趙丹華，田艷杰，李秋爽，劉 麗，李翠英，孫靜莉

（1.鐵嶺市婦嬰醫(yī)院婦產(chǎn)科，鐵嶺 112000；2.北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院婦產(chǎn)科，沈陽 110016）

宮頸癌是世界范圍內(nèi)常見的惡性腫瘤，是僅次于乳腺癌的女性第二大惡性腫瘤[1]。宮頸癌患者死亡的重要原因是治療失敗、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)，尋找有效途徑提高宮頸癌患者的生存時(shí)間是目前亟待解決的問題[2]。非編碼RNA（non-coding RNA，ncRNA）是一類在哺乳動(dòng)物基因組DNA 中獲得的沒有編碼蛋白質(zhì)作用的RNA，長(zhǎng)鏈ncRNA（long non-coding RNA，lncRNA）是非編碼RNA 中十分重要的一部分，其長(zhǎng)度大于200 nt，參與基因印記、染色質(zhì)修飾、基因表達(dá)調(diào)控等過程[3]。很多的實(shí)驗(yàn)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，lncRNA 的作用廣泛，不僅在細(xì)胞增殖、代謝、炎癥反應(yīng)等過程中發(fā)揮作用，還參與心血管系統(tǒng)疾病、神經(jīng)退行性疾病、腫瘤等進(jìn)程[4-6]。lncRNA 在腫瘤組織中表達(dá)改變，而且lncRNA 調(diào)控腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲，對(duì)腫瘤患者的康復(fù)有重要意義[7]。GA結(jié)合蛋白轉(zhuǎn)錄因子亞基β1-內(nèi)含子轉(zhuǎn)錄本1（GA binding protein transcription factor subunit beta 1-intronic transcript 1，GABPB1-IT1）是新近研究發(fā)現(xiàn)的與腫瘤有關(guān)的lncRNA，非小細(xì)胞肺癌中GABPB1-IT1表達(dá)下調(diào)，GABPB1-IT1 能夠抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)[8]。目前對(duì)于GABPB1-IT1 在宮頸癌中的作用還不明確。lncRNA 作用機(jī)制與miRNA 關(guān)系密切，二者通過堿基互補(bǔ)的方式結(jié)合，lncRNA 影響微小RNA（microRNA，miRNA）表達(dá)進(jìn)而發(fā)揮多種生物學(xué)作用[9]。前期預(yù)實(shí)驗(yàn)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)GABPB1-IT1 和miR-501 存在互補(bǔ)結(jié)合位點(diǎn)。miR-501 是一個(gè)具有促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的小分子RNA，在宮頸癌中已經(jīng)證明miR-501誘導(dǎo)腫瘤轉(zhuǎn)移和生長(zhǎng)[10]。本研究探討GABPB1-IT1對(duì)宮頸癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的作用及機(jī)制，為基因治療宮頸癌提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

宮頸癌HeLa、Caski、SiHa細(xì)胞購(gòu)自上海艾研生物科技有限公司；pcDNA-GABPB1-IT1、pcDNA、miR-501 mimics、mimics control 購(gòu)自和元生物技術(shù)(上海)股份有限公司；N-cadherin抗體購(gòu)自美國(guó)Cell Signaling Technology；正常宮頸上皮Ect1/E6E7細(xì)胞購(gòu)自上海欽誠(chéng)生物科技有限公司；基質(zhì)金屬蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2，MMP-2）抗體、E-鈣粘蛋白（E-cadherin）抗體購(gòu)自美國(guó)Proteintech；MMP-9抗體購(gòu)自北京義翹神州科技股份有限公司。

1.2 qRT-PCR 方法檢測(cè)宮頸癌細(xì)胞中GABPB1-IT1表達(dá)水平

取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的宮頸癌HeLa、Caski、SiHa細(xì)胞和正常宮頸上皮Ect1/E6E7 細(xì)胞，在細(xì)胞中加入Trizol 試劑，提取細(xì)胞總RNA。取3 μg 的RNA，加入1 μL 的Oligo dT primer、1 μL 的dNTP，繼續(xù)加入DEPC 水至10 μL，將上述體系放在65 ℃水浴中孵育5 min，然后置于冰上靜置2 min。繼續(xù)加入4 μL 的5×Prime Script Buffer、1.6 μL Prime Script RTase、0.5 μL 的RNase inhibitor，添加DEPC 水至20 μL，放在42 ℃孵育1 h，95 ℃孵育5min，置于冰上冷卻5 min。取50 ng 的cDNA、1 μL 的上游引物以及下游引物、12.5 μL 的SYBR Premix Ex Taq II，加入ddH2O 至25 μL，PCR 反應(yīng)程序：95 ℃5 min，95 ℃15 s，60 ℃30 s，共設(shè)置40個(gè)循環(huán)。以GAPDH作為內(nèi)參，按照公式2-△△Ct法計(jì)算GABPB1-IT1表達(dá)水平。引物序列為：GABPB1-IT1 上游（5’-3’）ACCCACAGACAACTGTGGACCC，下游（3’-5’）GCCGCCCCTATTGTTGCCCA；GAPDH 上游（5’-3’）CAGGGCTGCTTTTAACTCTGGTAA，下游（3’-5’）GGGTGGAATCATATTGGAACATGT。

1.3 實(shí)驗(yàn)分組和轉(zhuǎn)染

宮頸癌SiHa 細(xì)胞接種到12 孔板，細(xì)胞密度達(dá)到60%時(shí)，進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染，分別將pcDNA-GABPB1-IT1、pcDNA 轉(zhuǎn)染到細(xì)胞內(nèi)，細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法按照Lipofectamine 2000 轉(zhuǎn)染試劑說明書進(jìn)行。把轉(zhuǎn)染pcDNA-GABPB1-IT1、pcDNA 后的宮頸癌SiHa 細(xì)胞設(shè)置為GABPB1-IT1 組、Vector 組。將沒有轉(zhuǎn)染的細(xì)胞設(shè)置為Control 組。Control 組、Vector 組、GABPB1-IT1 組細(xì)胞培養(yǎng)24 h 以后，根據(jù)“1.2”項(xiàng)中qRT-PCR方法檢測(cè)GABPB1-IT1表達(dá)水平。

1.4 CCK-8方法檢測(cè)細(xì)胞增殖

宮頸癌SiHa 細(xì)胞按照每個(gè)孔中150 μL 細(xì)胞培養(yǎng)液、3 000個(gè)細(xì)胞種植到96孔板中，然后按照Control、Vector、GABPB1-IT1 組分組方法處理，置于37 ℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h以后，將培養(yǎng)板取出，分別加入10 μL 的CCK-8，繼續(xù)反應(yīng)2 h。酶標(biāo)儀測(cè)定每個(gè)樣品孔450 nm 的OD 值。計(jì)算細(xì)胞存活率（對(duì)照組細(xì)胞存活率為100%）。

1.5 Transwell小室檢測(cè)細(xì)胞遷移和侵襲

細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)前需要將小室包被，步驟如下：將基質(zhì)膠和DMEM按照1∶7的比例混合，然后吸取60 μL 添加到Transwell 小室中，放在37 ℃孵育，觀察基質(zhì)膠凝固以后備用。將Control 組、Vector 組、GABPB1-IT1 組以不含血清的細(xì)胞培養(yǎng)液懸浮，吸取200 μL的細(xì)胞溶液添加到小室的上室中，在下室中添加500 μL 的含血清細(xì)胞培養(yǎng)液。將小室放在37 ℃培養(yǎng)24 h 后，將沒有穿膜的細(xì)胞擦掉，以PBS洗滌。無水甲醛固定，0.1%的結(jié)晶紫染色，在顯微鏡下觀察細(xì)胞遷移和侵襲數(shù)目。

1.6 Western blotting 檢測(cè)MMP-2、MMP-9、N-cadherin、E-cadherin蛋白表達(dá)

收集培養(yǎng)24 h 以后的Control 組、Vector 組、GABPB1-IT1 組細(xì)胞，添加RIPA 溶液，放在冰上裂解20 min，用細(xì)胞刮將細(xì)胞刮下，冰浴，超聲5次，每次1 s，間隔2 s。4 ℃，12 000 g 離心10 min，吸取上清溶液轉(zhuǎn)移到新的EP 管內(nèi)，以二喹啉甲酸（bicinchoninic acid，BCA）方法測(cè)定樣品的濃度。分別制備10%的分離膠和5%的濃縮膠。蛋白在添加到上樣孔以前需要和等體積的2×上樣緩沖液煮沸5 min。設(shè)置80 V 的電壓電泳，觀察溴酚藍(lán)快要進(jìn)入分離膠時(shí)，將電壓設(shè)置為120 V 繼續(xù)電泳。電泳結(jié)束后，將硝酸纖維素（nitrocellulose，NC）膜根據(jù)凝膠的大小裁剪。利用三明治法進(jìn)行轉(zhuǎn)膜，轉(zhuǎn)膜電壓為90 V，轉(zhuǎn)膜90 min 以后，將NC 膜放在5%脫脂奶粉溶液中，低速室溫?fù)u床孵育2 h。將一抗和二抗分別用TBST 稀釋，一抗按照1∶1 000 稀釋，二抗按照1∶2 000稀釋。NC膜置于一抗中，室溫結(jié)合2 h，NC膜置于二抗中，室溫結(jié)合2 h。增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光（enhance chemiluminescence，ECL）顯色。Biod-Rad 顯影。分析條帶的灰度值，內(nèi)參為GAPDH，對(duì)蛋白進(jìn)行半定量分析。

1.7 GABPB1-IT1 靶向關(guān)系預(yù)測(cè)及熒光素酶系統(tǒng)鑒定靶向關(guān)系

利用starbase 數(shù)據(jù)庫對(duì)GABPB1-IT1 的靶基因進(jìn)行分析，通過熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)鑒定靶向關(guān)系。將野生型（wild type，WT）和突變型（mutant type，MUT）分別同miR-501 mimics、mimics control 共轉(zhuǎn)染到宮頸癌SiHa 細(xì)胞中，培養(yǎng)24 h 以后，熒光素酶活性測(cè)定試劑盒檢測(cè)熒光素酶活性變化。WT 和MUT 分別是含有GABPB1-IT1 結(jié)合位點(diǎn)的野生型熒光素酶報(bào)告載體和含有突變之后的GABPB1-IT1結(jié)合位點(diǎn)的突變型熒光素酶報(bào)告載體。收集培養(yǎng)24 h以后的Control組、Vector組、GABPB1-IT1組細(xì)胞，以qRT-PCR 方法檢測(cè)miR-501 表達(dá)水平，U6 為內(nèi)參，按照miRNA第一鏈cDNA合成試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，反轉(zhuǎn)錄體系包含：110 μL 的2×miRNA L-RT Solution mix、1 μL 的STem-loop primer、200ng 的RNA、5 μL 的miRNA L-RT Enzyme mix，加RNasefree water 至20 μL，放在16 ℃30 min，37 ℃30 min，85 ℃5 min。利用SYBR Premix Ex Taq miRNA kit進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR，PCR 體系包含：1 μL 的forward以及reverse primer、12.5 μL 的SYBR Premix Ex Taq II、1 μL 的cDNA，加ddH2O 至20 μL，在95 ℃30 s，95 ℃5 s，60 ℃30 s，55 ℃30 s，共40 個(gè)循環(huán)。引物序列為：miR-501 上游（5’-3’）AATGCACCCGGGCAAGGATTCT，下游（3’-5’）AGAATCCTTGCCCGGGTGCATT；U6 上游（5’-3’）GCTTCGGCAGCACATATACT，下游（3’-5’）GTGCAGGGTCCGAGGTATTC。

1.8 miR-501的逆轉(zhuǎn)作用

宮頸癌SiHa 細(xì)胞中分別轉(zhuǎn)染pcDNA-GABPB1-IT1、miR-501 mimics 和pcDNA-GABPB1-IT1、mimics control，記 為GABPB1-IT1+miR-501 組 和GABPB1-IT1+miR-NC 組。以GABPB1-IT1+miRNC 組為參照，按照“1.2”項(xiàng)中qRT-PCR 方法、“1.4”項(xiàng)中CCK-8、“1.5”項(xiàng)中Transwell 小室、“1.6”項(xiàng)中Western blot 方法分別檢測(cè)miR-501 表達(dá)水平、增殖、遷移侵襲和MMP-2、MMP-9、N-cadherin、E-cadherin蛋白表達(dá)水平。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 21.0 軟件分析進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，兩組均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，多組均數(shù)比較采用單因素方差分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 GABPB1-IT1在宮頸癌細(xì)胞中相對(duì)低表達(dá)

宮頸癌HeLa、Caski、SiHa 細(xì)胞中GABPB1-IT1表達(dá)水平低于正常宮頸上皮Ect1/E6E7 細(xì)胞（P＜0.05）。宮頸癌HeLa、Caski 細(xì)胞中GABPB1-IT1 表達(dá)水平高于宮頸癌SiHa 細(xì)胞（P＜0.05），見表1。GABPB1-IT1在宮頸癌細(xì)胞中相對(duì)低表達(dá)。選擇表達(dá)水平最低的宮頸癌SiHa細(xì)胞作后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

表1 宮頸癌HeLa、Caski、SiHa 細(xì)胞和正常宮頸上皮Ect1/E6E7細(xì)胞中GABPB1-IT1表達(dá)水平

表1 宮頸癌HeLa、Caski、SiHa 細(xì)胞和正常宮頸上皮Ect1/E6E7細(xì)胞中GABPB1-IT1表達(dá)水平

與Ect1/E6E7比較，*P＜0.05；與SiHa比較，#P＜0.05。

2.2 pcDNA-GABPB1-IT1上調(diào)宮頸癌SiHa細(xì)胞中GABPB1-IT1表達(dá)水平

與Control組、Vector組比較，GABPB1-IT1組宮頸癌SiHa 細(xì)胞中GABPB1-IT1 表達(dá)水平升高（P＜0.05），見表2。pcDNA-GABPB1-IT1上調(diào)宮頸癌Si-Ha細(xì)胞中GABPB1-IT1表達(dá)水平。

表2 pcDNA-GABPB1-IT1 轉(zhuǎn)染以后宮頸癌SiHa 細(xì)胞中GABPB1-IT1表達(dá)水平

表2 pcDNA-GABPB1-IT1 轉(zhuǎn)染以后宮頸癌SiHa 細(xì)胞中GABPB1-IT1表達(dá)水平

與Control組和Vector組比較，*P＜0.05。

2.3 上調(diào)GABPB1-IT1對(duì)宮頸癌SiHa細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響

與Control、Vector 組比較，GABPB1-IT1 組宮頸癌SiHa 細(xì)胞存活率降低，細(xì)胞遷移和侵襲數(shù)目減少，細(xì)胞中MMP-2、MMP-9、N-cadherin蛋白表達(dá)水平降低，E-cadherin蛋白表達(dá)水平升高（P＜0.05），見圖1，表3。上調(diào)GABPB1-IT1降低宮頸癌SiHa細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力。

表3 上調(diào)GABPB1-IT1對(duì)宮頸癌SiHa細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響

表3 上調(diào)GABPB1-IT1對(duì)宮頸癌SiHa細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響

與Control組和Vector組比較，*P＜0.05。

圖1 上調(diào)GABPB1-IT1對(duì)宮頸癌SiHa細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響

2.4 GABPB1-IT1靶向下調(diào)miR-501表達(dá)

生物信息學(xué)軟件發(fā)現(xiàn)，GABPB1-IT1 和miR-501存在互補(bǔ)結(jié)合位點(diǎn)，并且miR-501 mimics和WT共轉(zhuǎn)染以后的細(xì)胞熒光素酶活性降低；與Control組、Vector組比較，GABPB1-IT1組宮頸癌SiHa細(xì)胞中miR-501表達(dá)水平降低（P＜0.05），見圖2，表4，表5。

表4 熒光素酶活性

表4 熒光素酶活性

與mimics control組比較，*P＜0.05。

表5 上調(diào)GABPB1-IT1后宮頸癌SiHa細(xì)胞中miR-501水平

表5 上調(diào)GABPB1-IT1后宮頸癌SiHa細(xì)胞中miR-501水平

與Control組和Vector組比較，*P＜0.05。

圖2 GABPB1-IT1和miR-501靶向結(jié)合位點(diǎn)

2.5 miR-501 逆轉(zhuǎn)GABPB1-IT1 對(duì)宮頸癌SiHa 細(xì)胞增殖、遷移和侵襲作用

與GABPB1-IT1+miR-NC 組比較，GABPB1-IT1+miR-501組宮頸癌SiHa細(xì)胞中miR-501水平升高，細(xì)胞存活率、細(xì)胞遷移數(shù)目和侵襲數(shù)目均升高，細(xì)胞中MMP-2、MMP-9、N-cadherin 蛋白表達(dá)水平升高，E-cadherin 蛋白表達(dá)水平降低（P＜0.05），見圖3，表6。miR-501 逆轉(zhuǎn)GABPB1-IT1 對(duì)宮頸癌Si-Ha細(xì)胞增殖、遷移和侵襲作用。

圖3 miR-501逆轉(zhuǎn)GABPB1-IT1對(duì)宮頸癌SiHa細(xì)胞增殖、遷移和侵襲作用

表6 miR-501逆轉(zhuǎn)GABPB1-IT1對(duì)宮頸癌SiHa細(xì)胞增殖、遷移和侵襲作用

表6 miR-501逆轉(zhuǎn)GABPB1-IT1對(duì)宮頸癌SiHa細(xì)胞增殖、遷移和侵襲作用

與GABPB1-IT1+miR-NC組比較，*P＜0.05。

3 討論

lncRNA 是不具備編碼蛋白質(zhì)作用的轉(zhuǎn)錄本，也有一小部分的lncRNA被證實(shí)可以編碼一些小的多肽，并且通過這些小多肽發(fā)揮功能[11]。相對(duì)于編碼蛋白質(zhì)基因，lncRNA 在組織中的表達(dá)豐度較低，并且有細(xì)胞和組織特異性，lncRNA 能夠作為骨架、誘餌、信號(hào)、向?qū)Вㄟ^轉(zhuǎn)錄以及轉(zhuǎn)錄后水平、表觀遺傳學(xué)水平發(fā)揮作用[12]。lncRNA參與人類疾病，其中腫瘤是人們研究的熱點(diǎn)之一。lncRNA 在腫瘤中的表達(dá)水平發(fā)生改變，lncRNA 通過影響腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、遷移等過程參與調(diào)控腫瘤的轉(zhuǎn)移和進(jìn)展[13]。在非小細(xì)胞肺癌中發(fā)現(xiàn)，GABPB1-IT1 表達(dá)下調(diào)促進(jìn)腫瘤進(jìn)展，GABPB1-IT1 可能是一個(gè)腫瘤抑制因子[8]。本研究結(jié)果顯示，GABPB1-IT1在宮頸癌細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)，推測(cè)GABPB1-IT1 在宮頸癌中發(fā)揮抑制作用，進(jìn)一步通過細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，上調(diào)GABPB1-IT1 后的宮頸癌細(xì)胞存活率降低，證明GABPB1-IT1 具有抑制宮頸癌細(xì)胞增殖的作用，提示GABPB1-IT1 可能是一個(gè)宮頸癌抑制因子，這與以前的研究結(jié)果相符合，說明GABPB1-IT1 在腫瘤中可能發(fā)揮類似抑癌基因的作用。

很多腫瘤患者死亡的重要原因是腫瘤發(fā)生遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移，腫瘤細(xì)胞通過向周圍組織中遷移和侵襲形成新的病發(fā)灶，加重腫瘤進(jìn)展[14]。腫瘤轉(zhuǎn)移過程中，腫瘤細(xì)胞能夠產(chǎn)生大量的細(xì)胞外基質(zhì)降解酶，這些蛋白酶能夠分解細(xì)胞外基質(zhì)，為腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲提供條件[15]。細(xì)胞外基質(zhì)降解酶種類繁多，基質(zhì)金屬蛋白酶是常見的細(xì)胞外基質(zhì)降解酶，其含有多個(gè)蛋白成員，其中MMP-2 和MMP-9 是目前發(fā)現(xiàn)的與腫瘤轉(zhuǎn)移關(guān)系十分密切的細(xì)胞外基質(zhì)降解酶[16]。MMP-2和MMP-9在腫瘤中過度表達(dá)，MMP-2 和MMP-9 表達(dá)增多被認(rèn)為是腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力升高的標(biāo)志[17]。很多研究報(bào)道表明，上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）是腫瘤轉(zhuǎn)移的早期標(biāo)志事件，EMT水平升高后腫瘤轉(zhuǎn)移能力也增加[18]。EMT 被定義為上皮細(xì)胞特征消失而逐漸表現(xiàn)出間質(zhì)細(xì)胞特征的過程，在人體生理活動(dòng)如器官發(fā)育、組織修復(fù)等過程中發(fā)揮重要作用，EMT還參與心肌纖維化、腎組織纖維化等病理過程[19-20]。N-cadherin是一個(gè)間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志蛋白，其在腫瘤中高表達(dá)[21]。E-cadherin 是一個(gè)上皮細(xì)胞標(biāo)志蛋白，其在腫瘤中表達(dá)下調(diào)[22]。經(jīng)Transwell小室實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，上調(diào)GABPB1-IT1 后的宮頸癌細(xì)胞遷移和侵襲數(shù)目減少，推測(cè)GABPB1-IT1 具有抗宮頸癌細(xì)胞遷移和侵襲作用；經(jīng)Western blotting檢測(cè)定表明，上調(diào)GABPB1-IT1后的細(xì)胞中MMP-2和MMP-9蛋白表達(dá)水平降低，提示GABPB1-IT1 減少了宮頸癌細(xì)胞合成細(xì)胞外基質(zhì)降解酶，同時(shí)本研究還發(fā)現(xiàn)，上調(diào)GABPB1-IT1 后的宮頸癌細(xì)胞中E-cadherin 蛋白表達(dá)水平升高，N-cadherin蛋白表達(dá)水平降低，上調(diào)GABPB1-IT1降低了宮頸癌細(xì)胞EMT水平，提示上調(diào)GABPB1-IT1可能通過抑制細(xì)胞EMT、減少細(xì)胞合成細(xì)胞外基質(zhì)降解酶發(fā)揮抗腫瘤遷移和侵襲作用。

目前對(duì)lncRNA 發(fā)揮作用的機(jī)制還未完全闡明，已知其可以通過與miRNA 結(jié)合發(fā)揮生物學(xué)功能。lncRNA 以堿基互補(bǔ)的方式與miRNA 結(jié)合，最終影響miRNA的表達(dá)，參與不同的病理以及生理過程，一個(gè)lncRNA 可同時(shí)調(diào)控多個(gè)miRNA，同一個(gè)miRNA 可以同時(shí)受到多個(gè)lncRNA 的調(diào)控作用，細(xì)胞中各個(gè)基因也正是通過這種復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)最終影響細(xì)胞功能發(fā)揮[23]。本研究結(jié)果表明，GABPB1-IT1和miR-501存在互補(bǔ)結(jié)合位點(diǎn)，而且上調(diào)GABPB1-IT1后的宮頸癌細(xì)胞中miR-501表達(dá)水平下降，推測(cè)GABPB1-IT1 的作用機(jī)制可能與miR-501 有關(guān)。miR-501 是一個(gè)與人類腫瘤有關(guān)多功能小分子RNA，在肝癌、非小細(xì)胞肺癌、宮頸癌等腫瘤中表達(dá)上調(diào)，miR-501 能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和遷移[10,24-25]。本研究通過逆轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證GABPB1-IT1的作用機(jī)制是否與miR-501 有關(guān)，結(jié)果表明，miR-501 mimics 提高了上調(diào)GABPB1-IT1后的宮頸癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能能力，說明miR-501具有逆轉(zhuǎn)GABPB1-IT1 對(duì)宮頸癌細(xì)胞影響的作用，GABPB1-IT1通過miR-501參與宮頸癌進(jìn)展。

總而言之，GABPB1-IT1 在宮頸癌中可能發(fā)揮抑制作用，上調(diào)GABPB1-IT1 表達(dá)降低宮頸癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲能力，機(jī)制與靶向下調(diào)miR-501 有關(guān)。本研究結(jié)果為分子靶向治療宮頸癌提供了參考資料，為研究GABPB1-IT1 在宮頸癌中的作用機(jī)制奠定了基礎(chǔ)，以后可進(jìn)一步探討GABPB1-IT1 靶向miR-501的下游機(jī)制。