王思雨，劉立文

摘 要：為探究促性腺激素對壩上長尾公雞精液品質(zhì)的影響，本試驗(yàn)選用28周齡健康、體重一致的壩上長尾公雞36只，隨機(jī)分成3組，每組12只，將三個(gè)組別分別注射0、10、40 IU促卵泡素，每間隔12 h重復(fù)注射，第4天注射100 IU的人絨毛膜促性腺激素（hCG），在第7天對36只雞進(jìn)行人工采精，收集各組數(shù)據(jù)并進(jìn)行對比分析。采精后用生理鹽水溶液對原精液進(jìn)行5倍、10倍、15倍稀釋，然后進(jìn)行精液品質(zhì)檢查。在顯微鏡下觀察，測得不同稀釋倍數(shù)生理鹽水溶液在低溫條件下對精子活率的影響。結(jié)果顯示，注射促卵泡素10、40 IU與對照組相比差異極顯著（P<0.01）;對照組與注射10 IU促卵泡素、注射40 IU促卵泡素的各個(gè)分組中精子畸形率數(shù)據(jù)表現(xiàn)為差異極顯著（P<0.01）;稀釋處理后的精液在低溫保存下結(jié)果顯示，稀釋5倍的精子保存 6 h后活率無顯著變化（P>0.05），稀釋10倍和15倍的兩組的精子活率則顯著降低（P<0.05）;在低溫保存12 h 后，稀釋10倍和15倍的精子活率均顯著低于稀釋5倍的精子活率（P<0.05）。結(jié)果表明，注射促卵泡素可以提高精子活率，降低精子畸形率;精液稀釋倍數(shù)不同，稀釋倍數(shù)越高的精子活率越低，稀釋倍數(shù)越低的精子活率越高;每只最佳注射劑量為10 IU，精液稀釋倍數(shù)不超過5倍。

關(guān)鍵詞：精液品質(zhì);壩上長尾雞;促卵泡素

中圖分類號：S831.2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B文章編號：1673-1085（2021）7-0013-05

在2021年最新頒布的《國家畜禽遺傳資源品種名錄（2021年版）》中共收錄畜禽地方品種、培育品種、引入品種及配套系948個(gè)，其中地方雞品種就有壩上長尾雞。壩上長尾雞屬于河北省特有地方品種，在中國家禽地方品種資源占有一席之地。壩上長尾雞是經(jīng)長期自然選育適應(yīng)當(dāng)?shù)丨h(huán)境特點(diǎn)形成的蛋肉兼用型品種，具有肉質(zhì)鮮美、蛋品質(zhì)好、風(fēng)味佳等特點(diǎn)，主要分布于河北北部的承德、張家口的壩上地區(qū)，體質(zhì)健壯，對壩上高原惡劣氣候環(huán)境有良好的適應(yīng)性[1]。

近年來，地方品種資源越來越稀缺，保種利用工作越來越迫切，也越來越受到重視。有研究表明，不同劑量促性腺激素對公雞的生殖機(jī)能影響很大，可提高精子存活率，降低畸形率;注射促卵泡素后的精液經(jīng)過稀釋，精液量增加，并且隨著稀釋倍數(shù)的不同，精子活率和存活指數(shù)也隨之改變，但是，在生產(chǎn)實(shí)踐中，促性腺激素往往在母畜禽上應(yīng)用比較多，而在公畜禽上使用比較少，特別是對于壩上長尾公雞上的應(yīng)用至今未見報(bào)道，因此，本試驗(yàn)針對地方特有品種的壩上長尾公雞開展試驗(yàn)，研究促性腺激素合適劑量及不同稀釋倍數(shù)對其生殖性能影響，從而為提高珍貴禽種公雞的利用效率提供一種新的有效途徑。

1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.1 材料

選擇28周齡健康、體重一致的壩上長尾公雞36只，由壩上康保壩上長尾雞飼養(yǎng)合作社提供。垂體促卵泡素〔（2015）獸藥GMP證字11004號，100單位×10支〕和人絨毛促性腺激素1〔（2015）獸藥GMP證字11004號，1000單位×10支〕，從寧波第二激素廠購買。

1.2 分組與設(shè)計(jì)

將壩上長尾雞隨機(jī)分成三組，即空白組、試驗(yàn)組1、試驗(yàn)組2，每組12只，將三個(gè)組別的雞分別注射0、1IU、40 IU的促卵泡素，每間隔12 h重復(fù)注射，第4天注射100 IU的人絨毛膜促性腺激素（hCG），在第7天對36只雞進(jìn)行人工采精，收集數(shù)據(jù)并分析。

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)雞每日采食量為230 g，分別在每天08：00、12：00和17：00飼喂顆粒料，每次飼喂量相同。每天對雞籠進(jìn)行清掃、沖洗，以保持環(huán)境干凈衛(wèi)生。每2 d訓(xùn)練公雞采精一次。

1.4 采精方法及精液品質(zhì)檢查

采精方法：腹背按摩法，一人握住雞的雙腿，使雞尾朝前雞頭向后;另一人用左手拇指和食指按摩雞尾，右手小指和無名指倒夾集精杯，并用拇指和食指按摩雞腹部，兩手同步反復(fù)按摩泄殖腔幾次后，當(dāng)公雞尾羽翹起泄殖腔外翻時(shí)，左手順勢從泄殖向雞尾方向輕輕擠壓，精液排出時(shí)，右手翻掌，用集精杯將精液全部收集。記錄每組公雞采精量，精液量：0.25～1.1 mL;氣味：略帶腥味;pH值為7.0;測定公雞精子存活指數(shù)、精液畸形率以及稀釋后精子活力與存活指數(shù)。 把采集到的精液用生理鹽水稀釋，制片，酒精固定（95%），然后用染色液染色、用顯微鏡觀察。

1.5 試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

使用Excel 2010進(jìn)行統(tǒng)計(jì);利用SPSS 21.0軟件對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，以P<0.01為差異極顯著，P>0.05為差異不顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 第一次采精后不同劑量促卵泡素對精子存活指數(shù)及畸形率的影響

結(jié)果見表1。

由表1可知，對照組、試驗(yàn)組1、試驗(yàn)組2的精子存活指數(shù)及精子畸形率之間差異極顯著（P<0.01）。

2.2 第二次采精后不同劑量促卵泡素對精子存活指數(shù)及畸形率的影響

結(jié)果見表2。

由表2可知，空白組、試驗(yàn)組1、試驗(yàn)組2的精子存活指數(shù)之間差異極顯著（P<0.01）。對照組與試驗(yàn)組小組中精子畸形率之間差異為極顯著（P<0.01），試驗(yàn)組1與試驗(yàn)組2間的精子畸形率存在極顯著差異（P<0.01）。

2.3 不同稀釋倍數(shù)在低溫條件下對精子活率和存活指數(shù)的影響

結(jié)果見表3、表4。

由表3可知，稀釋處理后的精液在低溫保存下，初期三組精子活率均無顯著差異（P>0.05）;隨著在4 ℃保存時(shí)間的延長，稀釋5倍的精子保存6 h后活率無顯著變化（P>0.05），而稀釋10倍和15倍的兩組的精子活率則顯著降低（P<0.05）。在低溫保存12 h 后，稀釋10倍和15倍的精子活率均顯著低于稀釋5倍的精子活率（P<0.05）。

由表4可知，對照組、試驗(yàn)組1、試驗(yàn)組2的精子存活指數(shù)之間差異極顯著（P<0.01）。

3 討論

在雄禽中，下丘腦-垂體-性腺軸（HPG軸）可以通過影響生殖激素的分泌合成，進(jìn)一步調(diào)節(jié)雄禽生殖過程，影響其生殖機(jī)能。HPG軸由下丘腦、垂體以及睪丸所構(gòu)成，形成了下丘腦-垂體-睪丸軸（HPT軸）。HPT軸對內(nèi)分泌系統(tǒng)具有重要的調(diào)節(jié)作用，其過程主要是通過下丘腦分泌抑制激素或促性腺激素釋放激素（GnRH），GnRH激活垂體上的特異性受體——GnRH受體（GnRHR），刺激垂體促性腺激素細(xì)胞合成和分泌促性腺激素——FSH以及LH，它們經(jīng)外周的血液循環(huán)，最后作用于睪丸，對睪丸的內(nèi)、外分泌系統(tǒng)產(chǎn)生影響，繼而調(diào)節(jié)雄禽的生殖過程。在此過程中，F(xiàn)SH和LH分別與睪丸中特異受體進(jìn)行識別，F(xiàn)SH與其受體結(jié)合后促進(jìn)精子的發(fā)生;LH與其受體結(jié)合后則激活了腺苷酸環(huán)化酶，從而促進(jìn)合成雄激素——睪酮（T），以調(diào)節(jié)類固醇激素分泌和精子生成過程以及睪丸的發(fā)育[2]。在雄禽睪丸內(nèi)的雄激素中，T含量最高，活性也最強(qiáng)，可作用于睪丸生精上皮細(xì)胞促使精子產(chǎn)生，精子進(jìn)入附睪后在附睪液的作用逐漸發(fā)育成熟。 睪酮受體僅存在于睪丸體細(xì)胞，生殖細(xì)胞本身并沒有睪酮受體分布。這表明，T并不直接作用于生殖細(xì)胞，而是通過睪丸體細(xì)胞對生殖細(xì)胞施加影響加以發(fā)揮作用[3]。

3.1 不同劑量的促卵泡素對精子存活指數(shù)的影響

本試驗(yàn)結(jié)果表明，注射卵泡刺激素可以使精子的存活指數(shù)提高，隨著劑量的增多，效果也表現(xiàn)越好。王霞等[4]報(bào)道，尿卵泡刺激素（FSH）聯(lián)合人絨毛膜促性腺激素對精子存活指數(shù)顯著增加。表1和表2對比，可以看出在注射不同劑量的卵泡刺激素后，根據(jù)注射劑量的不同，公雞精子存活指數(shù)提升的幅度也有所不同：表1中試驗(yàn)組2精子存活指數(shù)相比試驗(yàn)組1提升8.6667±1.01278，表2中試驗(yàn)組2相比試驗(yàn)組1提升7.2777±1.58147?？梢娊o種公雞注射一定劑量的促卵泡素能夠有效促進(jìn)公雞精子的存活指數(shù)，注射40 IU卵泡刺激素后的精子存活指數(shù)要高于注射10 IU卵泡刺激素的精子存活指數(shù)。

3.2 不同劑量的促卵泡素對精子畸形率的影響

本試驗(yàn)結(jié)果表明，隨著注射促卵泡素劑量增多，公雞精子畸形率明顯下降，可見給公雞注射一定劑量的促卵泡素能夠有效降低公雞精子的畸形率。從表1、表2結(jié)果分析得出，在注射不同劑量的促卵泡素后，根據(jù)注射劑量的不同，公雞精子畸形率下降的幅度也有所差異：表1中試驗(yàn)組2的精子畸形率相比試驗(yàn)組1下降了0.377±0.0004，表2中試驗(yàn)組2精子畸形率相比試驗(yàn)組1下降0.467±0.1929。注射40 IU的促卵泡素公雞精子畸形率降低2.1135±0.1752。這與慈光新等[5]人使用注射促卵泡素可以影響壩上長尾雞精子畸形率的結(jié)果較為一致。

3.3 不同稀釋倍數(shù)在低溫條件下對精子活率的影響

本試驗(yàn)結(jié)果表明，隨著時(shí)間的延長，稀釋倍數(shù)越高反而其精子活率越低，反之，稀釋倍數(shù)越低其精子活率越高。胡艷娟等[6]的試驗(yàn)證明精子的頂體、頂體膜、線粒體等微細(xì)結(jié)構(gòu)與精子功能密切相關(guān)，隨著時(shí)間越長，精子的頂體膜、質(zhì)膜和核膜出現(xiàn)膨脹或破裂，頂體膨脹變形，線粒體鞘結(jié)構(gòu)破損等，這也就解釋了精子在經(jīng)過低溫保存超過一定時(shí)間后受精率大幅降低的原因。從表3可以看出，6 h時(shí)5倍稀釋時(shí)精子活率為98.56;當(dāng)稀釋倍數(shù)增加到10倍時(shí)，其精子活率下降了1.16;當(dāng)稀釋倍數(shù)增加到15倍時(shí)，其精子活率下降了0.25。表4結(jié)果表明，在5倍稀釋時(shí)精子存活指數(shù)為37.34，當(dāng)稀釋倍數(shù)上升到10倍時(shí)，其精子存活指數(shù)下降了7.78;當(dāng)稀釋倍數(shù)上升到15倍時(shí)，其精子存活指數(shù)下降了6.89。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)研究結(jié)果表明促性腺激素對壩上長尾公雞精液品質(zhì)具有促進(jìn)作用，注射10 IU就能夠促進(jìn)公雞精液品質(zhì)，如果稀釋倍數(shù)超過5倍，對公雞精液品質(zhì)有影響，建議在生產(chǎn)實(shí)踐中，對公雞注射10 IU并且稀釋倍數(shù)不超過5倍，這樣就可以保證精液品質(zhì)在生產(chǎn)中應(yīng)用。

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Effects of Gonadotropin on Semen Quality of Ba Shang Long-tailed Rooster

WANG Siyu， LIU Liwe

（College of Animal Science and Technology of Hebei North University

，Zhangjiakou 075131，China）

Abstract： This study was conducted to investigate the effects of gonadotropins on semen quality of Bashang long-tailed roosters.This experiment by choosing the 28 weeks of age， health dam long tail rooster 36， randomly divided into 3 groups， each group of 12， injecting three groups respectively 0IU， 10IU， 40IU follicle-stimulating hormone， 12h repeated injection intervals， the 4d injection of 100IU of human chorionic gonadotropin （hCG）， on the seventh day to artificial ejaculations， 36 chickens and collect data were analyzed.The original semen was diluted 5， 10， and 15 times with normal saline solution after sperm collection， and then the semen quality was examined.The effect of different dilution ratio of normal saline solution on sperm motility at low temperature was observed under microscope.The results showed that the difference of 10IU and 40IU of FSH was very significant （P<0.01）.The data of sperm malformation rate in the control group and each group injected with 10IU FSH and 40IU FSH showed significant difference （P<0.01）.After cryopreservation， the viability of the 5-fold diluted sperm had no significant change after 6h （P>0.05）， and the viability of the 10-fold and 15-fold diluted sperm was significantly decreased （P<0.05）. After cryopreservation for 12h， the viability of the 10-fold and 15-fold diluted sperm was significantly lower than that of the 5-fold diluted sperm （P<0.05）.The results showed that the injection of follicle stimulating hormone could improve the survival rate of sperm and reduce the rate of sperm deformity.Semen dilution ratio is different， the higher the dilution ratio， the lower the sperm motility rate， the lower the sperm motility rate.The optimal injection dose for each is 10IU， and the dilution is not more than 5 times.

Keywords： quality of semen;ba shang long-tailed rooster;follicle stimulating hormone