張莉敏，常攀峰，馬志宏，孫春香，茍想珍，黨 巖

(甘肅省畜牧獸醫(yī)研究所，甘肅 平?jīng)?744000)

禿瘡花(俗稱紅荗草，勒馬回)是罌粟科(Papaveraceae)禿瘡花屬(Dicranostigma) 的植物，在我國主要分布于甘肅、西藏、青海、陜西和四川等地。據(jù)文獻記載：味苦、澀、性寒，涼，有小毒；有清熱解毒、消腫止痛、殺蟲、治療扁桃體炎、結(jié)核、疥癬、外傷、羊口瘡等疾病。從上世紀(jì)80年代開始，我國許多研究者對禿瘡花的化學(xué)成分和禿瘡花的藥理作用進行了研究。1980年李鎮(zhèn)從禿瘡花中分離出異紫堇堿；1981年暢行若等從禿瘡花中提取了4種結(jié)晶，經(jīng)鑒定分別為：異紫堇堿、原阿片堿、紫堇堿、二十九碳醇；盧賢昭等研究表明，禿瘡花對結(jié)核病有良好的治愈作用，治愈療效79.5%以上. 陳正山、龔艷妮等的研究證明禿瘡花對動物免疫系統(tǒng)和腫瘤均有作用。

以甘肅隴東特色藥用植物禿瘡花(俗稱紅荗草，勒馬回)為藥材，研制具有抗菌消炎及抗病毒的獸醫(yī)臨床制劑，項目以禿瘡花制劑生物學(xué)功能為指標(biāo)，用物理化學(xué)提純法、細菌計數(shù)法和正交試驗設(shè)計等對制劑進行篩選，并開展了禿瘡花制劑工藝、藥效學(xué)、藥物代謝動力學(xué)以及化學(xué)成分的研究工作和臨床應(yīng)用試驗。本文僅就禿瘡花外用噴劑的篩選實驗進行論述，其它實驗部分另文發(fā)表。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器 電熱培養(yǎng)箱 、電子分析天平等使用甘肅省畜牧獸醫(yī)研究所中心實驗室儀器。

1.1.2 菌株 副傷寒沙門氏菌為甘肅省畜牧獸醫(yī)研究所實驗室保存的標(biāo)準(zhǔn)菌株 。

1.1.3 藥材 禿瘡花采自于甘肅省平?jīng)鍪?，由中國科學(xué)院蘭州化學(xué)物理研究所天然藥物實驗室鑒定；連翹、魚腥草、黃芩、黃柏、金銀花、大青葉、甘草和蒼術(shù)采購于甘肅省醫(yī)藥公司，由中國科學(xué)院蘭州化學(xué)物理研究所天然藥物實驗室鑒定。

1.1.4 實驗試劑 牛肉膏 、葡萄糖、蛋白胨、磷酸氫二鉀 、瓊脂 、酚紅 、N aO H 、N aCl購自于上海生工 ，其余試劑均為國產(chǎn)或進口分析純 ；禿瘡花唇膚康噴劑B液由甘肅省畜牧獸醫(yī)研究所制備。

1.2 方法

1.2.1 連翹、魚腥草、黃芩和黃柏交互作用篩選試驗 以正交實驗表L16(45)為水平因素組合進行不同制劑配制，將實驗用的副傷寒沙門氏菌株進行純化后，接種于THB營養(yǎng)肉湯中，37℃或24℃培養(yǎng)24 h后，分別用平皿計數(shù)法進行計數(shù)配制成10 000 cfu/mL的菌株懸液；將菌株懸液100 μL,分別加入6 mL各制劑與THB營養(yǎng)肉湯按1∶1的比例制備的培養(yǎng)肉湯中,37℃培養(yǎng)16 h后用平皿計數(shù)法進行計數(shù)。最后計算抑制率。

1.2.2 金銀花、大青葉、甘草和蒼術(shù)交互作用篩選試驗 在連翹、魚腥草、黃芩和黃柏交互作用實驗的基礎(chǔ)上，以連翹50 g、魚腥草25 g、黃芩37.5 g和黃柏37.5 g為基礎(chǔ)藥，用上面的正交實驗表L16(45)為水平因素組合進行不同制劑配制，將實驗用的副傷寒沙門氏菌株進行純化后，接種于THB營養(yǎng)肉湯中，37℃或24℃培養(yǎng)24 h后，分別用平皿計數(shù)法進行計數(shù)配制成10 000 cfu/mL的菌株懸液；將菌株懸液100 μL,分別加入6 mL各制劑與THB營養(yǎng)肉湯按1∶1的比例制備的培養(yǎng)肉湯中,37℃培養(yǎng)16 h后用平皿計數(shù)法進行計數(shù)。最后計算抑制率。

1.2.3 禿瘡花噴劑相互作用篩選試驗 以禿瘡花唇膚康噴劑相互作用實驗結(jié)果表中的配方，進行不同配方制劑配制，將不同配方的藥物配成400 mL的水溶液用于實驗。將實驗用的副傷寒沙門氏菌株進行純化后，接種于THB營養(yǎng)肉湯中，37℃或24℃培養(yǎng)24 h后，分別用平皿計數(shù)法進行計數(shù)配制成10 000 cfu/mL的菌株懸液；將菌株懸液100 μL,分別加入6 mL各制劑與THB營養(yǎng)肉湯按1∶1的比例制備的培養(yǎng)肉湯中,37℃培養(yǎng)16h后用平皿計數(shù)法進行計數(shù)。最后計算抑制率。

2 結(jié)果

2.1 連翹、魚腥草、黃芩和黃柏交互作用篩選試驗結(jié)果

從連翹、魚腥草、黃芩和黃柏交互作用實驗結(jié)果可以看出：從因素上講，連翹>黃芩>黃柏>魚腥草；從水平上講，連翹的第4水平最好，黃芩的第2水平最好，黃柏的第3水平最好，魚腥草第3水平最好。根據(jù)正交實驗的原則，我們選擇連翹50g、魚腥草25g、黃芩37.5g和黃柏37.5g為進一步進行禿瘡花唇膚康噴劑A液篩選的比例基礎(chǔ)。

表1 連翹、魚腥草、黃芩和黃柏交互作用水平因素表 g

表2 連翹、魚腥草、黃芩和黃柏交互作用實驗結(jié)果表

2.2 金銀花、大青葉、甘草和蒼術(shù)交互作用篩選試驗結(jié)果

從金銀花復(fù)方中藥外用制劑中的金銀花、板藍根、甘草和蒼術(shù)交互作用實驗結(jié)果可以看出：從因素上講，金銀花>大青葉>甘草>蒼術(shù)；從水平上講，金銀花的第4水平最好，大青葉的第4水平最好，甘草的第3水平最好，蒼術(shù)第3水平最好但與第2水平差別不大。根據(jù)正交實驗的原則，結(jié)合連翹、魚腥草、黃芩、黃柏交互作用實驗結(jié)果和金銀花、大青葉、甘草和蒼術(shù)交互作用實驗結(jié)果，我們篩選出：連翹3-4份、魚腥草2-3份、黃芩3-4份、黃柏3-4份、金銀花3-4份、大青葉3-4份、甘草2-3份和蒼術(shù)2-3份為禿瘡花唇膚康噴劑A液的基礎(chǔ)比例配方。

表3 金銀花、大青葉、甘草和蒼術(shù)交互作用水平因素表

表4 禿瘡花唇膚康噴劑A液交互作用實驗結(jié)果表

2.3 禿瘡花噴劑相互作用篩選試驗結(jié)果

為確保實驗結(jié)果明顯，本實驗將應(yīng)用濃度進行了2倍的稀釋，雖然抑菌率低但能更清楚地看出各配方的抑菌率之間的差異。從禿瘡花唇膚康噴劑相互作用實驗結(jié)果看，禿瘡花唇膚康噴劑(禿瘡花唇膚康噴劑A液+禿瘡花唇膚康噴劑B液)抑制副傷寒沙門氏菌的效果比禿瘡花唇膚康噴劑B液和禿瘡花唇膚康噴劑A液好；禿瘡花唇膚康噴劑配方4抑制副傷寒沙門氏菌的作用最好，因此將配方4篩選為禿瘡花唇膚康噴劑的基礎(chǔ)比例配方。

表5 禿瘡花唇膚康噴劑相互作用實驗結(jié)果表

3 討論

目前在我國綠色環(huán)保戰(zhàn)略實施的背景下，社會廣泛關(guān)注食品安全，呼喚無公害產(chǎn)品及綠色畜產(chǎn)品生產(chǎn)，尤其是應(yīng)用于食源性動物藥品迅速轉(zhuǎn)向低毒、無殘留、高效等方面發(fā)展。本項目以傳統(tǒng)中草藥特有的低毒易代謝的藥物成分解決動物外用消炎藥物的環(huán)境污染問題；以傳統(tǒng)中草藥特有的抗微生物的成分及作用的多樣性和協(xié)同性解決病原微生物的藥物耐藥性問題；以傳統(tǒng)中草藥特有的藥物有效成分的安全性和對動物機體外損組織的免疫調(diào)節(jié)功能解決動物皮膚損傷組織細胞的快速修復(fù)生長問題。

金銀花、蒼術(shù)、連翹、黃芩、黃柏、大青葉、魚腥草和甘草多是清熱解毒類中草藥，這些中草藥中多含有有機酸、生物堿、苷類或甙類、多糖、黃酮、甾醇、揮發(fā)油和微量元素等，均有抗微生物和抗炎的作用，同時這些中草藥之間有較好的協(xié)同作用。上述這些中草藥不僅具有良好抗微生物作用，而且有調(diào)節(jié)動物機體免疫系統(tǒng)的機能從而促使動物機體的傷口愈合。中草藥中的成分易于分解代謝，對人類的綠色環(huán)保和公共衛(wèi)生有重要的意義。試驗結(jié)果表明，金銀花、蒼術(shù)、連翹、黃芩、黃柏、板藍根、魚腥草、甘草和禿瘡花制劑共用有良好的抗微生物、抗炎和促進傷口愈合協(xié)同作用。我所多年從事禿瘡花等中草藥的研究工作，在研制禿瘡花沖劑、針劑、擦劑和口服膠囊的基礎(chǔ)上，研制禿瘡花唇膚康噴劑，以解決獸醫(yī)臨床操作困難，使治療在確保療效的基礎(chǔ)上變的省時省力。

按中草藥君臣佐使的復(fù)方原則，禿瘡花唇膚康噴劑用清熱解毒抗微生物類藥禿瘡花為君；以清熱解毒抗微生物類藥金銀花、連翹、黃芩為臣，使禿瘡花唇膚康噴劑的解毒抗微生物作用范圍增大和作用效果增強；以清熱解毒抗微生物類藥黃柏、魚腥草為臣使禿瘡花唇膚康噴劑的抗炎癥抗?jié)兗翱刮⑸镒饔眯Ч鰪?；以利濕消炎類藥蒼術(shù)為佐，與黃柏等協(xié)同增強復(fù)方的利濕抑酸抑瘍及保護粘膜作用，以溫性清熱解毒類藥甘草為使調(diào)和君臣佐藥，使復(fù)方的抗炎康復(fù)作用效果增強及利于藥物有效成分到達病位和保護粘膜。