周緒云，馬曉茜（.山東省莒縣中醫(yī)醫(yī)院，山東 莒縣 76599；.山東醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，山東 臨沂 7600）

洛索洛芬鈉（loxoprofen sodium），其化學(xué)名為2-[4-（2-氧代環(huán)戊烷-1-基甲基）苯基]丙酸鈉，屬于非甾體類抗炎鎮(zhèn)痛藥，臨床上用于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、肩周炎等的鎮(zhèn)痛及急性上呼吸道感染的解熱鎮(zhèn)痛[1-3]，具有解熱鎮(zhèn)痛作用強(qiáng)、消化道不良反應(yīng)小、臨床應(yīng)用范圍廣等特點(diǎn)[4]，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載在《新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)》第66 冊(cè)[5]。本文查閱洛索洛芬鈉原料藥合成方法相關(guān)的資料[6-9]，并對(duì)生產(chǎn)企業(yè)進(jìn)行調(diào)研發(fā)現(xiàn)，洛索洛芬鈉原料藥具有多條不同的合成工藝路線，在化學(xué)合成過(guò)程使用到了多種不同的有機(jī)溶劑，這些有機(jī)溶劑均有可能殘留在原料藥中，從而影響到洛索洛芬鈉原料藥的安全性。在《新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)》第66 冊(cè)洛索洛芬鈉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中僅對(duì)甲苯一種殘留溶劑進(jìn)行了檢驗(yàn)，并沒(méi)有對(duì)其他有機(jī)溶劑進(jìn)行檢驗(yàn)，存在嚴(yán)重的標(biāo)準(zhǔn)缺陷。本文收集了3 家洛索洛芬鈉原料藥生產(chǎn)企業(yè)的樣品，并對(duì)其合成路線進(jìn)行調(diào)研，發(fā)現(xiàn)在洛索洛芬鈉合成過(guò)程中使用到了丙酮、甲醇、二氯甲烷、異丙醇、乙腈、三氯甲烷和甲苯。其中甲醇、二氯甲烷、乙腈、三氯甲烷和甲苯屬于第二類殘留溶劑，為應(yīng)該限制使用的溶劑；丙酮和異丙醇屬于第三類溶劑。以上溶劑均具有不同的毒性，在《中國(guó)藥典》2020年版四部通則中均規(guī)定了其限度要求[10]。為了有效控制洛索洛芬鈉原料藥的質(zhì)量和安全性，藥典中“殘留溶劑測(cè)定法”的要求，本文對(duì)以上7 種有機(jī)溶劑進(jìn)行檢測(cè)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料

GC2010 Plus 型氣相色譜儀（日本島津）；Mettler XP205 型電子分析天平（瑞士Mettler-Toledo）。洛索洛芬鈉原料藥（批號(hào)：16C5102004018，16C5102006008，A 公司；批號(hào)：200203，B 公司；批號(hào)：1D2004019，1D2005029，C 公司）；丙酮（批號(hào)：176178，純度：100%，F(xiàn)isher 公司），甲醇（批號(hào)：L1057307943，純度：100%）、二氯甲烷（批號(hào)：1611001YT，純度：99.5%）、異丙醇（批號(hào)：K50544740836，純度：100%）、乙腈（批號(hào)：SHBL4495，純度：100%）、甲苯（批號(hào)：K46504627511，純度：99.9%）（Merck 試劑），三氯甲烷（批號(hào)：20180726，純度：99.9%）、N，N-二甲基甲酰胺（批號(hào)：20150422，純度：99.5%）（國(guó)藥集團(tuán)）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Thermo TG WAXMS 氣相色譜柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；載氣為氮?dú)?；流? mL·min－1；檢測(cè)器為FID；進(jìn)樣口溫度為220℃；檢測(cè)器溫度為260℃；采用程序升溫法：起始溫度為40℃，保持10 min，以20℃·min－1的速率升溫至200℃，保持5 min；進(jìn)樣量為1 μL；分流比為10∶1。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液 分別精密稱取丙酮52.53 mg、甲醇30.66 mg、二氯甲烷28.86 mg、異丙醇52.40 mg、乙腈41.97 mg、三氯甲烷12.56 mg 和甲苯89.64 mg，置10 mL 量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，分別制得每1 mL含丙酮5.253 mg、甲醇3.066 mg、二氯甲烷2.872 mg、異丙醇5.240 mg、乙腈4.197 mg、三氯甲烷1.255 mg 和甲苯8.955 mg 的對(duì)照品儲(chǔ)備液；分別精密量取上述對(duì)照品儲(chǔ)備液1 mL，置同一100 mL 量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，即得混合對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 精密稱取洛索洛芬鈉原料藥約1.0 g，置10 mL 量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.3 專屬性試驗(yàn)

取“2.2”項(xiàng)下的混合對(duì)照品溶液、供試品溶液與空白溶劑（N，N-二甲基甲酰胺），按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣檢測(cè)，結(jié)果7 種殘留溶劑色譜峰分離度均符合規(guī)定，空白溶劑對(duì)待測(cè)殘留溶劑色譜峰沒(méi)有干擾，見(jiàn)圖1。

圖1 空白溶劑（A）、對(duì)照品溶液（B）、A 公司樣品（C）、B 公司樣品（D）、C 公司樣品（E）GC 色譜圖Fig 1 GC chromatogram of blank solvent（A），standard solution（B），sample of company A（C），sample of company B（D），and sample of company C（E）

2.4 線性關(guān)系考察

精密量取“2.1”項(xiàng)下各對(duì)照品儲(chǔ)備液10、50、100、200、500 μL 分別置10 mL 量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，制得系列濃度對(duì)照品溶液，以各待測(cè)成分色譜峰的峰面積為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度（μg·mL－1）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。結(jié)果在各自的濃度范圍內(nèi)，7 種溶劑線性關(guān)系良好。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 線性、檢測(cè)限及定量限結(jié)果Tab 1 Linearity，LOD and LOQ

2.5 檢測(cè)限與定量限

取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，用N，N-二甲基甲酰胺逐步稀釋后，進(jìn)樣測(cè)定，以信噪比S/N＝3 計(jì)算各殘留溶劑的檢測(cè)限（LOD），以信噪比S/N＝10 計(jì)算各殘留溶劑的定量限（LOQ），結(jié)果見(jiàn)表1。

2.6 回收試驗(yàn)

分別精密量取“2.2.1”項(xiàng)下各對(duì)照品儲(chǔ)備液20、50、100 μL，置10 mL 量瓶中，每個(gè)濃度水平平行考察3 份，共9 個(gè)樣品，用N，N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，作為回收試驗(yàn)溶液，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，并計(jì)算各殘留溶劑的回收率。結(jié)果丙酮、甲醇、二氯甲烷、異丙醇、乙腈、三氯甲烷和甲苯的平均回收率在97.6%～103.5%，RSD在1.7%～2.7%。

2.7 精密度試驗(yàn)

取“2.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6 次測(cè)定，并計(jì)算丙酮、甲醇、二氯甲烷、異丙醇、乙腈、三氯甲烷和甲苯色譜峰面積的RSD分別為1.8%、1.6%、2.2%、1.7%、3.2%、2.2%、1.7%，表明儀器精密度良好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

分別取3 家企業(yè)的洛索洛芬鈉原料藥各一批，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液各6 份，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果，A 公司樣品檢出丙酮與異丙醇，平均含量分別為0.030%與0.016%，RSD分別為2.8%與3.4%；B 公司樣品檢出甲醇與甲苯，平均含量分別為0.025%與0.014%，RSD均為2.4%；C 公司樣品檢出丙酮與異丙醇，平均含量分別為0.021%與0.011%，RSD分別為2.6%與2.8%。表明該方法重復(fù)性良好。

2.9 耐用性試驗(yàn)

本文參照《中國(guó)藥典》2020年版四部通則9101 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則中方法耐用性的要求[10]，對(duì)氣相色譜條件進(jìn)行調(diào)整，通過(guò)改變氣相色譜柱型號(hào)[Thermo TG WAXMS 氣相色譜柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）與Agilent DB WAX 氣相色譜柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）]；載氣流速（1.9、2.0、2.1 mL·min－1）；進(jìn)樣口溫度（215 ℃、220、225 ℃）；檢測(cè)器溫度（255、260、265℃）等試驗(yàn)條件，考察該方法的耐用性。結(jié)果顯示本方法耐用性良好。

2.10 樣品測(cè)定結(jié)果

取洛索洛芬鈉原料藥，按“2.2.2”項(xiàng)下方法分別制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算各供試品中殘留溶劑的含量。結(jié)果如表2所示。結(jié)果顯示，A 公司與C 公司樣品均檢出丙酮與異丙醇，B 公司樣品檢出甲醇與甲苯，且檢出含量均未超過(guò)《中國(guó)藥典》2020年版四部通則中對(duì)各殘留溶劑的限度規(guī)定要求，其余溶劑均未檢出。

表2 樣品中殘留溶劑測(cè)定結(jié)果(%，n＝2)Tab 2 Determination of residual solvent in samples (%，n＝2)

3 討論

3.1 溶劑的選擇

分別考察以水、二甲基亞砜和N，N-二甲基甲酰胺作溶劑，采用水作溶劑時(shí)，部分有機(jī)溶劑如三氯甲烷、二氯甲烷、甲苯等溶解性較差；采用二甲基亞砜和N，N-二甲基甲酰胺作溶劑時(shí)，均能與各待測(cè)有機(jī)溶劑完全互溶；但N，N-二甲基甲酰胺的色譜圖基線更平直，各色譜峰的分離度更好，因此本文選擇N，N-二甲基甲酰胺作為溶劑。

3.2 進(jìn)樣方式的選擇

測(cè)定殘留溶劑時(shí)，有溶液直接進(jìn)樣和頂空進(jìn)樣兩種進(jìn)樣方式[11-13]。本文中檢測(cè)的有機(jī)溶劑共7 種，各有機(jī)溶劑的沸點(diǎn)相差較大，采用溶液直接進(jìn)樣測(cè)定，方法簡(jiǎn)單，快速，重現(xiàn)性好。

3.3 色譜柱的選擇

分別考察不同極性毛細(xì)管色譜柱，通過(guò)試驗(yàn)比較，發(fā)現(xiàn)采用Thermo TG WAXMS 色譜柱能使7種待測(cè)有機(jī)溶劑實(shí)現(xiàn)較好分離，采用其他中等極性或弱極性色譜柱時(shí)分離度達(dá)不到要求。

3.4 柱溫的選擇

本文測(cè)定的有機(jī)溶劑的沸點(diǎn)相對(duì)較低，采用40 ℃等溫保持10 min，可以將多種待測(cè)成分分開(kāi)，程序升溫可以將沸點(diǎn)相對(duì)較高的待測(cè)成分實(shí)現(xiàn)分離。由于N，N-二甲基甲酰胺的沸點(diǎn)較高，為了使N，N-二甲基甲酰胺完全流出色譜柱，本試驗(yàn)采用200 ℃，保持5 min，將N，N-二甲基甲酰胺與所有的干擾雜質(zhì)成分完全排出色譜柱，既保證了進(jìn)樣的重復(fù)性，又保護(hù)了色譜柱。

洛索洛芬鈉原料藥在化學(xué)合成過(guò)程中使用了多種有機(jī)溶劑，然而現(xiàn)有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅對(duì)其中的甲苯進(jìn)行了檢測(cè)，而忽略了其他的殘留溶劑。根據(jù)本文檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在洛索洛芬鈉原料藥中除甲苯外，還存在丙酮、異丙醇和甲醇等殘留溶劑，嚴(yán)重影響了洛索洛芬鈉原料藥的質(zhì)量與安全性，有必要對(duì)其中可能存在的所有殘留溶劑進(jìn)行全面檢測(cè)，按照“最嚴(yán)謹(jǐn)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)”來(lái)控制洛索洛芬鈉的質(zhì)量。本文建立的氣相色譜方法可以同時(shí)檢測(cè)洛索洛芬鈉原料藥中7 種殘留溶劑，具有良好的效果。