARGs 的削減效果有顯著影響[14]。CHENG等[4]的研究表明，來源于不同養(yǎng)殖場(chǎng)的豬糞經(jīng)厭氧消化后ARGs 的變化不同。CHEN 等[15]和SUI 等[16]發(fā)現(xiàn)厭氧消化對(duì)同一養(yǎng)豬場(chǎng)不同時(shí)間段豬糞原料中ARGs的去除效果也具有顯著差異。消化原料的差異實(shí)質(zhì)上是理化性質(zhì)的差異，其可能是養(yǎng)殖規(guī)模大小、牲畜飲水浪費(fèi)水量、清糞方式（干清糞或水清糞）甚至季節(jié)間的差異等造成的[17]。對(duì)于養(yǎng)殖場(chǎng)，無論是清糞方式還是牲畜飲水浪費(fèi)水量的不同都將在糞便的收集過程中造成廢水干預(yù)，直接影響消化原料的理化性質(zhì)[18]。另外，原料的差異也會(huì)影響厭氧消化過程中的微生物群落[19]，而微生物群落又是改變ARGs 行為特征的主要因素[19-21]。由此可知，廢水干預(yù)必然會(huì)改變糞便的理化性質(zhì)，進(jìn)而影響厭氧消化對(duì)ARGs 的去除效果。然而，以廢水干預(yù)后的糞便為消化原料，對(duì)消化過程中ARGs豐度變化的研究鮮有報(bào)道。

溫度也是影響厭氧消化和ARGs 豐度變化的一個(gè)重要工藝參數(shù)，研究表明高溫厭氧消化較中溫相比產(chǎn)氣量更高且在ARGs 的削減方面更有優(yōu)勢(shì)[9，22]。因此，本研究開展不同牛糞原料濃度的高溫厭氧消化試驗(yàn)，以TRGs為研究對(duì)象，主要探究廢水干預(yù)下的牛糞原料在厭氧消化過程中ARGs 的變化特征，并探尋不同原料濃度條件下ARGs、微生物群落和理化因子間的相互關(guān)系，從ARGs 削減角度為畜禽糞便的管理提供理論支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

在內(nèi)蒙古呼和浩特某規(guī)?；膛ｐB(yǎng)殖場(chǎng)的非沖洗時(shí)間段采集糞便收集池中的牛糞，4 ℃保存運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室。牛糞樣品總固體含量（TS）為3%，pH 為6.86，氨氮（TAN）濃度為789.19 mg·L-1，可溶性COD（SCOD）濃度為6 828.57 mg·L-1，總揮發(fā)酸（TVFAs）濃度為7 120 mg·L-1，總磷（TP）含量為46.33 mg·L-1。牛糞樣品為液態(tài)，因此直接添加蒸餾水將牛糞分別稀釋至原濃度的100%（不稀釋）、75%、50%和25%，作為厭氧消化的不同原料。選用體積為1.1 L 的厭氧瓶，加入1 L 不同濃度消化原料后通氮?dú)?～8 min。采用并未檢測(cè)出ARGs 的厭氧微生物菌劑（廣州微生源，中國(guó)）作為接種物，其主要為水解發(fā)酵菌和產(chǎn)甲烷菌等厭氧微生物，接種率為0.1%。反應(yīng)溫度為（55±1）℃，每組處理設(shè)置3個(gè)重復(fù)。

1.2 樣品的采集與測(cè)定

通過排水法收集氣體，并記錄每24 h 的產(chǎn)氣量。在反應(yīng)前、第6 d、第14 d 和反應(yīng)結(jié)束時(shí)采集樣品，每次采集樣品1 mL 于離心管內(nèi)，12 000 r·min-1離心5 min，上清液用于理化性質(zhì)的測(cè)定，沉淀物于-80 ℃保存，用于ARGs、intⅠ1和16S rRNA的定量分析以及微生物群落分析。

甲烷含量采用沼氣分析儀（MRU Optima7，德國(guó)）測(cè)定；SCOD 采用重鉻酸鉀法測(cè)定；TAN 采用納氏試劑光度法測(cè)定；TVFAs 通過酸性氯化鐵比色法測(cè)定；pH通過pH計(jì)（PHS-3E，上海雷磁）測(cè)定；TP通過鉬銻抗分光光度法測(cè)定。

1.3 ARGs、intⅠ1和16S rRNA的定量分析

基因組DNA 的提?。翰捎眉S便基因組DNA 提取試劑盒（天根DP-328，北京）提取每毫升樣品沉淀物中的DNA，具體步驟參照試劑盒說明書。所提取DNA 用超微量紫外分光光度計(jì)（Nanodrop-2000，美國(guó)）檢測(cè)其含量和純度（A260/280為1.7～2.0）。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）：通過普通PCR 儀（ABI 9902，美國(guó)）對(duì)糞便原料中17 種ARGs（tetA、tetB、tetC、tetE、tetG、tetO、tetQ、tetT、tetW、tetX、sul1、sul2、dfrA1、dfrA7、ermB、ermC和ermF）進(jìn)行檢測(cè)，共有7 種TRGs 呈陽(yáng)性，包括編碼外排泵基因（tetC、tetG）、編碼核糖體保護(hù)蛋白基因（tetO、tetQ、tetT、tetW）和轉(zhuǎn)座酶修飾基因（tetX）[23]。接著采用熒光定量系統(tǒng)（Bio-Rad CFX96，美國(guó)）對(duì)7個(gè)TRGs、Ⅰ類整合酶基因intⅠ1 和16S rRNA 基因進(jìn)行定量分析，qPCR 所用引物序列、退火溫度和反應(yīng)程序等詳見文獻(xiàn)[12，21]。

1.4 高通量測(cè)序

將提取的DNA 委托上海派森諾生物公司，利用Illumina Novaseq 平臺(tái)進(jìn)行16S rRNA 高通量測(cè)序。測(cè)序區(qū)域?yàn)閂3～V4 區(qū)，引物為338F（ACTCCTACGGCAGGCAGCA）和806R（GGACTACHVGGGTWTCTAAT）。原始序列經(jīng)質(zhì)控后得到高質(zhì)量序列，并在SILVA 16S rRNA數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行比對(duì)。

1.5 數(shù)據(jù)分析

采用Microsoft Office 2013 進(jìn)行原始數(shù)據(jù)整理，SPSS 22.0 進(jìn)行單因素方差分析和Pearson 相關(guān)性分析，Canoco 5.0 完成冗余分析，Origin Pro 9.0 和R 3.5.3作圖。

2 結(jié)果與討論

2.1 厭氧消化性能

不同厭氧消化過程中產(chǎn)沼氣速率如圖1 所示。消化前期產(chǎn)氣速率迅速上升，在第5～7 d 達(dá)到產(chǎn)氣高峰，隨后逐漸下降，直至30 d 以后產(chǎn)氣速率穩(wěn)定。不同原料濃度厭氧消化之間產(chǎn)氣速率相似，最大產(chǎn)氣速率略有差異，100%、75%、50%、25%原料濃度條件下的最大產(chǎn)氣速率分別為43.56、45.03、46.67 mL·g-1·d-1和54.00 mL·g-1·d-1。相應(yīng)地，消化后總產(chǎn)氣量分別為358.83、372.44、384.44 mL·g-1和400.89 mL·g-1。與其他關(guān)于牛糞高溫厭氧消化的研究相比，本研究中100%原料濃度的最大產(chǎn)氣速率高于其他研究[24-25]的21.96 mL·g-1·d-1和32.78 mL·g-1·d-1，總產(chǎn)氣量處于其總產(chǎn)氣量182.28 mL·g-1和388.24 mL·g-1之間。原料濃度越低，單位質(zhì)量總固體產(chǎn)氣量越高，這可能是因?yàn)樵辖?jīng)稀釋后有機(jī)物水解速率增大，產(chǎn)酸產(chǎn)氣菌可利用的有機(jī)質(zhì)增加。杜連柱等[26]在關(guān)于豬糞原料濃度對(duì)厭氧消化產(chǎn)氣性能影響的研究中也得出了相似結(jié)論，即隨著原料濃度降低產(chǎn)氣量升高。厭氧消化結(jié)束時(shí)NH+4-N 濃度為554.72～1 474.14 mg·L-1，低于氨氮抑制濃度[27-28]，且整個(gè)厭氧消化過程中pH 基本維持在7～8，表明不同原料濃度厭氧消化系統(tǒng)均穩(wěn)定運(yùn)行。

2.2 ARGs和intⅠ1豐度變化

大規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)牛糞中檢出7 種ARGs，包括tetC、tetG、tetO、tetQ、tetT、tetW 和tetX，均為TRGs，這是因?yàn)樗沫h(huán)素類藥物在畜禽養(yǎng)殖業(yè)中使用量最大，在畜禽糞便中的殘留也最高[29]。ZHU 等[3]的研究也表明TRGs在動(dòng)物糞便中檢出頻率最高。7 種TRGs 中，tetW 的絕對(duì)豐度最高，為1.70×109copies·mL-1，占總豐度的61.34%，這可能是由于tetW 與一個(gè)編碼功能蛋白的mob基因有關(guān)，從而使其更易在動(dòng)物腸道菌和病原菌之間轉(zhuǎn)移[30]，因此，tetW 是厭氧消化過程中的重點(diǎn)關(guān)注對(duì)象。

為了在同一水平對(duì)比不同處理對(duì)TRGs 的作用，用基因相對(duì)豐度（基因拷貝數(shù)與16S 拷貝數(shù)的比值）來反映TRGs 的變化。如圖2 所示，牛糞原料中7 種TRGs 的總相對(duì)豐度為3.59×10-2，隨著厭氧消化反應(yīng)的推進(jìn)，總相對(duì)豐度顯著增加。消化結(jié)束后，100%、75%、50%、25%原料濃度條件下的總相對(duì)豐度分別為7.10×10-1、7.79×10-1、5.55×10-1和5.04×10-1，隨著原料濃度的降低，總相對(duì)豐度呈先升高后降低的趨勢(shì)，在75%和25%時(shí)分別達(dá)到最大值和最小值。tetW 在消化開始后相對(duì)豐度增加且占比增加，達(dá)到94.84%～99.70%，這也是總相對(duì)豐度升高的主要原因。除去tetW，6種TRGs的總相對(duì)豐度均隨消化過程進(jìn)行而降低，且100%條件下最低，25%條件下最高。由此可見，若要對(duì)比不同處理對(duì)TRGs削減的影響，還需分析單個(gè)TRGs的變化趨勢(shì)。

圖3 為各TRGs 相對(duì)豐度在厭氧消化前后的倍數(shù)變化值（消化后豐度與消化前豐度的比值），倍數(shù)變化值小于1 表示基因被削減，大于1 表示基因被富集。tetC 和tetG 在厭氧消化后均被富集，相對(duì)豐度分別為消化前的1.32～14.34 倍和2.65～31.26 倍。隨著原料濃度的降低，tetC的倍數(shù)變化值呈鋸齒狀上升，tetG則先降低后升高，且二者均在25%條件下富集程度最高。tetO、tetQ 和tetT 幾乎在所有條件下被削減，只有50%條件下的tetO 相對(duì)豐度升高至原來的2.07 倍。對(duì)比不同處理可知，tetO和tetQ的倍數(shù)變化值在100%條件下均最低，而tetT 的倍數(shù)變化值在25%條件下最低，表明較低原料濃度抑制了tetO 和tetQ 的削減，但一定程度上促進(jìn)了tetT 的去除。如前所述，tetW 相對(duì)豐度的增加是總相對(duì)豐度增加的主導(dǎo)因素之一，其倍數(shù)高達(dá)22 倍以上，其中75%和25%條件下的倍數(shù)分別為最大（34.99 倍）和最?。?2.51 倍），與總相對(duì)豐度的規(guī)律一致。tetX 的相對(duì)豐度在50%條件下增加至原來的2.25 倍，而在其他3 種條件下降低，且25%時(shí)降低幅度最大。

由以上分析可知，不同原料濃度下的TRGs 變化具有顯著差異，且原料濃度對(duì)TRGs 的削減規(guī)律不一致。整體來看，較低濃度的厭氧消化增加了大部分TRGs的富集程度。許多研究表明理化性質(zhì)和微生物群落貢獻(xiàn)了ARGs 的變化[19-21]。當(dāng)原料濃度較低時(shí)，一些對(duì)氨氮耐受程度較低的微生物出現(xiàn)競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)，其有可能攜帶ARGs從而導(dǎo)致豐度升高[31]。又或者原料含水量高時(shí)有機(jī)物水解能力增大，使得一些產(chǎn)酸產(chǎn)氣菌的代謝活動(dòng)增強(qiáng)，這類微生物通常也攜帶ARGs，從而導(dǎo)致ARGs 富集程度明顯增加[32]。ARGs 在微生物間的傳播也是ARGs 富集的主要原因之一，intⅠ1 作為一類整合子通常參與ARGs的水平基因轉(zhuǎn)移[33]。如圖3 所示，intⅠ1 的相對(duì)豐度在消化后均增加，且較低原料濃度條件（75%～25%）下其倍數(shù)變化值遠(yuǎn)大于1，這表明較低濃度的牛糞經(jīng)厭氧消化后TRGs 傳播的風(fēng)險(xiǎn)增強(qiáng)。從大部分TRGs 以及intⅠ1 變化的角度考慮，實(shí)際工程中廢水的干預(yù)可能不利于厭氧消化對(duì)牛糞TRGs 的削減作用。

2.3 微生物群落結(jié)構(gòu)

前人研究表明微生物群落的變化是ARGs 變化的驅(qū)動(dòng)因子，因此，探究不同處理間TRGs變化的差異需從微生物群落入手，分析不同處理間微生物群落的差異。圖4 為消化過程中門水平微生物群落結(jié)構(gòu)，從圖中可以看出，消化原料中Firmicutes 為第一優(yōu)勢(shì)菌門，相對(duì)豐度為68.22%，其次為Bacteroidetes 和Proteobacteria，相對(duì)豐度分別為23.32%和6.29%。消化后不同處理中優(yōu)勢(shì)菌門有所改變，100%和75%原料濃度條件下Firmicutes 仍為第一優(yōu)勢(shì)菌門，相對(duì)豐度均為40.46%，而50%和25%原料濃度條件下的第一優(yōu)勢(shì)菌門變?yōu)镻roteobacteria，相對(duì)豐度分別為34.98%和35.57%。另外，整個(gè)消化過程中Firmicutes 的相對(duì)豐度均隨著原料濃度的減小而降低，而Proteobacteria的相對(duì)豐度呈相反趨勢(shì)。這是由于Firmicutes在纖維素的降解中起關(guān)鍵作用，隨著有機(jī)物含量的減少，可供Firmicutes 吸收利用的物質(zhì)減少，其豐度不斷減小[34]；Proteobacteria 可能為兼性或?qū)Ｐ詤捬跫?xì)菌或寡營(yíng)養(yǎng)菌，其在厭氧環(huán)境或有機(jī)物質(zhì)含量較少的情況下更易生存[35]。

圖5 為厭氧消化過程中屬水平微生物（前50）的豐度變化情況，其中按行（樣本）進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。經(jīng)厭氧消化后，屬水平微生物變化較為明顯。一些菌屬經(jīng)消化后相對(duì)豐度顯著降低甚至被殺滅，如Oscillospira、Sedimentibacter和Paludibacter等；而一些菌屬經(jīng)消化后相對(duì)豐度顯著增加，如Rhodococcus、Bosea和unidentified_Christensenellaceae等。不同處理間屬水平微生物差異也較為明顯。消化初期（第6 d），Sedimentibacter、unidentified_Peptostreptococcaceae和unclassified_Clostridiales等的相對(duì)豐度隨著原料濃度的降低而減小，而Oscillospira、unidentified_p-2534-18B5和Aquabacterium的相對(duì)豐度呈相反趨勢(shì)，且Pseudomonas、Comamonas和Brevundimonas等的相對(duì)豐度在75%條件下最高。隨著消化反應(yīng)的進(jìn)行，第14 d 時(shí)Aquabacterium、Pseudomonas和Arcobacter等的相對(duì)豐度隨著原料濃度的降低而增加，且Dechloromonas和unclassified_Pseudomonadaceae的相對(duì)豐度在75%時(shí)最高。直至消化結(jié)束，一些消化過程中相對(duì)豐度較高的菌屬反而降低，如Aquabacterium、Pseudomonas、Comamonas和Brevundimonas等。較低原料濃度條件下（50%和25%）菌屬Dechloromonas、Rhodococcus和Bosea的相對(duì)豐度較高，而較高原料濃度條件下（100%和75%）菌屬unclassified_Ruminococcaceae、unclassified_Bacteroidaceae、Treponema、Clostridium和Syntrophomonas的相對(duì)豐度較高。

以上證據(jù)皆表明不同原料濃度條件下的厭氧消化微生物群落差異較為明顯，尤其是菌門Firmicutes和Proteobacteria，及菌屬Dechloromonas、Rhodococcus、Syntrophomonas和Treponema等。WANG 等[36]的 研 究中表明Firmicutes 和Proteobacteria 通常是ARGs 的潛在宿主菌門，Treponema和Syntrophomonas等是ARGs的潛在宿主菌屬。由此可知，這些微生物在不同處理間的差異可在一定程度上解釋不同處理間TRGs變化的差異，微生物與TRGs間的相關(guān)關(guān)系需進(jìn)一步確認(rèn)。

2.4 TRGs與intⅠ1、理化性質(zhì)和微生物間的相關(guān)關(guān)系

ARGs與微生物之間的相關(guān)性（P＜0.05）可以表示ARGs 的潛在宿主信息[37]，當(dāng)厭氧消化條件改變時(shí)，ARGs 的潛在宿主也可能改變。不同處理?xiàng)l件下的TRGs、intⅠ1和微生物之間的相關(guān)性如圖6所示。隨著原料濃度從100%降低至25%，tetC 的潛在宿主菌由4個(gè)逐漸減少為1 個(gè)（unclassified_Pseudomonadaceae），盡管潛在宿主菌數(shù)目變少，但25%時(shí)unclassified_Pseudomonadaceae較高的相對(duì)豐度造成了tetC在此條件下的相對(duì)豐度最大。tetG 的潛在宿主菌數(shù)目則隨著原料濃度的降低而增加，且在25%時(shí)tetG 與intⅠ1有相關(guān)關(guān)系，這可能是tetG 的倍數(shù)變化值隨原料濃度降低而增大的原因。在50%條件下，tetO 潛在宿主菌數(shù)目較多（3 個(gè)），且其相對(duì)豐度在消化后高于其他處理，反映了tetO 只在此條件下被富集。tetQ 和tetT的潛在宿主菌相似，這些潛在宿主菌相對(duì)豐度經(jīng)消化后減小則代表了tetQ 和tetT 的削減。對(duì)于tetW，unidentified_Bacteroidales、unidentified_Ruminococcaceae和Sphaerochaeta只在50%或25%條件下為其潛在宿主菌，這3種菌屬在50%或25%條件下較低的相對(duì)豐度也代表了tetW 較低的相對(duì)豐度。tetX 在50%條件下的潛在宿主菌為unclassified_Clostridiales，同時(shí)此菌屬也為50%條件下tetO 的潛在宿主菌，這反映了tetX 的相對(duì)豐度變化與tetO 一致，即50%條件下的倍數(shù)變化值遠(yuǎn)高于其他條件。IntⅠ1 與TRGs 的潛在宿主菌幾乎未有重合，說明厭氧消化過程中TRGs 的變化更多地歸因于微生物群落演替而不是水平基因轉(zhuǎn)移。

宿主菌的變化代表了ARGs 的變化，而理化性質(zhì)的變化又影響了宿主菌的變化[18，30]。因此，通過冗余分析來探究不同處理中影響宿主菌變化的關(guān)鍵理化因子（圖7）。數(shù)據(jù)經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化處理，一軸和二軸對(duì)潛在宿主菌變化的解釋度占總變量的52.01%，不同處理之間潛在宿主菌的變化差異較為明顯（P=0.001）。原點(diǎn)與unclassified_Pseudomonadaceae、unidentified_R4-45B和unidentified_RPF12的連線指向25%條件，表示這幾種菌屬的相對(duì)豐度在此條件下較高，且它們?yōu)閠etC 和tetG 在此條件下的潛在宿主菌，與TAN 呈負(fù)相關(guān)，表明這些菌屬可能不耐受高TAN 濃度，25%條件下TAN 濃度較低時(shí)菌屬相對(duì)豐度較高，從而解釋了此條件下tetC 和tetG 富集程度最大的原因。TAN 和pH 也與tetQ 和tetT 的潛在宿主菌Proteiniclasticum、Oscillospira和Paludibacter呈負(fù)相關(guān)，表明較高原料濃度條件下（100%和75%）TAN 和pH 較高時(shí)菌屬的相對(duì)豐度較低，反映了此條件下tetQ 和tetT 的削減效果較好。tetO 在50%條件下的潛在宿主菌Bosea和W22與SCOD 和TVFAs 呈負(fù)相關(guān)，表明此菌屬可能為寡營(yíng)養(yǎng)菌，當(dāng)SCOD 和TVFAs 濃度較低時(shí)菌屬的相對(duì)豐度較高，使得tetO 在此條件下富集。Sphaerochaeta和unidentified_Bacteroidales為tetW 在50%和25%條件下的潛在宿主菌，其與TAN 呈正相關(guān)，50%和25%條件下TAN 濃度較低，從而潛在宿主菌的豐度較低，tetW 的富集程度較弱。結(jié)合圖6 與圖7，TAN 和pH 與tetQ 和tetT 的潛在宿主菌Proteiniclasticum、Oscillospira和Paludibacter，tetC 和tetG 的潛在宿主菌unclassified_Pseudomonadaceae、unidentified_R4-45B和unidentified_RPF12以及tetW 的潛在宿主菌Sphaerochaeta和unidentified_Bacteroidales均存在相關(guān)關(guān)系，SCOD 和TVFAs 與tetO 的潛在宿主菌Bosea和W22存在相關(guān)關(guān)系。由此可知，理化因子在一定程度上解釋了潛在宿主菌的變化及其對(duì)TRGs 變化的影響，即TAN 和pH 與大部分TRGs 如tetC、tetG、tetQ、tetT 和tetW 的變化有關(guān)，而SCOD 和TVFAs 與tetO 的變化有關(guān)。

3 結(jié)論

（1）原料濃度對(duì)產(chǎn)氣速率無明顯影響，但總產(chǎn)氣量隨著原料濃度的降低而逐漸增加。

（2）經(jīng)厭氧消化后，tetC、tetG、tetO 和tetX 以及intⅠ1 在較低原料濃度條件下（75%～25%）相對(duì)豐度更高，富集程度更明顯。

（3）隨著原料濃度的降低，優(yōu)勢(shì)菌門從Firmicutes變?yōu)镻roteobacteria，且TRGs潛在宿主菌的種類和數(shù)目均改變。理化因子通過影響潛在宿主菌的變化從而影響TRGs的變化，TAN和pH與tetC、tetG、tetQ、tetT和tetW的變化有關(guān)，SCOD和TVFAs與tetO的變化有關(guān)。

（4）與100%原料濃度相比，75%～25%原料濃度條件下大部分TRGs 和intⅠ1 的相對(duì)豐度更高，說明廢水的干預(yù)不利于糞便中TRGs 的削減，從而增加糞便后續(xù)土地利用過程中TRGs的傳播風(fēng)險(xiǎn)。