湯電 鄭江濤 李奇潤 譚濤

摘? 要：本試驗(yàn)對比了兩種仔豬球蟲的檢測方法，即使用飽和鹽水漂浮法和尿素溶液漂浮法檢測仔豬球蟲卵囊。結(jié)果顯示，與飽和鹽水漂浮法相比，尿素溶液漂浮法能使糞便樣品含的雜質(zhì)更少，顯微鏡下的視野更清晰，用時(shí)更短，陽性檢出率更高，因此尿素溶液漂浮法更適合規(guī)模化豬場檢測仔豬球蟲。

關(guān)鍵詞：仔豬球蟲;尿素溶液漂浮法;飽和鹽水漂浮法

中圖分類號：S858.28 ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：C ? ? ? ?文章編號：1001-0769（2021）04-0130-03

1? 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 所需材料

食鹽，尿素，生理鹽水，一次性乳膠手套，一次性水杯，記號筆，研缽，醫(yī)用紗布，50 mL燒杯（或輸精瓶）若干，膠頭滴管（或移液器帶吸頭），載玻片，蓋玻片，光學(xué)顯微鏡。

1.1.2 溶液制備

⑴飽和鹽水溶液的配制：每升水（加熱）中加入380 g食鹽，充分?jǐn)嚢柚敝镣耆芙猓龊脴?biāo)記備用。

⑵尿素溶液的配制：每升水（加熱）中加入1 000 g尿素，充分?jǐn)嚢柚敝镣耆芙?，做好?biāo)記備用。

1.1.3 糞便樣品采集

2021年3月，湖南省婁底市某規(guī)模化豬場的仔豬感染等孢球蟲。選取7～21日齡仔豬所在產(chǎn)床，收集不同物理性狀的新鮮糞便，裝入一次性水杯中，將從每窩或每個(gè)產(chǎn)床采集的糞便裝入同一個(gè)杯子中，作為1份樣品供檢測，每份樣品收集3 g～5 g，記錄仔豬日齡和對應(yīng)母豬的耳號，共采集樣品30份。

1.2 方法

⑴研磨：將糞便樣品倒入研缽中，均勻研磨成糊狀，使糞便中的球蟲卵充分釋放出來。

⑵分組：將研磨后的糞便樣品一分為二，分別用兩種溶液攪拌溶解。

⑶過濾：將醫(yī)用紗布疊成4～6層，用于過濾研磨后的糞便樣品，球蟲卵囊可穿過紗布進(jìn)入濾液，隨后棄殘?jiān)?，取濾液。

⑷漂?。簩V液搖勻，倒入燒杯（或輸精瓶）中，加入相應(yīng)的溶液，確保燒杯（或輸精瓶）中的溶液滿而不溢。加入飽和鹽水溶液的燒杯（或輸精瓶）靜置30 min，加入尿素溶液的燒杯（或輸精瓶）靜置10 min。

⑸制片：用膠頭滴管（或移液器）分別從燒杯（或輸精瓶）所盛溶液液面的不同點(diǎn)吸取少量（約20 μL）液體，并將液體滴在載玻片上，蓋上蓋玻片，做好標(biāo)記待檢，注意在蓋蓋玻片時(shí)不要產(chǎn)生氣泡。

⑹鏡檢：用光學(xué)顯微鏡觀察載玻片，在10×10倍的視野中，可在陽性糞便樣品中找到綠豆般大小的圓形或橢圓形疑似球蟲卵囊。隨后切換至10×40倍視野，逐個(gè)觀察，拍照記錄。

2? 結(jié)果與結(jié)論

2.1 鏡檢結(jié)果

（1）鏡下視野：在顯微鏡視野中，飽和鹽水溶液組的糞便樣品濾液含有較多的蛋白、氣泡等雜質(zhì)，嚴(yán)重干擾球蟲卵囊的觀察，甚至存在卵囊被雜質(zhì)掩蓋而未被發(fā)現(xiàn)的情況 （圖1）;而尿素溶液組的糞便樣品濾液含雜質(zhì)較少，鏡下視野清晰，便于觀察球蟲卵囊（圖2）。

⑵檢出率：在30份樣品中，飽和鹽水溶液組檢出5份有球蟲卵囊（陽性樣品），尿素溶液組檢出9份有球蟲卵囊（陽性樣品），尿素溶液組的陽性檢出率高于飽和鹽水溶液組的。

2.2 小結(jié)

在兩種常用檢測方法中，尿素溶液漂浮法所需的靜置時(shí)間短，樣品濾液在顯微鏡下視野清晰、雜質(zhì)少，檢測耗時(shí)短，綜合而言優(yōu)于飽和鹽水漂浮法。

3? 討論

按要求采樣是關(guān)系能否準(zhǔn)確檢測的前提。在生產(chǎn)一線，常常會遇到采樣人員誤以為只需采集腹瀉糞便樣品的情況。由于仔豬腹瀉癥狀和糞便排卵的相關(guān)性不明顯[1]，正確的采樣方法是要盡可能涵蓋產(chǎn)床上各種不同物理性狀（干燥、糊狀、水樣、不同顏色）的糞便（圖3），每窩或每個(gè)產(chǎn)床采集3～5個(gè)點(diǎn)，每個(gè)糞便點(diǎn)采集1 g～2 g，隨后匯合于同一個(gè)容器中，作為一個(gè)樣品。采集的糞便限于7～21日齡仔豬的。

在對糞便樣品進(jìn)行處理的過程中，過濾時(shí)為了減少球蟲卵囊漂浮而最后留在紗布上，需要邊過濾邊攪動(dòng)紗布上的固液混合物。濾液漏干后，再用溶液沖洗固體殘?jiān)?，同時(shí)過濾一次。

由于哺乳仔豬的消化系統(tǒng)發(fā)育不完全，不能完全吸收腸道中的脂肪、蛋白質(zhì)等營養(yǎng)物質(zhì)，再加上機(jī)體的抵抗力弱，消化道很容易受到損傷，導(dǎo)致未消化的脂肪、蛋白質(zhì)等隨糞便一起排出。在處理糞便樣品的過程中，飽和鹽水使蛋白質(zhì)發(fā)生鹽析，球蟲卵囊在溶液中與蛋白質(zhì)和其他有機(jī)物雜質(zhì)一起上浮，導(dǎo)致卵囊的上浮速度減慢，因此在對飽和鹽水處理組的樣品濾液進(jìn)行鏡檢前需要靜置至少30 min，才易于在液面收集到卵囊。鹽析的蛋白質(zhì)懸浮在鹽水溶液中不易沉降，脂肪也漂浮于液面，肉眼可見明顯的分層現(xiàn)象（圖4）。液面取樣導(dǎo)致顯微鏡下的視野中雜質(zhì)很多。

尿素能使糞便中的蛋白質(zhì)變性凝聚而沉淀，凝聚后的蛋白質(zhì)不易漂浮，靜置時(shí)糞便樣品濾液的分層現(xiàn)象不明顯（圖4）。尿素溶液處理組糞便樣品的濾液不僅所需的靜置漂浮時(shí)間比鹽水處理組的短，而且進(jìn)行鏡檢時(shí)樣品濾液中的雜質(zhì)少，視野清晰。由于有效地排除了有機(jī)物雜質(zhì)的干擾，尿素溶液漂浮法的陽性檢出率更高。據(jù)2013年金麗珠等[2]報(bào)道，該方法的陽性檢出率比飽和鹽水漂浮法的高出30%～60%。

綜上所述，在現(xiàn)場對仔豬的糞便進(jìn)行等孢球蟲檢測時(shí)，尿素溶液漂浮法明顯優(yōu)于飽和鹽水漂浮法。

參考文獻(xiàn)

[1] ANJA JOACHIM， B?RBEL RUTTKOWSKI，DANIEL SPERLING. Detection of Cystoisospora suis in faeces of suckling piglets-when and how？ A comparison of methods[J]. Porcine Health Management， 2018， 4（3）： 90-95.

[2] 金麗珠，吳家斌，黃睿敏，等. 尿素溶液漂浮法診斷哺乳仔豬球蟲病[J]. 畜牧與獸醫(yī)，2013，45（9）：112-114.