覃 婷，盧成淑*，呂其壯,2*，李佩倫，覃新云，龔紫鳳，農(nóng)可懿

(1.玉林師范學院生物與制藥學院，廣西玉林 537000；2.廣西農(nóng)產(chǎn)資源化學與生物技術重點實驗室，廣西玉林 537000；3.玉林市動物疫病預防控制中心，廣西玉林 537000)

雞傳染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)是由傳染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)引起的一種急性、高度接觸性和免疫抑制性疾病[1]。該病臨床主要表現(xiàn)為病雞精神委靡、羽毛蓬松、食欲減退、排白色水樣稀糞等，病理剖檢主要表現(xiàn)為腿肌和胸肌出血，法氏囊出血、發(fā)炎、水腫、萎縮、壞死等[2]，具有發(fā)病突然、病程短、病死率高等特點，是危害養(yǎng)雞業(yè)的一種主要傳染病[3-5]?，F(xiàn)階段針對IBD綜合防控和疫苗研究的報道很多[6-9]，但是以地方品種雞為主要研究對象的調(diào)查報告卻是寥寥無幾。霞煙雞是原產(chǎn)于廣西容縣石寨鎮(zhèn)下煙村的優(yōu)質(zhì)肉用雞，是優(yōu)良地方品種之一，1985年被載入《廣西家畜家禽品種志》，2010年被列為國家地理標志保護產(chǎn)品，該雞具有個體大、耐粗飼、抗病力強、骨軟肉嫩、肌肉彈性好、味香等特點，深受規(guī)?；B(yǎng)殖場和養(yǎng)殖戶的青睞。然而，由于受該品種雞飼養(yǎng)周期長、價格較其他品種雞偏高等因素的影響，近年來霞煙雞的養(yǎng)殖規(guī)模不斷縮減，目前容縣境內(nèi)只有廣西容縣周義養(yǎng)殖有限公司等極少數(shù)企業(yè)在集約化養(yǎng)殖霞煙雞，且多以保種為目的，相比之下，農(nóng)村散養(yǎng)就成了霞煙雞的主要養(yǎng)殖模式，但由于農(nóng)村散養(yǎng)戶多是自繁自養(yǎng)，沒有正規(guī)的飼養(yǎng)標準，又經(jīng)常不按防疫要求注射疫苗，所以農(nóng)村散養(yǎng)雞群中就很容易引發(fā)各種傳染性疾病，給養(yǎng)殖戶帶來了重大的經(jīng)濟損失。因此，為探究IBD在農(nóng)村散養(yǎng)霞煙雞雞群中的發(fā)病情況和流行趨勢，在調(diào)查清楚霞煙雞主要分布區(qū)域的基礎上從上述區(qū)域內(nèi)的霞煙雞養(yǎng)殖戶中采集霞煙雞病雞血清樣品，并對其進行IBDV抗體的檢測和分析，以期為霞煙雞雞群的IBD防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 血清樣品 2018年3月至2019年4月，分別從目前霞煙雞的主要分布區(qū)域內(nèi)的農(nóng)村散養(yǎng)戶的病雞(臨床表現(xiàn)是生長發(fā)育不良、精神不振、縮頭垂翅、食欲減退、發(fā)病前均未免疫過IBD疫苗)中用一次性無添加劑真空采血管采集血液樣品245份，其中容州鎮(zhèn)27份、楊梅鎮(zhèn)18份、石寨鎮(zhèn)113份、靈山鎮(zhèn)12份、黎村鎮(zhèn)22份、六王鎮(zhèn)14份、十里鄉(xiāng)11份、縣底鎮(zhèn)2份、松山鎮(zhèn)9份、自良鎮(zhèn)4份、容西鄉(xiāng)9份、浪水鄉(xiāng)4份樣品。每份1 mL～3 mL，分離血清后，置于-20℃冰箱備用。被檢病雞的日齡在10日齡～289日齡。以3月～5月份為春季、6月～8月份為夏季、9月～11月份為秋季、12月到次年2月份為冬季劃分季節(jié)。

1.1.2 主要試劑和儀器 IBDV抗體ELISA試劑盒，美國愛德士(IDEXX)公司產(chǎn)品；Varioskan LUX多功能微孔板讀數(shù)儀，賽默飛世爾科技(中國)有限公司產(chǎn)品；高精度移液槍，德國艾本德(Eppendorf)股份公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 抗體檢測 在96孔板的每個孔中分別加入分離的血清樣品10 μL，按照傳染性法氏囊病病毒抗體檢測試劑盒說明書對所采集的血清采用酶聯(lián)免疫吸附試驗方法(ELISA)進行IBDV抗體的檢測。

1.2.2 結果判定 根據(jù)酶標儀上OD450 nm值判斷試驗有效性(陽性對照孔OD值平均值≥1.00；陰性對照孔OD值平均值≤0.15)并計算出臨界值(臨界值=陰性對照孔平均值+0.15),如果樣品OD值<臨界值，則樣品為陰性；如果樣品OD值>臨界值，則樣品為陽性。

1.2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析 利用Excel軟件對上述IBDV的抗體陽性率以及該病在各季節(jié)、各區(qū)域和各個生長階段的霞煙雞雞群中的發(fā)病情況進行統(tǒng)計分析。

2 結果

2.1 不同日齡霞煙雞IBDV的抗體檢測情況

各個采樣點中不同日齡霞煙雞的IBDV抗體陽性率檢測情況見表1。由表1可知，不同日齡的霞煙雞樣品中均能檢測出IBDV抗體陽性，其中在縣底鎮(zhèn)和松山鎮(zhèn)采集的40日齡以下病雞中檢測IBDV抗體陽性率均達100%，但在自良鎮(zhèn)和浪水鄉(xiāng)的病雞中并未檢測到IBDV抗體陽性?？傮w而言，IBDV的抗體陽性率在40日齡以下和40日齡～140日齡這兩個日齡段較高，分別達到61.19%(41/67)和44.44%(68/153)，提示IBDV主要感染40日齡以下和40日齡～140日齡的霞煙雞。

表1 不同日齡霞煙雞IBDV的抗體檢測結果

2.2 不同季節(jié)霞煙雞IBDV的抗體檢測情況

各個采樣點中不同季節(jié)霞煙雞的IBDV抗體陽性率檢測情況見表2。由表2可知，各個季節(jié)的霞煙雞樣品中均能檢測出IBDV抗體陽性，其中在縣底鎮(zhèn)春季采集的病雞樣品中檢測IBDV抗體陽性率達100%，但在自良鎮(zhèn)和浪水鄉(xiāng)的病雞中并未檢測到IBDV抗體陽性?？傮w而言，IBDV在春、冬季節(jié)的霞煙雞中的抗體陽性率相對較高，分別達到50.00%(41/82)和 56.58%(43/76)，而夏、秋季的陽性率相對較低，表明IBDV在霞煙雞雞群中的流行具有季節(jié)性。

表2 不同季節(jié)霞煙雞IBDV的抗體檢測結果

2.3 不同地區(qū)霞煙雞IBDV的抗體檢測情況

不同地區(qū)霞煙雞的IBDV抗體陽性率檢測情況見表3。由表3可知，IBDV抗體在容縣境內(nèi)的不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)的陽性率有所不同，其中縣底鎮(zhèn)的陽性率最高，達到100%，石寨鎮(zhèn)、容州鎮(zhèn)、靈山鎮(zhèn)、松山鎮(zhèn)等區(qū)域的陽性率也均在50%以上，但自良鎮(zhèn)、浪水鄉(xiāng)卻都沒有檢測出IBDV陽性。

表3 不同地區(qū)霞煙雞IBDV的抗體檢測結果

3 討論

霞煙雞素有“席上佳肴”之美稱，譽滿海內(nèi)外，主要分布在廣西容縣境內(nèi)。本試驗著重對該區(qū)域內(nèi)疑似被IBDV感染的霞煙雞進行檢測，結果顯示，被檢病雞中IBDV抗體的總體陽性率達到46.12%(113/245)，明顯高于曾婷婷等[9]應用多重GeXP-PCR方法對廣西境內(nèi)送檢的300羽病死雞IBDV的檢測結果8.33%(25/300)和李桂喜等[10]對來自蘇魯豫皖四省的23個縣市區(qū)的6 986 例蛋雞病例IBDV的檢測結果0.79%(55/6 986)，由于上述兩項結果大多來自于對蛋雞的調(diào)查結果，而霞煙雞屬于肉雞，因此推測霞煙雞可能比其他品種雞更容易感染IBDV，且這種推測與之前的文獻報道指出肉雞較蛋雞敏感相一致，但卻不能體現(xiàn)霞煙雞抗病力強的特點，所以有關霞煙雞抗病能力的研究還需要進一步深入。此外，根據(jù)霞煙雞雞群IBDV的抗體檢測結果推測IBDV感染狀況主要還受到日齡、季節(jié)、地區(qū)等因素的影響。其中受到生長階段的影響因素較大，小于40日齡的雛雞感染IBDV的抗體陽性率為61.19%，是4個生長階段中陽性率最高的，與楊宵玥等[11]研究中提到IBDV主要感染3周齡～6周齡雞群的觀點相一致。隨著雞群年齡的增長，其免疫器官發(fā)育較為完善，免疫力不斷增強，IBDV的感染率呈逐步下降的趨勢，尤其是在成年雞群中通常呈隱性感染[12]。因此，養(yǎng)殖戶難以在第一時間發(fā)現(xiàn)，容易造成大面積的傳染，給養(yǎng)殖戶造成重大的經(jīng)濟損失，這提示養(yǎng)殖戶在雞群生長發(fā)育過程中應做好IBD的預防工作，增強雞群的免疫水平。在自然環(huán)境下IBDV較為穩(wěn)定、具有較強的耐熱性以及可以通過多種禽鳥類攜帶傳播等特點，本次試驗結果中春、冬季IBDV的感染率均高于50%，與李桂喜等[10]得出的IBDV多發(fā)生于春、冬季的調(diào)查結果大致相同，說明IBDV的發(fā)生具有明顯的季節(jié)性，提示養(yǎng)殖戶應在冬、春季節(jié)改善雞舍衛(wèi)生的管理，多通風除濕，從而加強IBDV的防控力度。從地理環(huán)境的分布來看，IBDV在容縣縣底鎮(zhèn)的陽性率最高，達到100%，但在霞煙雞養(yǎng)殖最為集中的石寨鎮(zhèn)、容州鎮(zhèn)、黎村鎮(zhèn)等IBDV的陽性率卻只有50%左右，可能是跟縣底鎮(zhèn)的霞煙雞主要是農(nóng)村散養(yǎng)，沒有免疫接種等有關，且與吉濤等[13]指出的IBDV容易形成小范圍的區(qū)域流行的推論一致，提示當?shù)剞r(nóng)村養(yǎng)殖戶在養(yǎng)殖前應做好養(yǎng)殖規(guī)劃和免疫接種工作，科學養(yǎng)殖。另外，張譽文[14]的研究發(fā)現(xiàn)，2017年在廣西流行的IBDV全部都是基因重排株，其中與我國新型vvIBDV毒株親緣關系較近的毒株占優(yōu)勢，說明廣西地區(qū)IBDV毒株的基因及抗原正在發(fā)生變異，提示未來霞煙雞群中IBDV的防控除了應充分考慮日齡、季節(jié)、地區(qū)的影響之外，還應該實時了解和掌握IBDV毒株本身結構的變化，以做好霞煙雞群IBDV的防控工作。